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敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 404-410页

作者：任超刘文淼骆佳宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院病案统计室宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750001

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平,并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、DUSP5敲低(si-DUSP5)组、si-NC联合BCG感染组、si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10的mRNA表达,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达,并在BCG刺激4 h后,DUSP5表达量达到高峰;与si-NC联合BCG感染组相比,敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、IL-6与TNF-α表达与分泌,而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响;且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。

关键词：卡介苗(BCG) 双特异性磷酸酶5(DUSP5) RAW264.7巨噬细胞炎性反应

FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制结直肠肿瘤细胞的铁死亡

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南方医科大学学报 2024年第5期44卷 885-893页

作者：王南石斌马小兰吴伟超曹佳宁夏医科大学总医院硕士培养站宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院急诊科宁夏银川750004 银川市第一人民医院耳鼻喉科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学科学研究院外科学研究室宁夏银川750004

目的探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制。方法使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和... 详细信息

目的探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制。方法使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建FMRP过表达载体(Lv-FMRP)和敲低载体(siFMRP-1、siFMRP-2、siFMRP-3),细胞实验设Control组、NC组、siFMRP-1组、siFMRP-2组、siFMRP-3组、Lv-NC组、Lv-FMRP组;采用CCK8和平板克隆实验检测细胞增殖;采用MDA/ROS/GSH/Fe^(2+)试剂盒检测细胞铁死亡水平;采用JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位变化;采用Western blot检测铁死亡相关蛋白及RAS/MAPK信号通路相关蛋白表达;利用裸鼠皮下成瘤实验观察FMRP对肿瘤生长的影响。结果与正常肠粘膜上皮细胞NCM460相比,FMRP在CRC细胞中明显高表达(P<0.05);TCGA数据库联合生信分析显示FMRP与活性氧调控、氧化应激诱导细胞死亡、线粒体呼吸等生物过程相关,与谷胱甘肽代谢通路相关;体外实验结果显示,与Control组相比,FMRP敲低组细胞增殖能力降低,GSH含量降低,MDA和ROS含量升高,Fe^(2+)荧光强度增强(P<0.05),SLC7A11/GPX4蛋白表达降低,线粒体膜电位JC-1荧光强度升高,而FMRP过表达组与上述结果相反;体内实验结果显示,敲低FMRP抑制瘤体生长,抑制SLC7A11表达(P<0.01);进一步检测RAS/MAPK信号通路,发现敲低FMRP导致ERK、MEK、MAPK、RAS蛋白磷酸化水平降低,过表达FMRP上述蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。结论FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制细胞铁死亡促进CRC恶性进展。

关键词： FMRP 铁死亡 RAS/MAPK信号通路结直肠肿瘤

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敲低双特异性磷酸酶5（DUSP5）通过阻断核因子κB（NF-κB）信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：任超刘文淼骆佳宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏医科大学总医院病案统计室

目的探讨双特异性磷酸酶5（DUSP5）对卡介苗（BCG）介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法 Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24hDUSP5表达变化；采用小干扰RNA（siRNA）技术下调RAW26... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶5（DUSP5）对卡介苗（BCG）介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法 Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24hDUSP5表达变化；采用小干扰RNA（siRNA）技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平，并设置siRNA阴性对照（si-NC）组、DUSP5敲低（si-DUSP5）组、si-NC联合BCG感染组、si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-10的mRNA表达，ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量；Western blot法检测细胞核因子κB（NF-κB）与磷酸化的NF-κB（p-NF-κB）表达变化。结果 BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达，并在BCG刺激4h后，DUSP5表达量达到高峰；与si-NC联合BCG感染组相比，敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、IL-6与TNF-α表达与分泌，而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响；且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。

关键词：卡介苗(BCG) 双特异性磷酸酶5(DUSP5) RAW264.7巨噬细胞炎性反应

IL-10、TGF-β1在小鼠深静脉血栓中的时序性变化

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法医学杂志 2024年第2期40卷 179-185页

作者：吴娟娟黄俊杰张煜卓嘉英陈刚杨舒涵赵蕴琦范琰琰温州医科大学法医学系浙江温州325035 温州医科大学司法鉴定中心浙江温州325035 温州医科大学司法鉴定科学技术研究所浙江温州325035

目的检测小鼠深静脉血栓发展过程中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达变化,探讨其在血栓形成时间推断中的应用价值。方法对实验组小鼠建立下腔静脉结扎模型,分别... 详细信息

目的检测小鼠深静脉血栓发展过程中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达变化,探讨其在血栓形成时间推断中的应用价值。方法对实验组小鼠建立下腔静脉结扎模型,分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d过量麻醉处死小鼠,在结扎点的下方提取形成血栓的下腔静脉段。对照组小鼠不进行结扎,提取与实验组相同部位的正常下腔静脉段作为对照样本。应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法和real-time qPCR检测IL-10和TGF-β1在血栓形成期间的表达变化。结果免疫组织化学染色结果显示,IL-10主要表达于血栓中的单核细胞,TGF-β1主要表达于血栓中的单核细胞和成纤维样细胞。蛋白质印迹法以及real-time qPCR检测结果显示,各实验组IL-10和TGF-β1的表达水平均高于对照组。IL-10的mRNA及蛋白水平分别于术后7 d和10 d达到峰值,术后7 d的mRNA表达量是对照组的(4.72±0.15)倍,术后10 d的蛋白表达量是对照组的(7.15±0.28)倍。TGF-β1的mRNA及蛋白水平分别于术后10 d和14 d达到峰值,术后10 d的mRNA表达量是对照组的(2.58±0.14)倍,术后14 d的蛋白表达量是对照组的(4.34±0.19)倍。结论深静脉血栓演变期间IL-10和TGF-β1呈现时序性表达变化,IL-10和TGF-β1的表达水平可以为血栓形成时间推断提供参考依据。

关键词：法医病理学深静脉血栓形成白细胞介素-10 转化生长因子-β1 时序性表达小鼠

人胎盘间充质干细胞调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生

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中国组织工程研究 2024年第31期28卷 4970-4974页

作者：曹佳伟丁劭瑞铁华薛菁贾元元梁雪云李锋宁夏医科大学临床医学院宁夏医学科学研究院宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区干细胞与再生医学重点实验室宁夏医科大学总医院宁夏医科大学总医院医学实验中心

背景：研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展，但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。目的：探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。方法：CCK-8法检测不同质量浓度... 详细信息

背景：研究表明人胎盘间充质干细胞能有效抑制肺纤维化的发展，但其发挥作用的具体机制目前并不清楚。目的：探究人胎盘间充质干细胞对二氧化硅诱导人胚肺成纤维细胞发生肺纤维化的治疗作用及相关机制。方法：CCK-8法检测不同质量浓度二氧化硅干预不同时间对MRC-5细胞增殖活力的影响，结合免疫荧光染色法筛选出最佳的二氧化硅刺激质量浓度与时间用于后续实验。将MRC-5细胞分为空白组、二氧化硅组、二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组，空白组细胞不予任何处理，二氧化硅组MRC-5细胞给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组MRC-5细胞先给予100μg/mL二氧化硅刺激48 h后再与人胎盘间充质干细胞共培养24 h。免疫荧光染色检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白的表达；Western blot检测各组细胞肺纤维化相关蛋白和TGF-β1/Smad 3信号通路相关蛋白表达。结果与结论：(1)CCK-8结果显示，100μg/mL二氧化硅刺激MRC-5细胞48 h为最佳质量浓度与时间；(2)免疫荧光染色结果显示，与二氧化硅组相比，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型蛋白表达明显降低；(3)Western blot结果显示，与二氧化硅组相比，二氧化硅+人胎盘间充质干细胞组α-平滑肌肌动蛋白、胶原蛋白Ⅰ型、N-钙黏蛋白、粘连蛋白、转化生长因子β1、p-Smad3、Smad3的蛋白表达均降低，E-钙黏蛋白表达升高，差异均有显著性意义(P <0.05)；(4)结果说明，人胎盘间充质干细胞能够对二氧化硅诱导的肺纤维化有显著的治疗作用；人胎盘间充质干细胞可以通过调控TGF-β1/Smad3信号通路抑制肺纤维化的发生。

关键词：人胎盘间充质干细胞肺纤维化 MRC-5细胞转化生长因子β1 Smad3 信号通路

miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第2期40卷 258-268页

作者：胡东来赵梓岐李元杨丽雷艳丽楚元奎宁夏医科大学临床医学院检验学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院科研平台银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关... 详细信息

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

关键词： miR-485-5p 前列腺癌氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶增殖迁移

慢性阻塞性肺疾病小鼠肠道免疫球蛋白A包被微生物组成及基因功能分析

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微生物学通报 2024年第7期 2676-2689页

作者：康宇婷李秋洁邱卓然续超贾伟汪澎涛宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院医学实验中心

【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小... 详细信息

【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小鼠肠来源IgA包被肠道微生物组成、丰度及菌群基因功能变化。【方法】采用鼻腔滴入脂多糖和熏香烟法相结合建立COPD小鼠模型。收集COPD小鼠和野生型小鼠粪便样品各12份，IgA磁珠分选IgA包被的肠道微生物菌群，16S rRNA基因高通量测序分析其组成及功能。【结果】通过比较两组肺组织切片染色、平均内衬间隔(meanlinearintercept,mLI)和肺泡灌洗液炎症因子浓度证实COPD模型鼠建模成功。OTU和主成分分析(principal component analysis, PCA)均发现两组间粪便样品中肠来源IgA包被微生物群落差异大，具有可比性。α多样性分析显示两组间物种多样性无显著统计学差异(P>0.05)。物种组成分析显示：两组肠来源IgA包被的菌群结构和菌群差异具有统计学意义(P<0.05)。COPD组的菌群结构中显著富集的菌目是：蛭弧菌目(Bdellovibrionales)、梭菌目(Clostridiales)和双歧杆菌目(Bifidobacteriales)；科层面分类中富集的主要是：普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)、梭菌科(Clostridiaceae)、类芽孢杆菌科(Paenibacillaceae)、蛭弧菌科(Bdellovibrionaceae)及双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)；菌属层面分类上主要富集拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、狭义梭菌属(Clostridium-sensu-stricto)、苏黎世杆菌属(Turicibacter)、粪杆菌属(Faecalibacterium)、吸血弧菌属(Vampirovibrio)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)。菌群差异基因通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)数据库通路富集分析结果显示COPD组细胞生长与死亡、核苷酸代谢以及消化系统相关通路明显上调，而膜运输相关通路显著下调。【结论】COPD小鼠肠来源IgA包被肠道微生物存在紊乱及基因功能失调。

关键词：慢性阻塞性肺疾病免疫球蛋白A包被肠道微生物 16S rRNA基因测序

弓形虫ROP16蛋白与NKRF互作对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和周期的影响

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中国兽医科学 2024年第7期 982-992页

作者：周毓宁赵志军李光琪李佳铭党甜甜林永仙于欣宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学检验学院

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞，并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP1... 详细信息

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞，并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白，并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA，分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞，并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况，利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中，促凋亡蛋白Bax表达水平上调，抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调；细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调，而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调，提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞，而在沉默NKRF组中，过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱，细胞周期无明显停滞，与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作，诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。

关键词：非小细胞肺癌 ROP16蛋白刚地弓形虫 NF-κB通路 NF-κB抑制因子

扁蒴藤素通过活性氧调控PI3K/AKT通路增强顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡

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南方医科大学学报 2024年第5期44卷 904-912页

作者：王媛媛陈腾从小凡李依然陈蕊张配孙小锦赵素容蚌埠医科大学药学院//安徽省生化药物工程技术研究中心安徽蚌埠233030

目的观察扁蒴藤素和顺铂对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法CCK-8法检测不同浓度扁蒴藤素、顺铂处理24 h后HNE-1和CNE-2Z细胞的存活率,集落形成实验观察细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,We... 详细信息

目的观察扁蒴藤素和顺铂对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法CCK-8法检测不同浓度扁蒴藤素、顺铂处理24 h后HNE-1和CNE-2Z细胞的存活率,集落形成实验观察细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,Western blotting检测蛋白表达。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后,检测细胞增殖、凋亡及通路的影响。结果CCK-8结果显示,扁蒴藤素和顺铂均可抑制HNE-1和CNE-2Z细胞的存活率(P<0.05)。与单用扁蒴藤素或顺铂相比,联合使用明显抑制细胞存活率和细胞集落形成能力(P<0.05),升高细胞凋亡率(P<0.01)和细胞内ROS水平(P<0.01),上调Bax、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP的表达(P<0.05),下调Bcl-2、Mcl-1和PARP的表达(P<0.05),同时,下调细胞中p-PI3K和p-AKT的表达(P<0.05)。而NAC可部分逆转扁蒴藤素联合顺铂对HNE-1和CNE-2Z细胞的增殖抑制(P<0.01)和凋亡诱导作用(P<0.05),部分恢复p-PI3K和p-AKT的下调作用(P<0.05)。结论扁蒴藤素能增强鼻咽癌细胞对顺铂的增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与ROS介导的PI3K/AKT信号通路失活有关。

关键词：鼻咽癌扁朔藤素顺铂活性氧 PI3K/AKT信号通路

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