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细粒棘球绦虫抗原Fis1T细胞表位肽缓解过敏性哮喘小鼠气道炎症的免疫学作用研究

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中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 47-51,55页

作者：辛云卓宋东谢笑多杨雪金海容赵嘉庆宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学科学技术研究中心宁夏常见传染病重点实验室宁夏医科大学总医院耳鼻咽喉头颈外科宁夏医科大学临床医学院

目的探讨细粒棘球绦虫Fis1蛋白的T细胞表位肽(***183-102)对过敏性哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及免疫学作用机制。方法1)体内试验:将24只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为3组(每组8只),其中B组为对照组,C组为过敏性哮喘组(OVA),T组为干预组(... 详细信息

目的探讨细粒棘球绦虫Fis1蛋白的T细胞表位肽(***183-102)对过敏性哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及免疫学作用机制。方法1)体内试验:将24只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为3组(每组8只),其中B组为对照组,C组为过敏性哮喘组(OVA),T组为干预组(OVA+***183-102)。采用ELISA法检测小鼠血清OVA特异性IgE水平;采用HE,PAS,MASSON组织染色检查小鼠肺组织病理变化;采用流式细胞术分析肺脏和脾脏组织中嗜酸性粒细胞比例、Th1和Th2的分群及比例。2)体外试验:采用裂红法分离小鼠脾脏单个核细胞,每孔以1×106个细胞铺板,分为3组(每组3个复孔),其中B组为对照组,C组为刀豆蛋白刺激组(ConA),T组为干预组(ConA+***183-102),培养3 d后收集上清,采用ELISA法检测IFN-γ和IL-4水平。结果1)体内试验:与C组相比,T组小鼠肺组织的炎细胞浸润、胶原沉积等病理损伤有所改善,血清OVA特异性IgE水平、肺组织嗜酸性粒细胞比例、肺脏和脾脏Th2细胞比例均显著下降(均P<0.05),肺和脾Th1细胞比例显著上升(均P<0.05)。2)体外试验:与B组相比,C组小鼠脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平均显著上升(均P<0.05);与C组相比,T组脾脏单个核细胞培养上清中IFN-γ水平显著上升,IL-4水平显著下降(均P<0.01),与体内试验结果一致。结论***183-102可缓解过敏性哮喘小鼠肺组织炎症损伤,降低IgE的分泌,并可能通过纠正Th1/Th2免疫应答失衡抑制OVA诱导的过敏性哮喘小鼠的气道炎症。

关键词：过敏性哮喘细粒棘球绦虫 Fis1蛋白T细胞表位肽

慢性阻塞性肺疾病小鼠肠道免疫球蛋白A包被微生物组成及基因功能分析

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微生物学通报 2024年第7期51卷 2676-2689页

作者：康宇婷李秋洁邱卓然续超贾伟汪澎涛宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004

【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小... 详细信息

【背景】小气道免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructivepulmonarydisease,COPD)的病理生理学中发挥着重要作用。然而肠黏膜来源的IgA在COPD病程中的作用及包被微生物群尚不明确。【目的】探讨COPD小鼠肠来源IgA包被肠道微生物组成、丰度及菌群基因功能变化。【方法】采用鼻腔滴入脂多糖和熏香烟法相结合建立COPD小鼠模型。收集COPD小鼠和野生型小鼠粪便样品各12份,IgA磁珠分选IgA包被的肠道微生物菌群,16S rRNA基因高通量测序分析其组成及功能。【结果】通过比较两组肺组织切片染色、平均内衬间隔(meanlinearintercept,mLI)和肺泡灌洗液炎症因子浓度证实COPD模型鼠建模成功。OTU和主成分分析(principal component analysis,PCA)均发现两组间粪便样品中肠来源IgA包被微生物群落差异大,具有可比性。α多样性分析显示两组间物种多样性无显著统计学差异(P>0.05)。物种组成分析显示:两组肠来源IgA包被的菌群结构和菌群差异具有统计学意义(P生物存在紊乱及基因功能失调。

关键词：慢性阻塞性肺疾病免疫球蛋白A包被肠道微生物 16S rRNA基因测序

刚地弓形虫CDPK1蛋白结构与抗原表位的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2024年第9期19卷 1009-1013,1019页

作者：殷荷党甜甜李佳铭李光琪田婷婷吴赓赵志军宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏医学检验临床医学研究中心宁夏医科大学临床医学院

目的对刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1(Toxoplasma gondii Calcium-dependent protein kinases1,TgCDPK1)的蛋白结构及抗原表位进行分析,为弓形虫病疫苗的研制提供参考依据。方法在NCBI数据库中检索TgCDPK1蛋白的氨基酸序列,分别采用ProtP... 详细信息

目的对刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1(Toxoplasma gondii Calcium-dependent protein kinases1,TgCDPK1)的蛋白结构及抗原表位进行分析,为弓形虫病疫苗的研制提供参考依据。方法在NCBI数据库中检索TgCDPK1蛋白的氨基酸序列,分别采用ProtParam、ProtScale、MotifyScan、TMHMM 2.0、SMART、SOPMA、Phyre2、IEDB、PSORT、STRING、PREDICTED ANTIGENIC PEPTIDES及SYFPEITHI在线分析网站预测TgCDPK1蛋白的氨基酸组成、理化性质、蛋白翻译后修饰位点、结构域、功能域、二级结构、三级结构、互作蛋白、抗原决定簇、B细胞抗原表位及T细胞抗原表位等。结果TgCDPK1蛋白由582个氨基酸组成,其分子式是C_(2898)H_(4573)N_(785)O_(888)S_(25),分子质量单位(Mr)为65.42142×10^(3),理论等电点为6.04,不稳定指数为36.980,脂溶性指数为79.91;该蛋白存在36个蛋白翻译后修饰位点;不含跨膜结构域,但含4个EF-手钙结合域及1个蛋白激酶结构域;蛋白二级结构中52.96%为α-螺旋,14.00%为延长链,7.90%为β-转角,35.05%为无规则卷曲;共含24个抗原决定簇,平均抗原倾向指数为1.0237;TgCDPK1蛋白抗原表位分布广泛,含有8个B细胞抗原表位、14个CTL细胞表位和12个Th细胞表位。结论TgCDPK1蛋白含有多种抗原表位,免疫原性高,可作为弓形虫病疫苗研制的候选蛋白。

关键词：刚地弓形虫钙依赖性蛋白激酶1 生物信息学分析免疫原性

敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 404-410页

作者：任超刘文淼骆佳宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院病案统计室宁夏银川750001 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750001

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨... 详细信息

目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平,并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、DUSP5敲低(si-DUSP5)组、si-NC联合BCG感染组、si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10的mRNA表达,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达,并在BCG刺激4 h后,DUSP5表达量达到高峰;与si-NC联合BCG感染组相比,敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、IL-6与TNF-α表达与分泌,而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响;且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。

关键词：卡介苗(BCG) 双特异性磷酸酶5(DUSP5) RAW264.7巨噬细胞炎性反应

弓形虫ROP16蛋白与NKRF互作对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和周期的影响

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 982-992页

作者：周毓宁赵志军李光琪李佳铭党甜甜林永仙于欣宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏银川750004 宁夏临床病原微生物重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学检验学院宁夏银川750004

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP1... 详细信息

为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。

关键词：非小细胞肺癌 ROP16蛋白刚地弓形虫 NF-κB通路 NF-κB抑制因子

刚地弓形虫I型棒状蛋白16对肺腺癌细胞中程序性配体--1表达及其与程序性死亡蛋白1结合的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2024年

作者：李光琪周毓宁马少寒田梅党甜甜赵志军宁夏回族自治区临床病原微生物重点实验室宁夏医科大学总医院医学实验中心宁夏回族自治区医学检验临床研究中心宁夏医科大学第一临床医学院

目的观察刚地弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型棒状体蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16）对肺腺癌细胞中程序性死亡配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-LI）表达的影响，探索刚地弓形虫I型ROP16蛋白对肺腺癌细胞PD-L1相对表达量、细胞膜表... 详细信息

目的观察刚地弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型棒状体蛋白16(rhoptry protein 16,ROP16）对肺腺癌细胞中程序性死亡配体-1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-LI）表达的影响，探索刚地弓形虫I型ROP16蛋白对肺腺癌细胞PD-L1相对表达量、细胞膜表面相对分布量及程序性死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD1)PD-1/PD-L1结合的影响。方法分别构建过表达刚地弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白慢病毒载体，并转染A549细胞系。以A549细胞为空白对照组，A549细胞转染慢病毒空表达载体为阴性对照组，过表达刚地弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞为实验组。通过嘌呤霉素筛选稳定过表达细胞株并通过Western blotting、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR）及免疫荧光实验进行验证。利用Western blotting及RT-qPCR技术分别检测刚地弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白过表达组及空白对照组、阴性对照组A549细胞中PD-L1表达水平，并通过流式细胞术对细胞膜表面PD-L1相对分布量进行检测。以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）为原理设计PD-1/PD-L1表面结合实验，评估A549细胞内刚地弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白对PD-1/PD-L1结合的影响。结果空白对照组、阴性对照组及刚地弓形虫I、II、III型ROP16过表达组中ROP16蛋白相对表达量分别为0、0、（1.546±0.091）、（1.822±0.047）、（2.334±0.089),ROP16 mRNA相对表达量分别为（2.153±0.949）、（2.436±1.614）、（14.343±0.020）、（12.577±0.285）、（15.090±0.420），差异均有统计学意义（F=1 339.00、483.50,P均实验结果显示，刚地弓形虫I、II、III型ROP16蛋白主要定位于细胞核中。空白对照组、阴性对照组及刚地弓形虫I、II、III型ROP16过表达组PD-L1蛋白相对表达量分别为（0.685±0.109）、（0589±0.114）、（1.007±0.117）、（0.572±0.151）、（0.426±0.116),PD-L1 m RNA相对表达量分别为（1.012±0.190）、（1.281±0.465）、（1.950±0.175）、（0.889±0.251）、（0.230±0.192），差异均有统计学意义（F=9.46、14.18,P均学意义（F=28.31,P学差异（F=10.45、11.68、52.68,P均<0.05），其中刚地弓形虫Ⅰ型ROP16过表达组A值均高于空白对照组及阴性对照组（P均<0.05），表明刚地弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白以浓度依赖方式促进A549细胞中PD-L1与PD-1结合。结论过表达刚地弓形虫Ⅰ型ROP16蛋白可在mRNA及蛋白水平上调A549细胞中PD-L1表达及在A549细胞膜表面的相对分布量，并以浓度依赖方式影响PD-1/PD-L1结合。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白16 肺腺癌程序性死亡配体-1 程序性死亡蛋白1

FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制结直肠肿瘤细胞的铁死亡

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南方医科大学学报 2024年第5期44卷 885-893页

作者：王南石斌马小兰吴伟超曹佳宁夏医科大学总医院硕士培养站宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院急诊科宁夏银川750004 银川市第一人民医院耳鼻喉科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院医学科学研究院外科学研究室宁夏银川750004

目的探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制。方法使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和... 详细信息

目的探讨脆性X智力障碍蛋白(FMRP)调控结直肠肿瘤(CRC)细胞逃避铁死亡的作用机制。方法使用RT-qPCR和Western blotting方法验证FMRP在CRC细胞中的表达;利用TCGA数据库分析FMRP参与调控CRC进展的生物功能及信号通路;采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建FMRP过表达载体(Lv-FMRP)和敲低载体(siFMRP-1、siFMRP-2、siFMRP-3),细胞实验设Control组、NC组、siFMRP-1组、siFMRP-2组、siFMRP-3组、Lv-NC组、Lv-FMRP组;采用CCK8和平板克隆实验检测细胞增殖;采用MDA/ROS/GSH/Fe^(2+)试剂盒检测细胞铁死亡水平;采用JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位变化;采用Western blot检测铁死亡相关蛋白及RAS/MAPK信号通路相关蛋白表达;利用裸鼠皮下成瘤实验观察FMRP对肿瘤生长的影响。结果与正常肠粘膜上皮细胞NCM460相比,FMRP在CRC细胞中明显高表达(P生物过程相关,与谷胱甘肽代谢通路相关;体外实验结果显示,与Control组相比,FMRP敲低组细胞增殖能力降低,GSH含量降低,MDA和ROS含量升高,Fe^(2+)荧光强度增强(P实验结果显示,敲低FMRP抑制瘤体生长,抑制SLC7A11表达(P<0.01);进一步检测RAS/MAPK信号通路,发现敲低FMRP导致ERK、MEK、MAPK、RAS蛋白磷酸化水平降低,过表达FMRP上述蛋白磷酸化水平升高(P<0.05)。结论FMRP通过激活RAS/MAPK信号通路抑制细胞铁死亡促进CRC恶性进展。

关键词： FMRP 铁死亡 RAS/MAPK信号通路结直肠肿瘤

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miR-485-5p靶向氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第2期40卷 258-268页

作者：胡东来赵梓岐李元杨丽雷艳丽楚元奎宁夏医科大学临床医学院检验学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院科研平台银川750004 宁夏医科大学总医院医学实验中心银川750004

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关... 详细信息

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤。尽管采用雄激素剥夺疗法等策略在一定程度上对治疗前列腺癌有效,但大多数患者最终会进展为临床尚无有效治疗手段的去势抵抗性前列腺癌。因此,寻找新的更加有效的前列腺癌治疗靶点就显得尤为关键。多项研究表明,微RNA(microRNAs,miRNAs)的异常表达与肿瘤的发生相关。已有报道显示,miRNA-485-5p(miR-485-5p)在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但其在前列腺癌中的作用在较大程度上仍未可知。本研究旨在探究miR-485-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用与机制。生物信息学预测和qRT-PCR检测发现,miR-485-5p在前列腺癌中表达下调。平板克隆形成实验、Transwell实验和划痕愈合实验证明,转染miR-485-5p模拟物显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。生物信息学预测、双荧光素酶报告法、Western印迹和qRT-PCR检测证实,氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylglucosamine transferase,OGT)是miR-485-5p的一个下游直接靶标。进一步的分析和检测显示,OGT在前列腺癌中呈高表达,转染OGT的siRNA能够显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,同时有效逆转转染miR-485-5p抑制物所发挥的促癌作用。综上所述,miR-485-5p可以通过负向调控OGT进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释miR-485-5p在前列腺癌中发生发展的作用和机制,可为寻找前列腺癌的治疗靶点提供实验依据。

关键词： miR-485-5p 前列腺癌氧连接的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶增殖迁移

超广角视网膜激光扫描成像系统在DR筛查中的应用评价

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中华实验眼科杂志 2024年第8期42卷 722-728页

作者：杨默迟魏文斌王倩宁夏医科大学总医院眼科银川750004 首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心眼内肿瘤诊治研究北京市重点实验室北京市眼科学与视觉科学重点实验室北京100730

目的评价超广角视网膜激光扫描成像(UWFSLO)在糖尿病视网膜病变(DR)筛查中的应用价值。方法采用横断面研究,选取2016年10—12月在河北省唐山市开滦康复医院行DR筛查的2型糖尿病患者1288例2304眼,收集患者一般信息,完成UWFSLO和45°水平... 详细信息

目的评价超广角视网膜激光扫描成像(UWFSLO)在糖尿病视网膜病变(DR)筛查中的应用价值。方法采用横断面研究,选取2016年10—12月在河北省唐山市开滦康复医院行DR筛查的2型糖尿病患者1288例2304眼,收集患者一般信息,完成UWFSLO和45°水平两视野数字彩色眼底照相检查,比较DR的检出及分级水平。不同眼底检查对DR分级的一致性采用Cohen Kappa检验。结果去除成像不清晰及缺失的图像,最终1857眼纳入分析。彩色眼底照相、UWFSLO复合彩色图像及绿通道图像对DR的检出率分别为31.3%(581/1857)、44.5%(826/1857)和43.4%(807/1857),差异有统计学意义(χ^(2)=85.547,P学意义(均P学意义(Z=-16.489、-4.198、-2.111,均P<0.05)。结论UWFSLO较45°水平两视野数字彩色眼底照相对DR的检出及分级评估水平更高,其中绿通道图像在MA、IRMA和小的NV病变检出上更为出色。在大规模人群DR的筛查及诊断中,UWFSLO具有较好的应用价值。

关键词：糖尿病糖尿病视网膜病变大规模筛查超广角视网膜激光扫描成像两视野数字彩色眼底照相

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