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miR-27a-3p激活MAPK信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

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中国组织工程研究 2024年

作者：李俊巩晶晶孙国斌郭睿丁杨强立娟张晓莉方占海宁夏回族自治区人民医院(宁夏医科大学附属自治区人民医院) 烧伤整形外科宁夏回族自治区人民医院(宁夏医科大学附属自治区人民医院) 神经外科

背景：目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程，且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展，因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的：探究miR-27a-3p通过丝裂原活... 详细信息

背景：目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程，且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展，因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的：探究miR-27a-3p通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：收集皮肤标本并分别分离出原代成纤维细胞，倒置显微镜观察原代细胞，免疫荧光予以验证；采用qRT-PCR检测miR-27a-3p在组织中的相对表达水平；利用数据库预测miR-27a-3p的靶基因，再将预测的靶基因进行基因本体功能富集分析及京都基因与基因组百科全书生物通路富集分析；设置分组为：空白对照组、阴性对照组、miR-27a-3p过表达组、miR-27a-3p抑制组、miR-27a-3p过表达+p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+细胞外信号调节蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+c-Jun氨基末端激酶抑制剂组，Western blot检测细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38激酶总量及其磷酸化水平，采用CCK-8法和EdU检测细胞增殖情况。结果与结论：(1)与正常皮肤成纤维细胞相比，增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性更强(P <0.05)，增殖速度也更快(P <0.001)；(2)与正常皮肤相比，miR-27a-3p在增生性瘢痕中呈高表达(P <0.001)；(3)与阴性对照组相比，过表达miR-27a-3p能促进细胞的增殖活性(P <0.001)和增殖水平(P <0.001)；(4)与阴性对照组相比，敲低miR-27a-3p能抑制细胞的增殖活性(P <0.05)和增殖水平(P <0.001)；(5)与阴性对照组相比，过表达miR-27a-3p促进细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P <0.05)；与阴性对照组相比，敲减miR-27a-3p能抑制细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P <0.05)；(6)与miR-27a-3p过表达组相比，细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的特异性抑制剂可逆转miR-27a-3p对成纤维细胞的增殖活性(P <0.01)和增殖水平(P <0.001)；(7)提示miR-27a-3p通过激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。

关键词： miR-27a-3p 丝裂原活化蛋白激酶增生性瘢痕成纤维细胞增殖

LncRNA OIP5-AS1对卵巢上皮IOSE80表型转化的影响

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中国现代应用药学 2024年第5期41卷 649-656页

作者：宋琳琳孟焕然周丽娜刘瑞殷利军宁夏医科大学总医院妇科银川750001 宁夏回族自治区人民医院普外科银川750001

目的探索lncRNA OIP5-AS1对卵巢上皮细胞IOSE80发生增殖、迁移、凋亡、侵袭和周期的表型的变化及可能的机制。方法患者临床资料数据收集自TCGA数据库及GEO数据库,R包分析后可视化OIP5-AS1在卵巢癌组织中表达上调,生存率与OIP5-AS1的相... 详细信息

目的探索lncRNA OIP5-AS1对卵巢上皮细胞IOSE80发生增殖、迁移、凋亡、侵袭和周期的表型的变化及可能的机制。方法患者临床资料数据收集自TCGA数据库及GEO数据库,R包分析后可视化OIP5-AS1在卵巢癌组织中表达上调,生存率与OIP5-AS1的相关性采用Kaplan-Meier分析。以慢病毒载体构建OIP5-AS1过表达和沉默的IOSE80细胞模型,采用RT-qPCR验证OIP5-AS1的表达,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测侵袭,划痕试验检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blotting检测细胞侵袭相关蛋白E钙黏着蛋白(E-cadherin)和N钙黏着蛋白(Ncadherin)的表达及细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)和细胞周期蛋白G相关激酶(cyclin-G-related kinase,GAK)的表达。结果RT-qPCR结果显示成功构建OIP5-AS1过表达和沉默的IOSE80细胞株。CCK-8结果显示过表达OIP5-AS1促进IOSE80细胞的增殖。划痕试验结果显示过表达OIP5-AS1促进IOSE80细胞迁移。Transwell结果显示过表达OIP5-AS1会引起IOSE80细胞的侵袭力增强。流式细胞术结果表明OIP5-AS1的过表达使IOSE80细胞凋亡减弱并推动了细胞周期的进展。Western blotting结果显示过表达OIP5-AS1会下调E-cadherin的表达并上调N-cadherin的表达,同时过表达OIP5-AS1可提高CDK及GAK蛋白的表达。结论lncRNA OIP5-AS1通过上调CDK及GAK的表达进一步干预了IOSE80细胞周期的调控,进而实现对卵巢上皮细胞恶性表型的间接调控作用。

关键词：卵巢上皮细胞 lncRNA OIP5-AS1 细胞周期表型

枸杞多糖干预雪旺细胞对大鼠坐骨神经损伤的实验研究

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中华手外科杂志 2024年第3期40卷 273-279页

作者：张博闻马国续王娅赵飞李晓亮高剑丁一张汉霖吴建科黄永禄宁夏回族自治区人民医院(宁夏医科大学附属自治区人民医院)手、足和重建显微外科银川750002

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)干预雪旺细胞(Schwann cells,SCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft,ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法取大鼠的坐骨神经SCs,行原代培养,培养至第三代.将0、50、100、150、200、250、500 mg/L的LBP与SCs混合培养,分成七组.在培养皿中培养后第1、3、5、7和9天,用CCK-8法检测各组SCs生物学活性,通过rt-PCR检测各组脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF),神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达水平,筛选干预SCs的LBP最适浓度.在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型,选取兔的胫神经制作ANX,将SD大鼠分为三组,每组10只:ANX组、ANX-SCs组和ANX-LBP-SCs组.术后8周,通过检测坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index,SFI)、神经传导速度(motor nerve conduction velocity,MCV),应用rt-PCR检测再生神经内凋亡因子(Caspase-3)的表达水平,另通过透射电镜比较三组模型的神经移植体内的神经纤维及髓鞘再生.结果利用CCK-8测定各孔不同时间点SCs活性.在第2~4天,七组的活性差异无统计学意义(P>0.05),第6~8天150~250 mg/L LBP-SCs组增殖活性强于其他浓度组,差异有统计学意义(P<0.05).通过q-PCR检测200 mg/L LBP-SCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达量高,与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05).移植术后8周,发现ANX-LBP-SCs组热刺痛实验、SFI检测、神经传导速度数据更优,且Caspase-3表达量最低.透射电镜检测结果显示ANX-LBP-SCs组髓鞘水肿程度及神经纤维再生情况优于其他组.结论LBP浓度为200 mg/L时,可促进SCs的增殖,并分泌大量神经营养因子.含有LBP干预的SCs培养体系联合ANX移植可显著促进周围神经再生.

关键词：雪旺细胞移植枸杞多糖异种神经移植体

耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的研究进展

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器官移植 2024年

作者：杨志琦李明皓宁夏医科大学第三临床医学院宁夏回族自治区人民医院肝胆外科

肝移植术后排斥反应严重影响受者生存，长期应用免疫抑制药是预防排斥反应的重要手段，但其存在毒性作用，以及会增加全身感染、肿瘤复发等不良事件的风险。因此，在成功肝移植手术之前，如何对受者实施个体化免疫耐受诱导，实现术后免... 详细信息

肝移植术后排斥反应严重影响受者生存，长期应用免疫抑制药是预防排斥反应的重要手段，但其存在毒性作用，以及会增加全身感染、肿瘤复发等不良事件的风险。因此，在成功肝移植手术之前，如何对受者实施个体化免疫耐受诱导，实现术后免疫抑制药完全或早期撤退，仍然是器官移植工作者不断探索的研究方向。近年来，耐受性树突状细胞诱导肝移植免疫耐受的机制研究取得了一些新的进展，临床试验初显成效。本文就耐受性树突状细胞的特征、参与重塑肝脏免疫微环境的机制及其诱导肝移植免疫耐受基础研究与临床应用进展进行综述，以期为耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的应用研究提供参考。

关键词：树突状细胞肝移植免疫耐受排斥反应免疫抑制药细胞因子共刺激分子交叉修饰

枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药

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中国组织工程研究 2024年第1期28卷 74-79页

作者：艾芳芳肖红燕汪芳朱永朝马丽君宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学宁夏少数民族医药现代化教育部重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏回族自治区人民医院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院外科学研究室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系宁夏回族自治区银川市750004

背景:结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法,研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2,ABCG2)等膜转运蛋白相关,然而当患者对这些化疗药物产生耐药... 详细信息

背景:结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法,研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2,ABCG2)等膜转运蛋白相关,然而当患者对这些化疗药物产生耐药后,ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降,引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效,枸杞多糖具有广泛的生物学活性,将多糖作为抗肿瘤药物,可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。目的:通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用,进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。方法:选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验,采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间,进一步分为HCT116对照组,HCT116-OXR空白处理组,枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖),奥沙利铂组(10μmol/L奥沙利铂),枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10μmol/L奥沙利铂),流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)和ABCG2的表达,Western blot检测PI3K,AKT,Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果与结论:①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P<0.05);②与HCT116-OXR空白处理组比较,奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P<0.05);③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药,为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。

关键词： PMI ABCG2 PI3K AKT 枸杞多糖结肠癌干细胞耐药凋亡

耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的作用研究进展

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器官移植 2024年第4期15卷 575-580页

作者：杨志琦李明皓宁夏医科大学第三临床医学院银川750002 宁夏回族自治区人民医院肝胆外科

肝移植术后排斥反应严重影响受者生存,长期应用免疫抑制药是预防排斥反应的重要手段,但其存在毒性作用,以及会增加全身感染、肿瘤复发等不良事件的风险。因此,在成功肝移植手术之前,如何对受者实施个体化免疫耐受诱导,实现术后免疫抑制... 详细信息

肝移植术后排斥反应严重影响受者生存,长期应用免疫抑制药是预防排斥反应的重要手段,但其存在毒性作用,以及会增加全身感染、肿瘤复发等不良事件的风险。因此,在成功肝移植手术之前,如何对受者实施个体化免疫耐受诱导,实现术后免疫抑制药完全或早期撤退,仍然是器官移植工作者不断探索的研究方向。近年来,耐受性树突状细胞诱导肝移植免疫耐受的机制研究取得了一些新的进展,临床试验初显成效。本文就耐受性树突状细胞的特征、参与重塑肝脏免疫微环境的机制及其诱导肝移植免疫耐受基础研究与临床应用进展进行综述,以期为耐受性树突状细胞在肝移植免疫耐受中的应用研究提供参考。

关键词：树突状细胞肝移植免疫耐受排斥反应免疫抑制药细胞因子共刺激分子交叉修饰免疫微环境

Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞的提取与鉴别

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中国组织工程研究 2024年第25期28卷 4013-4017页

作者：李立强李明皓李良李文波张军孔令梅合肥市第二人民医院肝胆外科/安徽医科大学附属合肥医院肝胆外科/蚌埠医学院附属合肥市第二人民医院教学医院安徽省合肥市230011 宁夏回族自治区人民医院肝胆外科宁夏回族自治区银川市750002

背景:树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能,它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微,这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。目的:提取鉴别Lewis大鼠... 详细信息

背景:树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能,它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微,这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。目的:提取鉴别Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞。方法:从Lewis大鼠骨髓中分离骨髓前体细胞,应用20 ng/mL粒细胞集落刺激因子、10 ng/mL白细胞介素4培养7 d诱导为未成熟树突状细胞,然后在未成熟树突状细胞中加入1μg/mL脂多糖继续培养2 d诱导为成熟树突状细胞。采用荧光倒置显微镜观察树突状细胞形态,流式细胞仪鉴定成熟和未成熟树突状细胞表面特异性分子,ELISA检测成熟和未成熟树突状细胞培养上清白细胞介素10、白细胞介素12和白细胞介素17A因子的分泌水平,混合淋巴细胞反应检测成熟和未成熟树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应。结果与结论:①普通荧光倒置显微镜下观察树突状细胞具有明显的突起结构;②流式细胞仪可见未成熟树突状细胞低表达CD40、CD86等共刺激分子;相反,成熟树突状细胞高表达上述共刺激分子;③未成熟树突状细胞的白细胞介素10、白细胞介素17A分泌水平要远高于成熟树突状细胞(P<0.01);未成熟树突状细胞的白细胞介素12分泌水平低于成熟树突状细胞(P<0.05);④成熟树突状细胞对T细胞的刺激明显比成熟树突状细胞强,当成熟树突状细胞与T淋巴细胞比例达到1∶10时刺激能力更强;⑤结果表明:Lewis大鼠骨髓前体细胞可以分化为树突状细胞,通过流式细胞鉴定、相关因子检测、混合淋巴细胞反应能够鉴别树突状细胞的成熟和未成熟状态。

关键词：树突状细胞未成熟树突状细胞成熟树突状细胞细胞因子混合淋巴细胞反应

经尿道等离子整块切除术在非肌层浸润性膀胱癌中的应用研究

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国际泌尿系统杂志 2024年第1期44卷 1-5页

作者：魏希锋陈超张淼高平生宁夏回族自治区人民医院泌尿外科银川750002 宁夏回族自治区人民医院病理科银川750002

目的探讨经尿道双极等离子肿瘤整块切除术(ERBT)治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)的临床效果。方法回顾性分析2019年1月至2021年6月本院泌尿外科治疗的79例非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者的临床资料, 其中观察组行经尿道双极等离子ERBT治... 详细信息

目的探讨经尿道双极等离子肿瘤整块切除术(ERBT)治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)的临床效果。方法回顾性分析2019年1月至2021年6月本院泌尿外科治疗的79例非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌患者的临床资料, 其中观察组行经尿道双极等离子ERBT治疗(39例), 对照组行常规经尿道膀胱肿瘤电切术(cTURBT)治疗(40例)。所有患者术后规律行盐酸吡柔比星膀胱灌注化疗, 术后3、6、12、24个月行泌尿系彩超、膀胱镜检查。观察并分析比较两组患者的手术时间、术中出血量、留置尿管时间、术中不良事件发生情况及术后复发情况。结果 79例患者均成功完成手术, 无中转开放手术, 无输血病例。两组患者的手术时间、术中出血量、留置尿管时间及闭孔发射发生率比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05)。观察组的逼尿肌可见率高于对照组[92.3% (36/39)vs. 52.5%(21/40), P<0.05]。两组患者均无围手术期大出血、膀胱穿孔发生。观察组肿瘤复发5例(12.8%), 对照组复发14例(35.0%), 两组2年内总复发率比较, 差异有统计学意义(P<0.05);对照组的2年累计复发率高于观察组(P<0.05)。结论与cTURBT相比, ERBT是治疗NMIBC的一种安全有效的方法, 组织病理标本中的肌层可见率明显提高, 可在把握适应证的情况下在临床推广应用。

关键词：膀胱肿瘤膀胱切除术经尿道等离子

术前经直肠腔内三维超声诊断复杂性肛瘘内口、分型的临床价值及对手术疗效的影响

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现代生物医学进展 2024年第2期24卷 285-288,252页

作者：张立白晓林李旭照白兆福马小娟丁彦军孙广宏宁夏回族自治区人民医院功能科宁夏银川750002 宁夏回族自治区人民医院普通外科宁夏银川750002 宁夏回族自治区人民医院肛肠科宁夏银川750002

目的:探讨术前经直肠腔内三维超声诊断复杂性肛瘘内口、分型的临床价值及对手术疗效的影响。方法:选择2021年1月至2022年6月我院收治拟行手术治疗的复杂性肛瘘患者84例,按照数字随机法分为研究组和对照组,每组42例。对照组术前行经直肠... 详细信息

目的:探讨术前经直肠腔内三维超声诊断复杂性肛瘘内口、分型的临床价值及对手术疗效的影响。方法:选择2021年1月至2022年6月我院收治拟行手术治疗的复杂性肛瘘患者84例,按照数字随机法分为研究组和对照组,每组42例。对照组术前行经直肠腔内常规超声检查,研究组术前行经直肠腔内三维超声检查。比较两组肛瘘内口术前诊断准确率、Parks分型检出准确率、手术疗效、住院时间、创口愈合时间,术前与术后肛门功能、术后并发症发生情况及复发率。结果:研究组肛瘘内口术前诊断准确率显著高于对照组(P0.05)。结论:经直肠腔内三维超声诊断能够准确诊断肛瘘内口、瘘管走行,有利于提升复杂性肛瘘总体治疗效果,保护肛门功能。

关键词：经直肠腔内三维超声复杂性肛瘘分型肛门功能手术疗效