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滤泡调节性T细胞减少与类风湿性关节炎发生和发展相关

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第2期37卷 152-157页

作者：王佩佩池淑红王雪梅崔振华张艳丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院风湿科宁夏银川750004

目的探讨滤泡调节性T(Tfr)细胞在类风湿性关节炎(RA)发病中的可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康体检者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)ICOS^(+)Tfr细胞的百分比并分析Tfr细胞比例与RA临床实验室检测指标的相关性... 详细信息

目的探讨滤泡调节性T(Tfr)细胞在类风湿性关节炎(RA)发病中的可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康体检者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)ICOS^(+)Tfr细胞的百分比并分析Tfr细胞比例与RA临床实验室检测指标的相关性;ELISA检测患者血清中白细胞介素10(IL-10)、IL-12、IL-2、转化生长因子β(TGF-β)、CXC趋化因子配体13(CXCL13)的水平;实时定量PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)的B细胞淋巴瘤因子6(Bcl6)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp-1)的mRNA表达;免疫组织化学法检测RA患者关节滑膜Bcl6、CXCL13的表达。结果与健康对照组相比,RA患者外周血Tfr细胞比例显著下降;Tfr细胞百分比与C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、血沉(ESR)、28关节疾病活动度评分(DAS28)水平呈负相关;RA患者血清中IL-12、CXCL13表达水平显著升高,IL-2、IL-10、TGF-β表达水平显著降低;RA患者PBMC的Bcl6 mRNA水平显著增高,而Blimp-1 mRNA的表达显著降低;RA患者的关节滑膜中观察到Bcl6、CXCL13显著高表达。结论外周血Tfr细胞比例减少可能与RA的发生发展有关。

关键词：类风湿性关节炎(RA) 滤泡调节性T(Tfr)细胞白细胞介素趋化因子

小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体组分mRNA动态分析

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中国免疫学杂志 2016年第6期32卷 782-786页

作者：袁梦娇商正玲马亚萍吴家红贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院病原生物学实验室贵阳550025

目的:观察小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体相关组分的mRNA动态变化。方法:分别以LPS(1μg/ml)、IL-4(20 ng/ml)体外刺激小鼠ANA-1细胞,于刺激后3、8、12及24 h时间点收获细胞,Trizol法提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测IL-... 详细信息

目的:观察小鼠ANA-1巨噬细胞不同极化状态下补体相关组分的mRNA动态变化。方法:分别以LPS(1μg/ml)、IL-4(20 ng/ml)体外刺激小鼠ANA-1细胞,于刺激后3、8、12及24 h时间点收获细胞,Trizol法提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、CCL2、Arg-1的表达,判断细胞极化情况,检测胞内C3、Cf B、CRIg、C1q补体分子mRNA的动态表达。结果:细胞极化情况:刺激3 h后LPS组IL-1β、CCL2的mRNA表达上调,12 h达高峰(2^(-△△Ct)分别为297.0±31.0和19.9±3.3);在IL-4组中以Arg-1mRNA表达上调显著,于24 h达高峰(2^(-△△Ct):27.3±9.1),提示LPS组细胞向M1方向极化,IL-4组向M2方向极化。细胞内补体mRNA的动态:两极化组的相应补体组分均表现为不同程度的上调,其中:C1q、C3在M2极化组刺激8 h后显著上调,刺激12 h时达高峰(2^(-△△Ct)分别为94.9±12.9和11.3±2.4);Cf B因子在M1极化组中显著上调,以刺激12 h表达上调达高峰(2^(-△△Ct)为61.4±6.2);CRIg在两组中均在24 h时表达上调且具有显著性差异(P<0.05)。结论:LPS/IL-4刺激3 h后,ANA-1细胞分别向M1、M2方向极化;不同补体组分mRNA的表达在两组中均上调但表达谱不同,其中C1q、C3和CRIg在M2极化组中上调更为显著,而Cf B因子在M1极化组中显著上调;除CRIg外,C1q、C3及Cf B因子均在刺激12 h时上调达高峰,上述结果提示补体组分的变化可能与极化的巨噬细胞功能有关。

关键词： ANA-1 巨噬细胞极化补体组分mRNA

肺炎支原体重组P1蛋白多克隆抗体的制备及纯化

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1208-1210页

作者：曾晶晶王舰赵芝娜刘忠顺董占双王桂珍中国医科大学基础医学院病原生物学教研室沈阳110001

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;S... 详细信息

目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;SDS-PAGE分析抗体的纯度;量子点标记纯化抗体,分析抗体的免疫活性;直接免疫荧光法检测抗体的特异性。结果重组P1蛋白兔免疫血清抗体效价为1∶25 600;纯化的抗体浓度为3.689μg/μl;SDS-PAGE显示相对分子质量58 000的重链条带;用量子点标记纯化的抗体仍保持较高的免疫活性,与其他呼吸道常见病原菌均未发生特异性结合。结论获得的纯化Mp P1蛋白IgG抗体具有较高的免疫活性和特异性,可用于临床Mp感染的抗原诊断。

关键词：支原体,肺炎 P1蛋白多克隆抗体

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幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响

南方医科大学学报 2014年第9期34卷 1241-1247页

作者：田志颖杨致邦黄微微高继业周雪朱黎黎重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室重庆400016 重庆医科大学临床医学2007级七年制儿科1班重庆400016

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后... 详细信息

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNAV6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶技术(PCR-DGGE)对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-DAnalysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图谱上的组间差异条带用16S rDNAV6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果 DGGE指纹图谱分析显示,实验组DNA条带数量极显著高于对照组(P<0.01),多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组(0.01

关键词：食道下端菌群幽门螺杆菌感染聚合酶链反应-变形梯度凝胶电泳技术

白细胞介素-15协同新城疫病毒HN基因抗肿瘤免疫的作用

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四川大学学报（医学版） 2005年第2期36卷 284-285页

作者：王秀荣王秀英冯惠东王永祥魏林河北医科大学基础医学院免疫学教研室石家庄050017 华北制药集团河北医科大学基础医学院病原生物学教研室

目的　探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法　采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。... 详细信息

目的　探讨白细胞介素 15 (IL- 15 )质粒、新城疫病毒 HN基因 (PCD- HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法　采用 MTT法和乳酸脱氢酶释放法 ,检测 IL- 15质粒、PCD- HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中 T淋巴细胞的增殖和 NK细胞的活性。结果　 IL- 15质粒、PCD- HN质粒同时免疫小鼠 ,其淋巴细胞增殖指数和 NK细胞活性的百分率明显高于其它各组。结论　 IL- 15质粒联合 PCD- HN质粒免疫小鼠 ,对抑制肿瘤生长具有迭加效应。

关键词：白细胞介素-15 新城疫病毒HN基因 NK细胞淋巴细胞抗肿瘤免疫

白纹伊蚊(广州株)唾液Aalb_56 ku基因克隆表达与免疫原性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第2期24卷 126-131页

作者：马亚萍陈选静程金芝袁梦娇吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州医科大学基础医学院病原生物学实验室贵阳550025

探讨Aalb_56 ku基因在白纹伊蚊(广州株)不同组织中的表达差异;对唾液腺中Aalb_56 ku基因进行克隆表达并探索其免疫原性。采用实时荧光定量RT-PCR法对雌蚊中肠、脂肪体、唾液腺不同组织中Aalb_56 ku基因的表达差异进行分析。针对Aalb_56... 详细信息

探讨Aalb_56 ku基因在白纹伊蚊(广州株)不同组织中的表达差异;对唾液腺中Aalb_56 ku基因进行克隆表达并探索其免疫原性。采用实时荧光定量RT-PCR法对雌蚊中肠、脂肪体、唾液腺不同组织中Aalb_56 ku基因的表达差异进行分析。针对Aalb_56 ku基因序列设计特异性引物,以唾液腺RNA为模板获得56 ku全长基因序列,构建重组质粒并测序,将测序序列进行生物信息学和抗原表位预测分析。IPTG诱导表达,亲和层析法纯化重组蛋白;制备小鼠特异性抗Aalb_56 ku蛋白抗血清。结果显示,Aalb_56 ku在白纹伊蚊(广州株)唾液腺(SG)中高表达。克隆所获唾液腺56 ku基因全长1 593 bp,可编码530个氨基酸,信息学分析提示该基因含有信号肽序列,等电点为8.40,抗原表位预测提示含有23个表位。p ET30a(+)-56 ku重组质粒可表达约56 k Da大小的融合蛋白,且呈包涵体形式表达,Western blotting鉴定具有His标签。纯化蛋白免疫Balb/c小鼠后可获得1∶100效价的特异性抗血清,提示该重组蛋白具有一定的免疫原性。

关键词：白蚊伊蚊 Aalb_56ku基因重组蛋白免疫原性

中国大陆地区乙型脑炎病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第2期36卷 158-160页

作者：牟小会吕清巧颜凤程金芝郑棉扬商正玲吴家红韦艳贵州医科大学基础医学院现代病原生物学实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室贵阳550025

流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒，三带喙库蚊是其主要的传播媒介，感染人体后可引起流行性乙型脑炎（乙脑）。人群对本病普遍易感，15岁以下儿童发病率较高。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 PCR检测方法 TaqMan 中国大陆地区荧光定量 encephalitis 一步法单股正链RNA病毒

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异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用

南方医科大学学报 2013年第7期33卷 1036-1040页

作者：范贵荣杨致邦黄进重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室//基础医学实验教学中心//病原生物学与免疫实验室重庆400016

目的探讨异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含128μg/ml异烟肼和无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含异烟肼的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养... 详细信息

目的探讨异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含128μg/ml异烟肼和无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含异烟肼的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含异烟肼和无异烟肼的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含异烟肼的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无异烟肼的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对返祖菌及诱导前接种菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论异烟肼成功诱导脓肿分枝杆菌L型,可用于脓肿分枝杆菌耐药机制和防治研究。

关键词：脓肿分枝杆菌 L型细菌异烟肼细胞壁

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利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用

第三军医大学学报 2013年第16期35卷 1717-1720页

作者：范贵荣杨致邦黄进重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室基础医学实验教学中心病原生物学与免疫实验室重庆400016

目的探讨利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含256μg/mL利福平和无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含利福平的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养... 详细信息

目的探讨利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含256μg/mL利福平和无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含利福平的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含利福平和无利福平的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含利福平的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无利福平的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对诱导前接种菌和返祖菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌的细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论利福平成功诱导脓肿分枝杆菌L型。

关键词：脓肿分枝杆菌 L型细菌利福平细胞壁