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苓桂术甘汤促进星形胶质细胞内化降解β淀粉样蛋白机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 1-8页

作者：高敏陈晓婧田清蓉凌云周西彬周春祥南京中医药大学中医学院中西医结合学院南京210046

目的:通过观察苓桂术甘汤(LGZGT)含药血清对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导大鼠原代星形胶质细胞(AS)阿尔茨海默病(AD)病理模型的影响,探讨LGZGT对Aβ的吞噬及降解作用。方法:以Aβ_(1-42)诱导AS建立AD模型,实验分为正常组、模型组、... 详细信息

目的:通过观察苓桂术甘汤(LGZGT)含药血清对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导大鼠原代星形胶质细胞(AS)阿尔茨海默病(AD)病理模型的影响,探讨LGZGT对Aβ的吞噬及降解作用。方法:以Aβ_(1-42)诱导AS建立AD模型,实验分为正常组、模型组、LGZGT低、中、高剂量(LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H)含药血清组(1.2、2.4、4.8 g·kg^(-1))、盐酸多奈哌齐含药血清组(0.5 mg·kg^(-1)),模型组加入Aβ_(1-42),终浓度为10μmol·L-1,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组在模型组的基础上均加入10%的含药血清。通过细胞增殖活力检测(CCK-8)试剂盒检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH活力;用倒置显微镜观察各组细胞形态;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Aβ相关降解酶胰岛素降解酶(IDE)、组织蛋白酶D(CTSD)的表达;采用免疫荧光法测定组织蛋白酶B(CTSB)的荧光强度;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞Aβ_(1-42)含量。结果:与空白组比较,各组AS活力下降,且不同浓度的Aβ_(1-42)对AS的增殖具有抑制作用;给药后,与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞存活率明显增加(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组的细胞的LDH活力明显升高(P<0.05),且细胞胞体肥大肿胀,突起增多且延长,细胞相互聚集成团,提示细胞损伤较为明显;与模型组比较,盐酸多奈哌齐、LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组细胞LDH活力显著降低(P<0.01);给药后,LGZGT-M组、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞体肿胀有所改善,细胞突起短,细胞聚集结团减少;与正常组比较,模型组IDE、CTSD的表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-M、LGZGT-H含药血清组能够明显上调IDE的表达(P<0.05);与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组均能明显上调CTSD的表达(P<0.01);与正常组比较,模型组的CTSB的平均荧光强度明显降低(P<0.05),与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组CTSB平均荧光强度增强(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组的细胞胞内Aβ_(1-42)含量升高(P<0.05);给药后,与模型组比较,LGZGT-L、LGZGT-M、LGZGT-H、盐酸多奈哌齐含药血清组细胞胞内Aβ_(1-42)含量显著降低(P<0.01),LGZGT含药血清以剂量依赖性的形式降低Aβ_(1-42)。结论:LGZGT对Aβ_(1-42)诱导的AS具有保护作用,还可促进Aβ的降解,其机制可能与减轻Aβ毒性,增强细胞活力,促进IDE、CTSD、CTSB的表达及恢复溶酶体的功能相关。

关键词：阿尔茨海默病(AD) 星形胶质细胞(AS) 苓桂术甘汤(LGZGT) β淀粉样蛋白(Aβ) 痰饮

白头翁汤正丁醇提取物通过激活BMP信号通路治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1762-1773页

作者：蒋晓娟王亚东孙娟马克龙吴大强邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及... 详细信息

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及BEPD低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组小鼠连续7 d自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立UC模型,然后进行不同浓度的BEPD和美沙拉嗪灌胃治疗。记录各组小鼠体质量和疾病活动指数(disease activity index,DAI)。处死小鼠后,取结肠组织进行组织学分析,采用阿利新蓝/过碘酸雪夫(AB/PAS)染色法检测杯状细胞的数量及黏液分泌状况,免疫组化法检测结肠组织中增殖标志物ki67、活化半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、粘蛋白2(mucin 2,Muc2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达,免疫荧光法检测结肠组织中紧密连接蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的水平,Western blot检测小鼠结肠组织中与BMP通路相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小鼠结肠杯状细胞分化相关基因表达。在体外细胞学实验中,进一步验证BEPD含药血清对脂多糖(LPS)诱导下的LS174T杯状细胞屏障功能的保护作用及其机制。结果表明,BEPD显著缓解UC小鼠的一般症状,恢复杯状细胞分化功能,促进Muc2分泌和紧密连接蛋白的表达,并抑制炎症因子的分泌,同时激活BMP信号通路。因此,该研究提示BEPD可能通过激活BMP信号通路发挥治疗UC的作用,为药物干预UC提供了新的思路。

关键词：溃疡性结肠炎白头翁汤正丁醇提取物肠黏膜屏障骨形态发生蛋白(BMP)信号通路杯状细胞

ecDNA在小细胞肺癌致癌相关性、异质性和耐药性的机制研究进展

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中国肿瘤临床 2024年第4期51卷 203-208页

作者：杜威陆瑶陆亚兴(综述) 董秀娟(审校) 海南医学院中医学院中西医临床医学系海口市571000 广州医科大学中西医临床医学系

随着染色体外DNA(extrachromosomal DNA,ecDNA)研究的深入,研究发现ecDNA大多只存在于肿瘤细胞内,并且在肿瘤异质性和耐药中起着关键作用。ecDNA存在于多种恶性肿瘤中,但在正常细胞中极少出现。因为ecDNA具有强大的癌基因扩增和动态改... 详细信息

随着染色体外DNA(extrachromosomal DNA,ecDNA)研究的深入,研究发现ecDNA大多只存在于肿瘤细胞内,并且在肿瘤异质性和耐药中起着关键作用。ecDNA存在于多种恶性肿瘤中,但在正常细胞中极少出现。因为ecDNA具有强大的癌基因扩增和动态改变能力,故肿瘤细胞中含有ecDNA的患者临床预后更差。目前的研究已经证实小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者癌细胞中存在ecDNA。本文综述了ecDNA的形成机制并以此为基础讨论了ecDNA在癌细胞中扩增的过程,其促进肿瘤生长,复发和转移的机制以及ecDNA与SCLC高耐药性的关系。最后本文总结了ecDNA富集的SCLC的治疗方向,为未来进一步的研究提供一定指导。

关键词： ecDNA 小细胞肺癌肿瘤异质性癌基因扩增耐药性

基于GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对高糖合并LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第3期30卷 64-74页

作者：彭岚玉姚敬心李钰佳李定祥刘迅邓奕辉湖南中医药大学中西医结合学院长沙410208 湖南中医药大学中医学院长沙410208

目的:探讨左归降糖通脉方(ZJTP)对高糖合并脂多糖(LPS)损伤后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响及作用机制。方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平确定LPS最... 详细信息

目的:探讨左归降糖通脉方(ZJTP)对高糖合并脂多糖(LPS)损伤后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响及作用机制。方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平确定LPS最适损伤浓度及作用时间、ZJTP含药血清的最佳作用浓度。将HUVECs分为空白组、模型组、ZJTP含药血清组、短链脂肪酸(SCFAs)混合液组。采用ELISA检测内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和TNF-α的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测G蛋白偶联受体43(GPR43)、β-抑制蛋白-2(β-arrestin-2)、核转录因子-κB抑制因子α(IκBα)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达;免疫荧光法(IF)观察NF-κB p65入核情况。运用小干扰核糖核酸(siRNA)的方法观察GPR43在炎性损伤调控中的作用。将干扰后的细胞分为空载体组、ZJTP含药血清组、Si-GPR43组、Si-GPR43+ZJTP含药血清组。ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western blot检测通路蛋白表达;IF观察NF-κB p65入核情况。结果:最适造模条件为1 mg·L^(-1) LPS作用24 h;最佳药物干预条件为5%的ZJTP含药血清作用24 h。与空白组比较,模型组ET-1含量显著升高,NO含量显著下降(P<0.01);炎症因子水平显著上升(P<0.01);GPR43和IκBα蛋白表达量下降,β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著升高(P<0.01);NF-κB p65蛋白由核外转移至核内(P<0.01)。与模型组比较,ZJTP含药血清组ET-1含量下降,NO含量升高(P<0.05);炎症因子水平下降(P<0.05);GPR43和IκBα蛋白表达升高,β-arrestin-2和NF-κB p65表达下降(P<0.05);NF-κB p65由核外转移至核内的数量减少(P<0.01)。机制研究发现,与Si-GPR43组比较,ZJTP含药血清干预后IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著下降(P<0.01);GPR43和IκBα蛋白表达量显著上升(P<0.01),β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著下降(P<0.01);NF-κB p65由核外转移至核内数量减少(P<0.01)。结论:ZJTP对高糖合并LPS诱导炎性损伤的HUVECs具有保护作用,其机制可能与调控GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路有关。

关键词：人脐静脉内皮细胞炎性损伤左归降糖通脉方 G蛋白偶联受体43 核转录因子-κB

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四川大学学报（医学版） 2024年第3期55卷 619-629页

作者：薛秋云黄玉蓉李慧李辰程成龙王玉亭缪成贵安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012

目的基于分泌Frizzled相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2, SFRP2)-Wnt/β-catenin信号通路探讨催乳颗粒(Cuiru Keli, CRKL)治疗产后缺乳的效果及其作用机制。方法通过向分娩后第3天的雌鼠灌胃2 mL1.6 mg/mL甲磺酸溴隐亭... 详细信息

目的基于分泌Frizzled相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2, SFRP2)-Wnt/β-catenin信号通路探讨催乳颗粒(Cuiru Keli, CRKL)治疗产后缺乳的效果及其作用机制。方法通过向分娩后第3天的雌鼠灌胃2 mL1.6 mg/mL甲磺酸溴隐亭来建立产后缺乳大鼠模型。将产仔时间差小于48 h的雌性大鼠随机分为7组:正常组(不造模,不给药);模型组;CRKL低剂量组(模型组+3 g/kg CRKL);CRKL中剂量组(模型组+6 g/kg CRKL)、CRKL高剂量组(模型组+9 g/kg CRKL);阳性药组(模型组+3 mg/kg多潘立酮);NC组(模型组+生理盐水);每组6只。除正常组和模型组外,其余5组按分组药物和剂量连续灌胃给药,每天1次,共10 d。取7组大鼠,测量10 d仔鼠总窝质量变化、HE染色观察乳腺病理变化。取除阳性对照组之外的6组大鼠,HE染色观察垂体病理变化,检测血清中PRL含量(ELISA)、乳腺组织(mammary tissue, MT)中PRLR的表达(免疫组化染色)、MT中乳汁合成相关基因mRNA的表达(RT-qPCR),然后以网络药理学和分子对接研究CRKL对产后缺乳的治疗作用和机制,特别是其是否通过SFRP2-Wnt/β-catenin信号通路治疗产后缺乳;再通过检测相关通路基因(RT-qPCR)和蛋白(Western blot)进行验证。然后进行细胞实验验证:取鉴定后的大鼠乳腺上皮细胞(rat mammary epithelial cell, RMEC),将RMEC分为4组:正常组(原代培养的RMEC,不处理)、 SFRP2过表达组(原代培养的RMEC+SFRP2过表达载体)、 SFRP2过表达+CRKL组(SFRP2过表达组+10%含药血清)、阴性对照组(原代培养的RMEC+空载体)。RT-qPCR检测过表达SFRP2后CRKL对于乳汁合成相关基因FASN、CSN2和GLUT1 mRNA表达的影响。结果与模型组相比,低、中、高剂量的CRKL均可以提高仔鼠10 d体质量增加量(P结合能力。与模型组相比,低、中、高剂量的CRKL均抑制体内SFRP2基因的表达(P<0.01),激活了产后缺乳大鼠乳腺中的Wnt/β-catenin信号通路中CCND1、c-Myc的基因和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。细胞实验表明,过表达SFRP2后,与正常组相比,乳汁合成相关基因FASN、CSN2和GLUT1的mRNA水平也降低(P<0.01)。加入含药血清后,上述基因的表达上调(与SFRP2过表达组相比,P<0.01)。结论 CRKL通过SFRP2-Wnt/β-catenin信号通路治疗产后缺乳,SFRP2可能成为产后缺乳诊断和治疗的新靶点。这揭示了CRKL治疗产后缺乳的新机制,并促进了其临床推广。

关键词：催乳颗粒产后缺乳大鼠模型网络药理乳腺上皮细胞作用机制中医药

microRNA在子宫内膜异位症炎症和纤维化中的作用机制研究进展

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中国医师杂志 2024年第4期26卷 617-621页

作者：杨惠喻翠萍李冰冰济宁医学院中西医结合学院济宁272000

子宫内膜异位症(EM)是育龄期女性常见的妇科疾病,其发病机制目前尚未完全阐明。EM是一种慢性炎症性反应,长期的炎症渗出又会导致纤维化粘连的产生。炎症反应和纤维化形成是EM的主要病理特征,也是导致疼痛和不孕的主要原因。研究显示在E... 详细信息

子宫内膜异位症(EM)是育龄期女性常见的妇科疾病,其发病机制目前尚未完全阐明。EM是一种慢性炎症性反应,长期的炎症渗出又会导致纤维化粘连的产生。炎症反应和纤维化形成是EM的主要病理特征,也是导致疼痛和不孕的主要原因。研究显示在EM中存在某些差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA)参与炎症和纤维化过程,并发挥重要调节作用。本文就miRNA在EM炎症和纤维化病理过程中的作用机制进行综述,旨在为探究EM发病机制和诊疗寻找新的方向和思路。

关键词：微RNAs 子宫内膜异位症炎症纤维化

中药通过免疫调节抗外阴阴道念珠菌病研究进展

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中草药 2024年第13期55卷 4588-4597页

作者：吴惠吴大强邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012

外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)发生率近年来呈上升趋势,氟康唑等一线抗真菌药物因长期使用导致菌株耐药现象日益严重。中药治疗VVC具有低不良反应和低复发率、不易耐药等优势,其对于VVC的治疗除了一定程度直接作用于... 详细信息

外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)发生率近年来呈上升趋势,氟康唑等一线抗真菌药物因长期使用导致菌株耐药现象日益严重。中药治疗VVC具有低不良反应和低复发率、不易耐药等优势,其对于VVC的治疗除了一定程度直接作用于菌体外,主要通过调节机体免疫功能发挥效应。通过对近年来中药从免疫调节角度对VVC作用机制的最新研究进展进行综述,为中药干预VVC提供新的思路或借鉴。

关键词：外阴阴道念珠菌病免疫调节固有免疫适应性免疫苦参蛇床子姜黄素

苓桂术甘汤对心肌梗死后小鼠心肌纤维化及Lats1/Yap信号通路的影响

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中国中药杂志 2024年第17期49卷 4702-4710页

作者：徐少华王舒舒任涵赵婉竹周鹏王靓黄金玲安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

观察苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后小鼠心肌纤维化(MF)及心肌组织大肿瘤抑制激酶1(Lats1)/Yes相关蛋白(Yap)信号通路的影响,探讨其抑制MF的作用和机制。采用冠状动脉左前降支结扎法构建MI后小鼠缺血模型,造模24 h后,连续干预6周。采用小... 详细信息

观察苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后小鼠心肌纤维化(MF)及心肌组织大肿瘤抑制激酶1(Lats1)/Yes相关蛋白(Yap)信号通路的影响,探讨其抑制MF的作用和机制。采用冠状动脉左前降支结扎法构建MI后小鼠缺血模型,造模24 h后,连续干预6周。采用小动物超声成像系统检测小鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期内径(LVIDd);采用HE及Masson染色观察小鼠心肌组织病理学变化;采用ELISA法检测小鼠血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用RT-qPCR法检测小鼠心肌组织Lats1、Yap、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平;采用Western blot法检测小鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、Lats1、Yap、磷酸化Yap(phosphorylation-Yap,p-Yap)、细胞核Yap(n-Yap)蛋白表达。与假手术组比较,模型组小鼠LVEF、LVFS水平显著降低,LVIDd、LVIDs水平显著升高(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及胶原纤维大量沉积;小鼠血清CK-MB、LDH水平显著升高(P<0.01);心肌组织Lats1 mRNA水平显著降低(P<0.01),Yap、CTGF mRNA水平显著升高(P<0.01);心肌组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP2、Yap、n-Yap蛋白表达显著升高(P<0.01),Lats1、TIMP1、p-Yap蛋白表达及p-Yap/Yap比值显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经高剂量苓桂术甘汤干预后,小鼠LVEF、LVFS水平显著升高,LVIDd、LVIDs水平显著降低(P<0.01);心肌细胞排列较整齐,心肌纤维断裂及胶原纤维沉积明显减少;小鼠血清CK-MB、LDH水平显著降低(P<0.01);心肌组织Lats1 mRNA水平显著升高(P<0.01),Yap、CTGF mRNA水平显著降低(P<0.01);心肌组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、MMP2、Yap、n-Yap蛋白表达显著降低(P<0.01),Lats1、TIMP1、p-Yap蛋白表达及p-Yap/Yap比值显著升高(P<0.01)。苓桂术甘汤能够抑制MI后模型小鼠MF,改善小鼠心功能,此作用与其激活Lats1/Yap信号通路密切相关。

关键词：苓桂术甘汤心肌梗死心肌纤维化 Lats1/Yap信号通路

基于动态知识图谱的中医疫病古籍知识演化研究

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现代情报 2024年

作者：沈旺于琳冯欣陈晓美温雯婷吉林大学商学与管理学院南京中医药大学中医学院.中西医结合学院

[目的/意义] 通过构建动态知识图谱实现中医疫病古籍知识动态组织与可视化，并依此挖掘中医疫病古籍隐性知识。[方法/过程] 构建融合动态元素的中医疫病古籍知识元语义描述模型，以温病学派为例，基于知识元语义描述模型和深度学习技术... 详细信息

[目的/意义] 通过构建动态知识图谱实现中医疫病古籍知识动态组织与可视化，并依此挖掘中医疫病古籍隐性知识。[方法/过程] 构建融合动态元素的中医疫病古籍知识元语义描述模型，以温病学派为例，基于知识元语义描述模型和深度学习技术进行知识抽取并构建动态知识图谱，结合知识计算方法对温病学派疫病古籍知识进行组方用药规律演化分析以及辩证发展规律探析。[结果/结论] 结果表明，随着时间推移，温病学派逐渐偏向使用甘苦寒类中药，各时期疫病症状描述较为一致，辩证理论日益扩充，研究揭示了中医疫病古籍知识演化发展规律并为中医古籍知识发现等相关研究提供新思路。

关键词：数字人文动态知识图谱知识演化知识元中医古籍