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内热针干预膝骨性关节炎兔软骨下骨Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶3和骨桥蛋白的表达

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中国组织工程研究 2021年第17期25卷 2636-2642页

作者：朱仕强许建峰黑晓燕陈耘东田心保张金晨林瑞珠宁夏医科大学宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院中医骨伤科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院康复医学科宁夏回族自治区银川市750004

背景:内热针疗法是在温针灸疗法基础上,经过现代工艺改良升级的物理治疗方法,兼具针刺效应和热效应,在临床上治疗膝骨性关节炎疗效显著,但对其具体机作用制缺乏了解。目的:探讨内热针作用于兔膝骨性关节炎,对软骨下骨中Ⅰ型胶原、基质... 详细信息

背景:内热针疗法是在温针灸疗法基础上,经过现代工艺改良升级的物理治疗方法,兼具针刺效应和热效应,在临床上治疗膝骨性关节炎疗效显著,但对其具体机作用制缺乏了解。目的:探讨内热针作用于兔膝骨性关节炎,对软骨下骨中Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白表达的影响及其可能的作用机制。方法:30只无特定病原体的新西兰兔采用随机数字表法,分为空白组、模型组和治疗组,每组各10只。模型组和治疗组采用经典Hulth方法选取兔左后肢膝关节进行兔膝骨性关节炎造模。治疗组选取兔左后肢膝关节进行内热针疗法干预,每周1次,每次20 min;空白组和模型组不给予任何治疗。干预4周进行实验兔左后膝关节取材,使用改良版Lequesne MG量表对各组实验兔干预前后进行行为学评价;采用甲苯胺蓝染色观察各组实验兔膝关节软骨下骨组织形态学变化;分别采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测3组软骨下骨中Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白的蛋白及mRNA表达。动物实验方案通过宁夏医科大学总医院医学科研伦理审查委员会批准(批准号:2018064)。结果与结论:①与空白组相比,模型组和治疗组兔的行为学评分显著升高(P <0.05);与模型组相比,治疗组兔的行为学评分显著降低(P <0.05),且干预前后差值更大(P<0.05);②与空白组相比,模型组软骨下骨的骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数目明显降低(P<0.05),骨小梁弥散度明显升高(P <0.05);Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA表达水平显著降低(P <0.001),基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白的蛋白及其mRNA表达水平显著升高(P <0.001);与模型组相比,治疗组软骨下骨的骨小梁面积百分数,骨小梁数目明显升高(P <0.05),骨小梁弥散度明显降低(P <0.05);Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA表达水平显著升高(P <0.05),基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白的蛋白及其mRNA表达水平显著降低(P <0.05);③Ⅰ型胶原水平变化与骨小梁面积百分数、骨小梁数目呈正相关关系,与骨小梁弥散度呈负相关关系;骨桥蛋白、基质金属蛋白酶3和骨桥蛋白/基质金属蛋白酶3比值变化与骨小梁面积百分数、骨小梁数目呈负相关关系,与骨小梁弥散度呈正相关关系;④结果说明,内热针疗法可能通过上调Ⅰ型胶原表达和下调基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白表达,实现软骨下骨微结构修复。

关键词：内热针膝骨性关节炎软骨下骨骨代谢骨重塑

内热针干预激素性股骨头缺血性坏死模型大鼠抑制破骨及促进新骨形成

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中国组织工程研究 2022年第17期26卷 2642-2648页

作者：田心保许建峰黄媛赖喆蓥李小龙刘小丽林瑞珠朱宁宁夏医科大学宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院中医骨伤科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院康复医学科宁夏回族自治区银川市750004

背景:出于疾病治疗目的,临床上糖皮质激素被广泛应用,导致该类患者群体患激素性股骨头缺血性坏死的风险增加。然而目前为止,激素性股骨头缺血性坏死的详细发病机制尚不明确。内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死在临床上效果良好,但... 详细信息

背景:出于疾病治疗目的,临床上糖皮质激素被广泛应用,导致该类患者群体患激素性股骨头缺血性坏死的风险增加。然而目前为止,激素性股骨头缺血性坏死的详细发病机制尚不明确。内热针疗法治疗激素性股骨头缺血性坏死在临床上效果良好,但对其具体作用机制尚未明晰。目的:探讨内热针疗法对激素性股骨头缺血性坏死股骨头组织中骨保护素、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。方法:随机在30只健康、无特定病原体的SD大鼠中选择10只作为空白组,其余20只采用甲基强的松龙联合大肠杆菌内毒素的方法制备激素性股骨头缺血性坏死模型,造模成功后再随机分为模型对照组和治疗组,每组10只。治疗组对SD大鼠双侧臀部进行1次/周的内热针治疗,20 min/次,设定温度为42℃;空白组和模型对照组均不采取任何处理。干预前后对大鼠进行一般状态和行为学检测实验(测定自主活动次数和抓力);干预4周后对大鼠双侧股骨头取材,采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠股骨头骨组织形态学变化并计算空骨陷窝率;分别采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法检测各组股骨头组织中骨保护素、RANKL的mRNA及蛋白表达。结果与结论:(1)与空白组相比,模型对照组和治疗组大鼠的相关行为学评分明显降低(P <0.01);干预后与模型对照组相比,治疗组大鼠的相关行为学评分升高(P <0.05);(2)与空白组相比,模型对照组的股骨头组织形态学明显恶化且空骨陷窝率升高(P <0.001),差异有显著性意义;干预后与模型对照组相比,治疗组的股骨头组织形态学明显改善且空骨陷窝率降低(P <0.05);(3)与空白组相比,模型对照组大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白及mRNA表达水平明显升高,骨保护素的蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异均有显著性意义(P <0.001);干预后与模型对照组相比,治疗组大鼠股骨头组织中的RANKL的蛋白及mRNA表达水平明显降低,骨保护素的蛋白及mRNA表达水平明显升高,差异均有显著性意义(P <0.05);(4)结果说明,内热针疗法可能通过上调骨保护素的表达和下调RANKL的表达,抑制破骨细胞的功能及活性,从而抑制骨吸收,促进新骨的形成及骨组织修复。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死内热针骨重塑破骨细胞骨代谢骨保护素核因κB受体活化因子配体

多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性血管内皮细胞和血管外膜细胞的方法

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中国组织工程研究 2018年第21期22卷 3357-3364页

作者：古晶晶杨继辉杨婷婷杨小萍郑波宁夏医科大学宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院人类干细胞研究所宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院血液科宁夏回族自治区银川市750004

背景:目前分离骨骼肌源性干细胞广泛应用的方法是差速贴壁培养法,而运用多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性干细胞的研究较为少见。目的:探索利用多参数流式细胞分选术从人体骨骼肌组织中分选高纯度肌源性血管内皮细胞和血管外膜细胞的... 详细信息

背景:目前分离骨骼肌源性干细胞广泛应用的方法是差速贴壁培养法,而运用多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性干细胞的研究较为少见。目的:探索利用多参数流式细胞分选术从人体骨骼肌组织中分选高纯度肌源性血管内皮细胞和血管外膜细胞的方法。方法:收集人体骨骼肌组织,用胶原酶(Ⅰ型和Ⅳ型)及分散酶消化、获得单个核细胞,通过多参数流式细胞分选术分选表型为CD56^+CD34^+CD144^+CD45^-的肌血管内皮细胞和表型为CD146^+CD45^-CD34^-CD144^-CD56^-的肌血管外膜细胞。结果与结论:(1)利用多参数流式细胞分选术分选肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞各14例,肌血管内皮细胞在人骨骼肌单个核细胞中占(0.04±0.01)%,肌血管外膜细胞在人骨骼肌单个核细胞中占(0.30±0.07)%;(2)将新分选的细胞经过流式细胞仪回测后,肌血管内皮细胞纯度达到(96.8±1.16)%,肌血管外膜细胞纯度达到(92.50±0.50)%,锥虫蓝染色检测肌血管内皮细胞存活率达到(95.58±1.10)%,肌血管外膜细胞存活率达到(95.15±0.67)%;(3)肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞均能在体外诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,表明二者具有良好的多向分化能力;(4)实验建立了利用多参数流式细胞分选术分选肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞的有效方法,经过分选所得的肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞纯度高、活性良好。

关键词：人骨骼肌肌血管内皮细胞肌血管外膜细胞多参数流式细胞分选术干细胞国家自然科学基金肌骨骼内皮细胞流式细胞术组织工程

人骨骼肌源性血管外膜细胞对人脐血CD34^+细胞的体外造血支持作用

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中国组织工程研究 2020年第13期24卷 2047-2054页

作者：杨小萍杨婷婷古晶晶周芮许飞杨继辉郑波宁夏医科大学宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院人类干细胞研究所宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院血液科宁夏回族自治区银川市750004

背景:研究显示血管外膜细胞是间充质干细胞的前体细胞,其通过细胞接触或旁分泌效应调节造血干细胞的行为并支持造血,人骨骼肌源性血管外膜细胞对造血的支持作用有待于研究。目的:从人骨骼肌中分离培养血管外膜细胞并进行生物学特性鉴定... 详细信息

背景:研究显示血管外膜细胞是间充质干细胞的前体细胞,其通过细胞接触或旁分泌效应调节造血干细胞的行为并支持造血,人骨骼肌源性血管外膜细胞对造血的支持作用有待于研究。目的:从人骨骼肌中分离培养血管外膜细胞并进行生物学特性鉴定,研究其对脐血CD34^+细胞的体外支持作用。方法:①利用多参数流式细胞术从人骨骼肌中分选表型为CD146^+CD56^-CD34^-CD144^-CD45^-的血管外膜细胞,并对其进行生物学鉴定;②建立以CD146^+人骨骼肌源性血管外膜细胞为滋养层的脐血CD34^+细胞体外培养体系(实验组),以人骨髓间充质干细胞为滋养层的脐血CD34^+细胞体外培养体系为阳性对照组,共培养1,2,4周检测培养体系的细胞数量、集落形成能力及免疫表型并进行统计分析。结果与结论:①通过多参数流式细胞术分选出CD146+人骨骼肌源性血管外膜细胞,回测纯度为(91.5±1.85)%(n=5);其表达间充质干细胞表面抗原CD73、CD90、CD105、CD44,不表达造血细胞及内皮细胞表面抗原CD45、CD34、CD31;经诱导培养可向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及肌细胞分化;②实验组与阳性对照组相比,在细胞数、集落形成能力及免疫表型方面(CD45^+、CD34^+CD33^-、CD14^+、CD10^+/CD19)差异均无显著性意义(P> 0.05,n=6);无滋养层的空白对照组培养1周时细胞数量明显减少,2周时几乎无细胞存活;③结果表明,CD146^+人骨骼肌源性血管外膜细胞与人骨髓间充质干细胞一样对脐血CD34^+细胞具有体外支持作用。

关键词：人骨骼肌源性血管外膜细胞脐血CD34+细胞人骨髓间充质干细胞滋养层体外支持

活体视神经示踪剂锰离子对兔视网膜毒性的研究

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中华眼科杂志 2010年第7期46卷 597-603页

作者：张君胡运韬盛迅伦李颖任静马志中北京大学第三医院北京大学眼科中心 100191 宁夏医科大学附属医院眼科银川宁夏自治区人民医院眼科银川

目的研究Mn2＋作为视神经活体示踪剂对兔视网膜的毒性作用.方法 60只青紫兰兔120眼随机分为5组,分别单眼玻璃体腔中注入MnCl210、15、20、30、40 mmol/L 25μl.术前及术后7 d、28 d行眼底彩色照相、荧光素眼底血管造影、闪光视网膜电图... 详细信息

目的研究Mn2＋作为视神经活体示踪剂对兔视网膜的毒性作用.方法 60只青紫兰兔120眼随机分为5组,分别单眼玻璃体腔中注入MnCl210、15、20、30、40 mmol/L 25μl.术前及术后7 d、28 d行眼底彩色照相、荧光素眼底血管造影、闪光视网膜电图（F-ERG）检测,并摘除眼球行视网膜光学显微镜和电子显微镜检查.对不同时间点实验组与对照组的F-ERG b波振幅进行比较,行重复测量的方差分析.结果 15 mmol/L浓度组注药前、注药后7及28 d F-ERG b波振幅分别为337、189、317μV,组间比较差异有统计学意义（F=20.43,P〈0.05）.注药后7 d F-ERG b波振幅降低,28 d b波振幅恢复正常;≥20 mmol/L浓度组注药后7 d F-ERG b波振幅降低,至28 d b波振幅未见恢复.光学显微镜及透射电子显微镜观察,≥20 mmol/L浓度组注药后各时间点均有视网膜结构异常改变.结论 MnCI2作为视神经活体示踪剂,浓度≤15 mmol/L仅引起视网膜功能可逆性改变;当浓度≥20 mmol/L视网膜出现功能及形态学损害.

关键词：锰造影剂视网膜

宁夏回族原发性膝骨性关节炎与瘦素基因多态性的相关性

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武汉大学学报（医学版） 2020年第4期41卷 637-640,683页

作者：马晓军沈佳罗小军马甲升金群华宁夏回族自治区人民医院宁夏银川750000 西北民族大学第一附属医院宁夏银川750000 宁夏医科大学附属自治区人民医院宁夏银川750000 宁夏医科大学总医院宁夏银川750004

目的:通过对瘦素(LEP)基因多态性与宁夏回族人群膝骨性关节炎(OA)的相关性研究,探讨LEP基因与膝OA易感的关系,以进一步了解膝OA发病机制并提供防治相关理论依据。方法:本研究收集148例兼具原发症状和影像证据、不相关的宁夏回族膝OA患者... 详细信息

目的:通过对瘦素(LEP)基因多态性与宁夏回族人群膝骨性关节炎(OA)的相关性研究,探讨LEP基因与膝OA易感的关系,以进一步了解膝OA发病机制并提供防治相关理论依据。方法:本研究收集148例兼具原发症状和影像证据、不相关的宁夏回族膝OA患者和155例性别、年龄及体质量指数相匹配的对照人群,通过聚合酶链反应和限制性酶切技术,对LEP G2548A位点行单核苷酸多态性(SNP)检测,对基因型分布和等位基因频率分别行拟和优度χ~2检验,并行Hardy-Weinberg平衡检验,Logistic回归分析两个位点不同基因型对膝OA发生风险率的影响。结果:两组间的性别及年龄构成均无统计学差异。经拟合优度χ~2检验结果发现LEP G2548A位点的P>0.05,均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。膝OA组LEP G2548A位点AG/GA+AA基因型和A等位基因的分布频率明显高于对照组,LEPR A668G位点AG/GA+GG基因型和G等位基因的分布频率和对照组存在差异(P=0.047和P=0.017)。结论:LEP G2548A位点的多态性与宁夏回族人群中膝OA易感性相关,有利于宁夏回族膝OA发病的危险预测和早期防治。

关键词：瘦素病例对照研究单核苷酸多态性骨性关节炎回族

别嘌呤醇治疗慢性肾脏病疗效和安全性的meta分析

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中国医师杂志 2022年第4期24卷 505-511页

作者：刘顺瑶鄂静罗红艳保莉田文竹包喜曹释露郑亚莉宁夏医科大学银川750000 宁夏回族自治区人民医院肾脏内科银川750000

目的系统评价别嘌呤醇治疗慢性肾脏病的疗效和安全性。方法计算机检索Embase、Pubmed和The Cochrane Library数据库,查找别嘌呤醇治疗慢性肾脏病患者的随机对照试验。根据Cochrane系统评价方法,两位评价员独立筛选文献、提取数据,采用Re... 详细信息

目的系统评价别嘌呤醇治疗慢性肾脏病的疗效和安全性。方法计算机检索Embase、Pubmed和The Cochrane Library数据库,查找别嘌呤醇治疗慢性肾脏病患者的随机对照试验。根据Cochrane系统评价方法,两位评价员独立筛选文献、提取数据,采用Revman 5.3软件进行结果分析。结果最终纳入10篇文献,共940例患者(试验组472例,对照组468例)。Meta分析结果显示,别嘌呤醇治疗可以降低慢性肾脏病患者的血尿酸(MD=-2.40,95%CI:-2.74--2.05,P<0.01)、24 h尿蛋白(MD=-0.61,95%CI:-1.17--0.06,P=0.03),升高肾小球滤过率估算值(eGFR)(MD=2.51,95%CI:1.86-3.17,P<0.01)。试验组和对照组发生不良事件的差异无统计学意义(OR=1.40,95%CI:0.61-3.19,P=0.42),但别嘌呤醇治疗可以降低心血管事件的发生风险(OR=0.58,95%CI:0.38-0.89,P=0.01)。结论别嘌呤醇治疗慢性肾脏病会降低尿蛋白、改善eGFR,并且降低心血管事件的发生风险。

关键词：肾功能不全,慢性别嘌呤醇 Meta分析

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大鼠大网膜I型和Ⅱ型乳斑的确定及对比

解剖学杂志 2011年第3期34卷 294-297页

作者：李尚胜黄允宁宁夏医科大学银川750004 宁夏自治区人民医院普二科银川750021

目的：对乳斑的分型进行确定，并探讨I型乳斑和Ⅱ型乳斑数量、面积及细胞构成的异同。方法：微粒子活性炭及H—E染色双重标记大鼠大网膜乳斑，Image-ProPlus软件测定I型乳斑和Ⅱ型乳斑的数量和面积，电镜观察I型乳斑和Ⅱ型乳斑的超微结... 详细信息

目的：对乳斑的分型进行确定，并探讨I型乳斑和Ⅱ型乳斑数量、面积及细胞构成的异同。方法：微粒子活性炭及H—E染色双重标记大鼠大网膜乳斑，Image-ProPlus软件测定I型乳斑和Ⅱ型乳斑的数量和面积，电镜观察I型乳斑和Ⅱ型乳斑的超微结构。结果：生理状态下，Ⅱ型乳斑数量（9．153／cm^2±0．818／cm^2）多于I型乳斑数量（1．913／cmz±0．851／cm^2），Ⅱ型乳斑面积（O．421mmz±0.136mm^2）大于I型乳斑面积（0．102mm^2±0．041mm^2）。两型乳斑均主要由巨噬细胞、淋巴细胞、肥大细胞、单核细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞、网状细胞和基质细胞构成；Ⅱ型乳斑内还可见到血管、淋巴管和脂肪细胞。两型乳斑巨噬细胞内均见吞噬的微粒子活性炭颗粒。结论：微粒子活性炭与H—E染色均可标记乳斑；大网膜乳斑分为两种类型即I型和Ⅱ型，I型乳斑分布于薄的大网膜浆膜，周围无毛细血管和脂肪组织，Ⅱ型乳斑分布于网膜血管和脂肪组织周围，乳斑内可见曲迂的血管；两型乳斑在组织细胞构成方面有差异，与它们的分布位置有关；两型乳斑巨噬细胞均有吞噬异物颗粒的免疫功能。

关键词：大网膜乳斑分型电镜大鼠

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博尔纳病病毒感染与病毒性脑炎发病的关系

中华流行病学杂志 2009年第12期30卷 1284-1287页

作者：马彦王振海孔繁元张颖宁夏医科大学附属石嘴山市第一人民医院石嘴山753200 宁夏医科大学附属医院神经内科

目的检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）博尔纳病病毒（BDV）携带情况，分析BDV与标准病毒株之间的同源性。探讨BDV感染性疾病与不明原因病毒性脑炎之间的关系，同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防... 详细信息

目的检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）博尔纳病病毒（BDV）携带情况，分析BDV与标准病毒株之间的同源性。探讨BDV感染性疾病与不明原因病毒性脑炎之间的关系，同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防治提供实验依据。方法采用荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应（FQ—nRT-PCR）检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者及正常人PBMCsBDVp24基因片段，并对其中阳性扩增产物进行基因序列测定，然后采用BLAST软件以及DNAsist5．0软件对测序结果进行分析。结果病毒性脑炎组样本BDVp24基因片段***-PCR阳性率（10．17％）显著高于正常对照组（0％）（P〈0．05）。病毒性脑炎患者检出BDVp24基因片段的核苷酸序列与马BDV标准病毒株H3915序列同源性为97．67％，与H1766株比较在3个位点出现一致性突变（nt1659T-c，nt1668A→G，nt1674T→C；突变率为3．49％）；与strainV株比较在4个位点出现一致性突变（nt1648C→T，nt1658e→A，nt1667A—G，nt1673T→C；突变率为4．65％），但编码的氨基酸相同。证实扩增所得目的基因片段确系BDVp24的相应片段。结论宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者中存在BDV感染，提示部分不明原因病毒性脑炎的发生可能与BDV感染有关。且该BDVp24扩增产物核苷酸序列与标准病毒株高度同源性，与马源strainH3915同源性最高。

关键词：博尔纳病病毒病毒性脑炎荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应