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合成MRI评估高血糖大鼠脑缺血再灌注早期血脑屏障结构和基质金属蛋白酶9表达

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中国医学影像技术 2023年第5期39卷 651-656页

作者：李鹏马艳梅杨晶陈兵李艳徐洁张建忠景丽宁夏医科大学基础医学院病理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院放射科宁夏银川750004

目的观察高血糖大鼠脑缺血再灌注(CIR)早期血脑屏障(BBB)结构和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达及其与合成MRI(syMRI)定量参数的关系。方法选取SD雄性大鼠30只,随机分为高血糖短暂性大脑中动脉栓塞再灌注(tMCAOR)组(HG组,n=12)、正常血糖t... 详细信息

目的观察高血糖大鼠脑缺血再灌注(CIR)早期血脑屏障(BBB)结构和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达及其与合成MRI(syMRI)定量参数的关系。方法选取SD雄性大鼠30只,随机分为高血糖短暂性大脑中动脉栓塞再灌注(tMCAOR)组(HG组,n=12)、正常血糖tMCAOR组(NG组,n=12)及正常血糖假手术组(Sham组,n=6)。行syMRI-T2WI,观察每组大鼠脑梗死体积百分比,计算相对T1(rT1)值、相对T2(rT2)值和相对质子密度(rPD)值。采用免疫组织化学染色观察免疫球蛋白G(IgG)外渗和MMP-9含量。采用蛋白质印迹法检测BBB紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连结蛋白-5(Claudin-5)]和MMP-9表达水平。结果 HG组、NG组及Sham组分别有9、9及6只大鼠建模成功。HG组大鼠脑梗死体积百分比、rT1值、rT2值、rPD值、IgG染色光密度、MMP-9染色光密度及MMP-9表达水平均高于NG组(P均<0.05),而ZO-1、Occludin及Claudin-5表达水平均低于NG组(P均<0.05);Sham组均未见明显异常。CIR早期,rT1、rT2和rPD值均与IgG染色光密度(r=0.727、0.797、0.732,P均<0.01)及MMP-9染色光密度(r=0.673、0.674、0.597,P均<0.05)呈正相关。结论高血糖大鼠CIR早期BBB结构被破坏、MMP-9表达上调;且梗死区rT1、rT2和rPD值均与IgG外渗及MMP-9表达水平有关。

关键词：大鼠高血糖血脑屏障脑损伤大脑中动脉基质金属蛋白酶9 磁共振成像

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高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注时小胶质细胞活化的影响

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解放军医学杂志 2017年第12期42卷 1066-1071页

作者：褚冬马艳梅郭永真张建忠景丽宁夏医科大学基础医学院病理学系银川750001 宁夏医科大学法医司法鉴定中心银川750001

目的观察高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注时小胶质细胞活化的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为正常血糖假手术组(NG sham组,n=5)、高血糖假手术组(HG sham组,n=5)、正常血糖脑缺血再灌注组(NG手术组,n=35)和高血糖脑缺血再灌注组... 详细信息

目的观察高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注时小胶质细胞活化的影响。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为正常血糖假手术组(NG sham组,n=5)、高血糖假手术组(HG sham组,n=5)、正常血糖脑缺血再灌注组(NG手术组,n=35)和高血糖脑缺血再灌注组(HG手术组,n=35)。采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法制作SD大鼠1型糖尿病模型,大脑中动脉阻塞法(MCAO)建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用小胶质细胞特异性标志蛋白Iba-1免疫组化标记小胶质细胞,观察NG组和HG组大脑中动脉阻塞30min,再灌注0.5、3、6h以及1、3、7、14d大鼠(每时间点5只)室周带和尾状核区小胶质细胞的变化;采用Iba-1和核增殖抗原(PCNA)免疫荧光双标法检测小胶质细胞的增殖变化。结果脑缺血再灌注后,可见大鼠脑组织明显水肿,呈网格状,HE染色变淡,神经元肿胀,胞质空泡状,胞核固缩,并可见炎细胞浸润,HE染色结果显示HG手术组与NG手术组比较脑损伤更为明显。脑缺血再灌注后第3天,免疫组化染色可见梗死周边区、梨状皮质和躯体感觉皮质的小胶质细胞明显活化,于第7天达到峰值,且其活化状态可以持续到再灌注第14天。免疫荧光双标染色结果显示脑缺血再灌注后小胶质细胞数量增加与其增殖有关,其增殖程度同样是在缺血再灌注后第3天增加,第7天时达高峰。与NG手术组比较,HG手术组小胶质细胞的活化及增殖较弱(P<0.05),但均明显高于各自的假手术组(P<0.05)。结论高血糖导致的缺血后脑组织小胶质细胞活化、增殖抑制可能参与了高血糖加重缺血性脑损伤的过程。

关键词：小神经胶质细胞高血糖脑再灌注损伤

氧化槐定碱对大鼠网状结构脑电活动及其功率谱的影响

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中国中药杂志 2010年第9期35卷 1170-1172页

作者：余建强李玉香赵承军贡欣刘建平王峰蒋袁絮宁夏医科大学基础医学院药理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学基础医学院基础医学实验中心宁夏银川750004 宁夏医科大学护理学院基础护理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室宁夏银川750004

目的:观察氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)对麻醉大鼠中脑网状结构脑生物电(EEG)变化及功率谱的影响。方法:利用脑立体定位技术,将电极置入大鼠中脑网状结构,采用单极引导法及计算机辅助FFT技术以脑电图、功率谱、频率分配为指标记录并... 详细信息

目的:观察氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)对麻醉大鼠中脑网状结构脑生物电(EEG)变化及功率谱的影响。方法:利用脑立体定位技术,将电极置入大鼠中脑网状结构,采用单极引导法及计算机辅助FFT技术以脑电图、功率谱、频率分配为指标记录并分析OSR对大鼠中脑网状结构脑生物电变化的影响。结果:每只侧脑室注射(icv)OSR2.5,5,10mg,大鼠中脑网状结构出现以低幅慢波为主并伴有梭形睡眠波;脑电总功率下降(P<0.05),θ,α波占总频率比例升高(P<0.05)。结论:OSR具有中枢抑制作用,其作用与降低大鼠中脑网状结构电活动有关;中脑网状结构可能是OSR中枢抑制作用传导环路上的结构之一。

关键词：氧化槐定碱网状结构脑电图大鼠

氧化槐定碱对大鼠额叶皮层脑电活动及功率谱的影响

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中国药理学通报 2010年第8期26卷 1026-1029页

作者：余建强李玉香朱万平黄菱王峰蒋袁絮宁夏医科大学基础医学院药理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学基础医学院基础医学实验中心宁夏银川750004 宁夏医科大学护理学院基础护理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室宁夏银川750004

目的观察氧化槐定碱(OSR)对麻醉大鼠额叶皮层脑生物电(EEG)变化及其功率谱的影响。方法利用脑立体定位技术,将电极置入大鼠额叶皮层,采用单极引导法及计算机辅助傅里叶变换技术(FFT)以脑电图、功率谱、频率分配为观察指标,记录并分析OS... 详细信息

目的观察氧化槐定碱(OSR)对麻醉大鼠额叶皮层脑生物电(EEG)变化及其功率谱的影响。方法利用脑立体定位技术,将电极置入大鼠额叶皮层,采用单极引导法及计算机辅助傅里叶变换技术(FFT)以脑电图、功率谱、频率分配为观察指标,记录并分析OSR对大鼠额叶皮层脑生物电变化的影响。结果侧脑室注射(icv)OSR2.5、5、10毫克/只,大鼠额叶皮层脑电出现以低幅慢波为主并伴有梭形睡眠波的波形;脑电总功率明显下降(P<0.05),但δ波占总频率比例升高(P<0.05)。结论 OSR降低皮层脑生物电活动是其中枢抑制作用的明显表现,额叶皮层是参与其中枢抑制作用传导环路上的结构之一。

关键词：氧化槐定碱额叶皮层脑电图功率谱频率分配大鼠

黄芩苷调节let-7i-3p/PI3K/Akt/NF-κB信号轴减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞NLRP3炎性小体活化

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2313-2319页

作者：张炜王莉杨雨欣马锐王丽黄菱万巧凤宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院风湿科宁夏银川750003 宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处... 详细信息

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处理前后NLRP3的表达;Western blot检测黄芩苷处理48 h后,p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞上清中IL-1及IL-18的含量。为探究黄芩苷减轻NLRP3炎性小体活化的机制,采用双荧光素酶及Western blot验证let-7i-3p与PIK3CA的对应关系;RT-qPCR检测黄芩苷干预前后let-7i-3p及PI3K的表达;采用let-7i-3p干扰,验证黄芩苷是否减轻了增强的NLRP3炎性小体的活化。结果50、100 mg·L^(-1)黄芩苷明显减轻了NLRP3炎性小体的活化,抑制p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白的表达,抑制IL-1、IL-18的分泌。let-7i-3p与PIK3CA存在靶向对应关系,黄芩苷上调了let-7i-3p的表达、下调了PIK3CA的表达;黄芩苷减轻了因let-7i-3p干扰而增强的NLRP3炎性小体的活化。结论黄芩苷经上调let-7i-3p表达、抑制PI3K/Akt/NF-κB信号转导,从而减轻NLRP3炎性小体的活化。

关键词：黄芩苷类风湿关节炎类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 NLRP3炎性小体 miRNA 双荧光素酶

Toll样受体4在热射病大鼠心功能损伤及心肌铁死亡中的作用

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解放军医学杂志 2023年第3期48卷 249-257页

作者：陈丹丹徐涛薛姝婧朱玲勤李光华宁夏医科大学基础医学院生理学系宁夏银川750004 宁夏医科大学公共卫生与管理学院宁夏银川750004

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在高温致热射病大鼠心功能损伤及心肌铁死亡中的作用。方法(1)24只SD大鼠随机分为对照组与热射病(HS)组,每组12只。热打击期间,采用肛温计测量大鼠核心体温,BL-420F生物机能实验系统测量大鼠心率及平均动脉压... 详细信息

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在高温致热射病大鼠心功能损伤及心肌铁死亡中的作用。方法(1)24只SD大鼠随机分为对照组与热射病(HS)组,每组12只。热打击期间,采用肛温计测量大鼠核心体温,BL-420F生物机能实验系统测量大鼠心率及平均动脉压。(2)24只SD大鼠随机分为对照组、铁死亡抑制剂(Liproxstatin-1)组、HS组与HS+Liproxstatin-1组,每组6只。建模前30 min,Liproxstatin-1组和HS+Liproxstatin-1组腹腔注射Liproxstatin-1(10 mg/kg)。采用免疫荧光染色检测大鼠心肌组织中溶质载体家庭成员7A11(SLC7A11)蛋白表达情况,Western blotting检测大鼠心肌组织中SLC7A11、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)蛋白的表达。(3)48只SD大鼠随机分为对照组、TLR4抑制剂(TAK-242)组、HS组与HS+TAK-242组,每组12只。建模前30 min,TAK-242组和HS+TAK-242组腹腔注射TAK-242(3 mg/kg)。采用免疫荧光染色检测心肌组织中TLR4蛋白表达情况,BL-420F生物功能实验系统检测心脏血流动力学指标[左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大升高速率(+dp/dtmax)及最大下降速率(±dp/dtmax)],超声检测心功能指标[心输出量(CO)、舒张期左室后壁厚度(LVPWd)和收缩期左室后壁厚度(LVPWs)],Western blotting检测TLR4/NF-κB-p53信号通路蛋白[TLR4、核因子κB(NF-κB)、p53]与铁死亡相关蛋白(SLC7A11、GPX4)的表达。结果与对照组比较,HS组大鼠热打击180 min时核心体温及心率明显升高(P<0.01),平均动脉压明显降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11表达明显降低(P<0.01);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组SLC7A11表达明显增高(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中SLC7A11、GPX4表达水平明显下降(P<0.05);与HS组比较,HS+Liproxstatin-1组大鼠SLC7A11、GPX4表达水平明显增高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中TLR4表达明显增高(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组TLR4表达明显降低(P<0.01)。与对照组比较,HS组LVEDP升高,LVSP降低(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组LVSP、LVEDP、+dp/dtmax及±dp/dtmax明显改善(P<0.05)。与对照组比较,HS组大鼠CO降低,LVPWd、LVPWs增高(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组CO增高,LVPWd、LVPWs降低(P<0.05)。Westernblotting检测结果显示,与对照组比较,HS组大鼠心肌组织中TLR4、NF-κB、p53表达水平明显增高(P<0.01),SLC7A11、GPX4表达水平明显降低(P<0.01);与HS组比较,HS+TAK-242组TLR4、NF-κB、p53表达水平明显降低,SLC7A11、GPX4表达水平明显升高(P<0.05)。结论热射病所致大鼠心功能损伤过程中可能存在铁死亡,抑制TLR4可减轻心功能异常,其机制可能与TLR4/NF-κB-p53/SLC7A11信号通路介导的铁死亡相关。

关键词：热射病 Toll样受体4 铁死亡心功能

DZNep调控乳腺癌外泌体在肿瘤微环境中的作用

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中国癌症杂志 2022年第9期32卷 827-835页

作者：吕叶英叶霞杨文静厚玉瑾袁春秀曹相玫宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科宁夏银川750002 宁夏医科大学基础医学院病理学系宁夏银川750002

背景与目的:乳腺癌是全球女性发病率最高的恶性肿瘤,患者预后差。肿瘤源性外泌体会改变肿瘤微环境并参与调控肿瘤的发生、发展及转移,这将为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。DZNep能够靶向调控H3K27me3组蛋白甲基转移酶的降解,并特异性... 详细信息

背景与目的:乳腺癌是全球女性发病率最高的恶性肿瘤,患者预后差。肿瘤源性外泌体会改变肿瘤微环境并参与调控肿瘤的发生、发展及转移,这将为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。DZNep能够靶向调控H3K27me3组蛋白甲基转移酶的降解,并特异性地诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制多种肿瘤细胞增殖和迁移。本研究旨在探索DZNep对乳腺癌源性外泌体的影响,并观察其通过调节细胞间连接从而改变乳腺癌细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用。方法:应用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和在线分析软件GEPIA2分析EZH2在乳腺癌中的表达,使用肿瘤免疫估计资源(Tumor Immunity Estimation Resources,TIMER)分析EZH2与肿瘤微环境中细胞因子及EMT相关蛋白表达的关系。采用DZNep干预乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用差速超速离心法提取外泌体,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测CD9、CD63和TSG101的表达情况并鉴定外泌体膜结合蛋白的表达,采用纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术对外泌体的布朗运动进行追踪和分析并结合Stokes-Einstein方程式计算出外泌体颗粒的流体力学直径和浓度,采用透射电镜分析外泌体的大小、形态等,以此来探究DZNep对乳腺癌源性外泌体的改变。利用Western blot分别检测EZH2,细胞间连接蛋白如闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、层粘连蛋白(laminin)、水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)、连接子蛋白43(connexin 43)、claudin 5和Ⅵ型胶原蛋白(collagenⅥ),EMT相关蛋白E-cadherin和vimentin的表达情况,分析DZNep对肿瘤微环境的调节机制。结果:EZH2在癌组织中的表达高于癌旁组织,EZH2高表达与Luminal A型乳腺癌免疫细胞和基质细胞上调均呈正相关,与乳腺癌E-cadherin、N-cadherin、vimentin表达呈正相关,与BRCA-Luminal B型E-cadherin表达呈正相关、N-cadherin表达呈负相关,与BRCA-Luminal A型N-cadherin、vimentin表达呈正相关(P<0.05)。CD9、CD63、TSG101的表达表明成功提取了MDA-MB-231细胞的外泌体,经DZNep干预后,外泌体粒径明显减小且数量下降,细胞连接蛋白occludin、ZO-1、laminin、AQP4及connexin 43表达降低,collagenⅥ、封闭蛋白5(claudin 5,CLDN5)表达增加;EMT相关蛋白E-cadherin表达增加,vimentin表达降低。结论:DZNep通过抑制EZH2减少乳腺癌细胞中的外泌体生成,进一步改变肿瘤细胞微环境,从而影响EMT现象。

关键词： DZNep EZH2 外泌体细胞间连接上皮-间充质转化

下调TRIM33基因对人胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭的影响

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解放军医学杂志 2019年第3期44卷 210-214页

作者：王文莙王菲张弛杨媛媛马艳梅徐远义曹相玫宁夏医科大学基础医学院病理学系银川750004

目的观察三结构域家族33(TRIM33)基因下调对人胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭能力的影响,探讨TRIM33基因在胃癌进展中的作用。方法将人胃癌细胞BGC-823分为空载组(对照组)和si-TRIM33基因转染组(siTRIM33组)。对照组以脂质体Lipofectamine2... 详细信息

目的观察三结构域家族33(TRIM33)基因下调对人胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭能力的影响,探讨TRIM33基因在胃癌进展中的作用。方法将人胃癌细胞BGC-823分为空载组(对照组)和si-TRIM33基因转染组(siTRIM33组)。对照组以脂质体Lipofectamine2000为载体转入空载体,si-TRIM33组用重组质粒si-TRIM33转染。采用Westernblotting检测TRIM33蛋白的表达水平,CCK-8和EdU法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率,划痕实验检测细胞侵袭能力。结果转染si-TRIM33后BGC-823细胞TRIM33蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。CCK-8实验结果显示,培养24、48h,si-TRIM33组细胞增殖能力(分别为0.75±0.02、1.16±0.10)与对照组(分别为0.48±0.06、0.51±0.11)比较均明显增强(P<0.01)。EdU实验结果显示,si-TRIM33组细胞增殖率[(42.92±5.05)%]明显高于对照组[(14.43±1.79)%,P<0.01]。平板克隆形成实验结果显示,si-TRIM33组克隆球数量[(1233.00±242.62)个]明显多于对照组[(675.00±141.52)个,P<0.05]。侵袭实验中,转染12h,对照组和si-TRIM33组细胞划痕愈合率分别为(10.5±1.8)%、(16.9±3.2)%,转染24h划痕愈合率分别为(16.7±1.6)%、(25.8±3.1)%,si-TRIM33组划痕愈合率与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论下调TRIM33基因可增强人胃癌细胞BGC-823的增殖和侵袭能力。

关键词：胃癌转染 TRIM33 增殖侵袭

无创性延迟肢体缺血预适应对心脏性猝死的预防作用研究

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中国药理学通报 2016年第11期32卷 1565-1570页

作者：李燕陈文华孙凯张颖安梦瑶潘莹莹吴艳娜康毅高卫真娄建石天津医科大学基础医学院药理学系天津300070 宁夏医科大学总医院宁夏银川750004

目的研究无创性延迟肢体缺血预适应(NDLIP)对心脏猝死的预防作用。方法取健康,体质量(250±10)g的SD♂大鼠30只,随机分为3组,1心肌梗死(MI)组:手术结扎动物冠状动脉左前降支(left anterior descending artery,LAD),2周后成模;2 MI+NDLIP... 详细信息

目的研究无创性延迟肢体缺血预适应(NDLIP)对心脏猝死的预防作用。方法取健康,体质量(250±10)g的SD♂大鼠30只,随机分为3组,1心肌梗死(MI)组:手术结扎动物冠状动脉左前降支(left anterior descending artery,LAD),2周后成模;2 MI+NDLIP组:动物心肌梗死模型成功后,每隔1 d进行1次远端肢体缺血预适应,直至第4周;3假手术(Sham)组:作为阴性对照组,心脏LAD只穿线不结扎,不实施NDLIP。各组动物常规饲养,于4周末静脉输注间羟胺(0.2 mg·min^(-1))进行猝死,记录致猝死过程中的ECG、猝死药物累积量、猝死时间,于猝死末期腹主动脉取血,ELISA法测定血清caspase-3、HSP70、SOD含量。结果间羟胺致动物心脏猝死时,随着给药量的增加,动物的心率呈下降趋势,记录给药0、5、10、30、50、70、90 min时动物的心率。与MI组相比,MI+NDLIP组给药0、5、10、30、50 min时动物心率[(479±8)vs(416±19)beat·min^(-1),(446±32)vs(370±20)beat·min^(-1),(376±53)vs(305±29)beat·min^(-1),(307±63)vs(244±33)beat·min^(-1),(283±45)vs(121±35)beat·min^(-1),P<0.01]明显较高。与MI组相比,MI+NDLIP组动物的致猝死药物累积量、猝死时间[(14.58±3.03)vs(10.76±2.73)mg,(72.9±15.2)vs(53.8±13.6)min,P<0.01]都明显增加。与MI组相比,MI+NDLIP组血清caspase-3[(2.01±0.52)vs(2.34±0.38)μg·L^(-1),P<0.01]表达量明显降低;HSP70[(3.01±0.58)vs(2.70±0.43)μg·L^(-1),P<0.05]水平明显升高;SOD[(1.99±0.65)vs(1.70±0.58)mg·L^(-1),P<0.01]水平明显升高。结论无创性延迟肢体缺血预适应能有效预防大鼠心梗后心脏性猝死,其机制可能与降低心肌细胞凋亡、增加保护性蛋白的表达以及增强心肌抗氧化能力有关。

关键词：心脏猝死心肌梗死无创性延迟肢体缺血预适应caspase-3 HSP70 SOD