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RNA pull-down联合质谱分析lncRNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制

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中国组织工程研究 2025年第12期29卷 2492-2499页

作者：夏童童马芳孙浩原刘虹麟张正皓杨佳琪张慧萍吴凯沈江涌姜怡邓李桂忠国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学临床医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学检验学院宁夏回族自治区银川市750004 湖南省妇幼保健院医学遗传科湖南省长沙市410008 宁夏医科大学总医院烧伤科宁夏回族自治区银川市750004

背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行... 详细信息

背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行增生性瘢痕组织切除手术患者的新鲜增生性瘢痕皮肤组织和增生性瘢痕旁正常皮肤组织标本,应用免疫荧光技术检测两种皮肤组织冰冻切片中长链非编码RNA HSFAS的表达。应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白,利用GO和KEGG分析长链非编码RNA HSFAS参与增生性瘢痕进展的主要功能和通路,通过catRAPID和RPISeq网站分析确定长链非编码RNA HSFAS与蛋白的靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中的长链非编码RNA HSFAS表达升高(P生物信息学技术分析验证结果显示,长链非编码RNA HSFAS与支架附着因子B2和DICER1蛋白存在相互结合;③结果显示,长链非编码RNA HSFAS可能通过与支架附着因子B2和DICER1蛋白相互结合调控RNA剪接和加工修饰影响基因表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。

关键词：增生性瘢痕 lncRNA HSFAS 成纤维细胞 RNA pull-down 质谱分析

氧化苦参碱治疗小鼠胶原诱导性关节炎的作用机制

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中国中药杂志 2021年第22期46卷 5895-5901页

作者：詹静慧王佩佩崔振华岳晓琪张艳丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004

苦参为豆科槐属植物苦参Sophorae flavescenstis的干燥根,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性,在医药领域有广泛应用。该实验以苦参中的有效成分氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)为研究对象,探究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)经“... 详细信息

苦参为豆科槐属植物苦参Sophorae flavescenstis的干燥根,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性,在医药领域有广泛应用。该实验以苦参中的有效成分氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)为研究对象,探究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)经“TLR9-MyD88-STAT3”通路对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠B细胞的功能影响从而发挥抗类风湿关节炎的作用。构建牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1J胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,首次免疫后第15天腹腔注射OMT,持续30 d,每隔3 d监测CIA小鼠的关节肿胀度及关节评分;HE染色法观察关节组织病理学情况;采用免疫磁珠分离法(MACS)分选出CIA小鼠脾脏B淋巴细胞;运用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)法检测小鼠血清IL-21的表达水平;Western blot检测B淋巴细胞上Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)、信号转导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription3,p-STAT3)和白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测B淋巴细胞上TLR9、STAT3、IL-21 mRNA的表达水平。结果表明OMT缓解CIA小鼠足爪肿胀度、降低关节炎指数、减轻滑膜炎性细胞浸润及增生程度,降低炎症因子水平,同时抑制B淋巴细胞中TLR9、STAT3、p-STAT3、IL-21的表达。因此,OMT可能通过调节B淋巴细胞上TLR9-STAT3通路从而缓解类风湿关节炎,为临床应用氧化苦参碱治疗类风湿关节炎提供有价值的依据。

关键词：类风湿关节炎 B淋巴细胞氧化苦参碱胶原诱导性关节炎

抗斯氏按蚊中肠蛋白组分的抗体对约氏疟原虫卵囊的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第6期24卷 441-444页

作者：魏秋芬曾令娥孙宝清邵长玲王凤芸诸欣平首都医科大学燕京医学院免疫学与病原生物学教研室北京101300 首都医科大学基础医学院病原生物学教研室北京100069

目的观察抗斯氏按蚊中肠蛋白组分的抗体对约氏疟原虫卵囊的抑制作用。方法解剖实验室饲养斯氏按蚊雌蚊,取中肠(胃)制备中肠蛋白抗原并免疫BALB/c小鼠(8只,100μg/只),共免疫4次,每次间隔7～10d,末次免疫后10d,腋窝动脉取血,分离血清。... 详细信息

目的观察抗斯氏按蚊中肠蛋白组分的抗体对约氏疟原虫卵囊的抑制作用。方法解剖实验室饲养斯氏按蚊雌蚊,取中肠(胃)制备中肠蛋白抗原并免疫BALB/c小鼠(8只,100μg/只),共免疫4次,每次间隔7～10d,末次免疫后10d,腋窝动脉取血,分离血清。用蛋白质印迹(Westernblotting)分析中肠蛋白的免疫活性抗原。用葡聚糖凝胶过滤法获得相对分子质量(Mr)为38000～50000的蛋白。用该中肠蛋白免疫小鼠(12只,100μg/只),共免疫4次,每次间隔7～10d。同时设PBS对照组。末次免疫后7d,ELISA检测小鼠血清中的抗体,抗体效价≥1:2560时,该免疫组小鼠和对照组小鼠经腹腔接种感染约氏疟原虫(约含2×107个感染疟原虫的红细胞),感染后3d取小鼠尾血镜检,雌配子体数>2/10个视野的小鼠作为供血鼠,斯氏按蚊成蚊吸血后9d解剖,计数中肠的卵囊数量。结果West-ernblotting显示斯氏按蚊中肠蛋白抗原的显色区带有8条,其中Mr38000～50000的区带显色较清晰;实验组和对照组中肠卵囊感染率分别为28.70%(62/216)和51.09%(47/92)(P学意义(P免疫活性;针对该中肠蛋白的抗体对约氏疟原虫卵囊的发育有明显的抑制作用。

关键词：斯氏按蚊中肠蛋白抗体卵囊约氏疟原虫抑制作用

重组蛋白P29对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织TGF-β/Smad信号通路的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第3期37卷 316-320页

作者：马锐刘成徐士梅朱明星赵嘉庆万巧凤朱佳佳赵巍宁夏医科大学基础医学院病原生物与医学免疫学教研室银川750004 宁夏医科大学科技中心银川750004

目的观察重组蛋白P29 (r P29)对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的作用。方法36只雌性BALB/c小鼠随机分为r P29免疫组(r P29组)、佐剂组、 PBS组,每组12只。r P29组小鼠皮下注射r P29蛋白(10μg/只,与... 详细信息

目的观察重组蛋白P29 (r P29)对细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路的作用。方法36只雌性BALB/c小鼠随机分为r P29免疫组(r P29组)、佐剂组、 PBS组,每组12只。r P29组小鼠皮下注射r P29蛋白(10μg/只,与等体积弗氏佐剂乳化),第2和4周各加强免疫1次;佐剂组、 PBS组仅注射相应的佐剂或PBS。末次免疫后2周, 3组小鼠均腹腔接种细粒棘球蚴原头节(1 500个/只)进行攻击感染。感染后12周,剖杀小鼠,分离肝脏组织,提取肝脏组织mRNA,实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏组织中TGF-β1基因的相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测小鼠肝脏组织中TGF-β/Smad信号通路下游相关蛋白TGFβ-RI、 TGFβ-RⅡ、 p-Smad2,3、 Smad4、 Smad7的表达水平。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,佐剂组、 PBS组和r P29组小鼠肝脏组织中的TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.98±0.42、 1.71±0.29和1.24±0.56, r P29组低于PBS组(P 学意义。Western blotting检测结果显示, r P29组小鼠肝脏组织TGF-β1蛋白表达灰度值为372.04±0.01,低于PBS组(673.02±0.06),高于佐剂组(213.69±0.31)。小鼠肝脏组织TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的检测结果显示, r P29组TGF-β-RI、 TGF-β-RⅡ、 p-Smad 2,3、 Smad 4的灰度值分别为357.59±0.83、 289.07±0.21、 204.06±0.19、 396.11±0.01,低于PBS组(496.89±0.09、 378.41±0.01、428.11±0.29、 566.95±0.21),高于佐剂组(171.99±0.82、 185.77±0.09、 128.09±0.08、 205.87±0.59)。r P29免疫组Smad 7蛋白灰度值为278.89±0.12,高于PBS组(142.32±0.07),低于佐剂组(384.17±0.51)。结论r P29能够降低细粒棘球蚴感染小鼠肝脏组织中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平;下调TGF-β/Smad下游信号通路相关蛋白TGF-β-RⅠ、 TGF-β-RⅡ、 p-Smad 2,3和Smad 4的表达,上调Smad 7的表达。

关键词：细粒棘球蚴转化生长因子β1 TGF-β/Smad信号通路

氧化苦参碱经Bcl-6/CXCR5信号调控CIA小鼠Tfh-B细胞的实验研究

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中国免疫学杂志 2021年第19期37卷 2351-2356页

作者：崔振华王佩佩詹静慧摆茹张艳丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系银川750004

目的:初步探讨氧化苦参碱(OMT)通过Bcl-6/CXCR5信号通路调控胶原诱导关节炎(CIA)小鼠Tfh-B细胞的免疫学机制。方法:28只雄性DBA/1J小鼠随机分为正常对照组、CIA模型组、地塞米松(DXMS)组、OMT组,每组各7只。构建CIA模型并按分组方案给... 详细信息

目的:初步探讨氧化苦参碱(OMT)通过Bcl-6/CXCR5信号通路调控胶原诱导关节炎(CIA)小鼠Tfh-B细胞的免疫学机制。方法:28只雄性DBA/1J小鼠随机分为正常对照组、CIA模型组、地塞米松(DXMS)组、OMT组,每组各7只。构建CIA模型并按分组方案给予药物腹腔注射,正常对照组注射等量生理盐水,1次/d,直至第45天结束模型。测量关节肿胀度和关节炎评分,采用ELISA方法测定小鼠血清CII-Ab、IL-21、IL-10及TGF-β水平;HE染色观察小鼠关节病理变化,IHC方法检测其关节滑膜组织Bcl-6及CXCR5的表达;测定脾指数;流式细胞术检测脾Tfh、B细胞的比例;RT-qPCR测定脾单个核细胞Bcl-6、Blimp-1 mRNA的转录水平。结果:OMT可明显缓解减轻CIA小鼠关节炎症,改善关节滑膜增生及软骨破坏,减少炎症细胞浸润;上调关节滑膜组织Bcl-6、CXCR5的表达。下调CIA小鼠血清CII-Ab、IL-21的表达水平而上调IL-10、TGF-β水平;降低脾指数,减少脾Tfh及B细胞的比例,下调脾单个核细胞Bcl-6 mRNA的表达而上调Blimp-1 mRNA的表达。结论:OMT可能经Bcl-6/CXCR5信号通路调控Tfh-B细胞反应从而减缓类风湿性关节炎(RA)的发生与进展。

关键词：氧化苦参碱 Bcl-6 CXCR5 Blimp-1

槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达

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基础医学与临床 2011年第12期31卷 1320-1325页

作者：杨峰周娅曹相原王艳荣赵建宁王宁萍宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004

目的观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1 h,弃去LP... 详细信息

目的观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1 h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液。RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P<0.01),IκBαmRNA低于同时间点对照组(P<0.01或P<0.05);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P<0.01或P<0.05),而IκBαmRNA则显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一。

关键词：槐定碱 LPS RAW264.7细胞 NF-κB

中性粒细胞分泌MMP-2和MMP-9发挥促肿瘤作用

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免疫学杂志 2018年第3期34卷 214-219页

作者：史琳张宁赵磊万娟韩梅宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系银川750004

目的肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)分为抗肿瘤的N1型和促肿瘤的N2型,N2型TANs的作用机制尚不清楚。本研究探讨以胃癌细胞培养上清模拟胃癌微环境或用干扰素β抗体抑制细胞干扰素β,能否诱导正常人中性粒细胞... 详细信息

目的肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)分为抗肿瘤的N1型和促肿瘤的N2型,N2型TANs的作用机制尚不清楚。本研究探讨以胃癌细胞培养上清模拟胃癌微环境或用干扰素β抗体抑制细胞干扰素β,能否诱导正常人中性粒细胞分泌基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2),影响肿瘤的发生发展。方法收集51例正常人外周血,用中性粒细胞分离液分离中性粒细胞,分别用胃癌MGC-803细胞培养上清干预正常人中性粒细胞;用抗干扰素β(interferon beta,IFN-β)抗体干预正常人中性粒细胞。用Real-time PCR法检测2种干预前后中性粒细胞MMP-9和MMP-2 m RNA的变化,以ELISA法检测2种干预前后中性粒细胞分泌MMP-9和MMP-2的情况,明胶酶谱法检测2种干预前后中性粒细胞分泌的MMP-9和MMP-2的酶活性。结果中性粒细胞在MGC-803上清诱导下,MMP-9和MMP-2 m RNA水平、酶含量和酶活性均增加(P<0.01);中性粒细胞经抗IFN-β抗体干预后,MMP-9和MMP-2 m RNA水平、酶含量和酶活性亦显著高于对照组(P<0.01)。结论胃癌微环境或抑制干扰素β均可使中性粒细胞MMP-9和MMP-2分泌量和酶活性增加,促进肿瘤发展,发挥N2型TANs的作用。

关键词：肿瘤相关中性粒细胞基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶9 胃癌肿瘤微环境干扰素β

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抑制性受体FcγRIIB的研究进展

免疫学杂志 2013年第3期29卷 256-259页

作者：秦三利杨志伟宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系银川750004

FcγRIIB作为一种抑制性受体,可介导对多种免疫细胞的负反馈调节反应,其可通过依赖或不依赖胞浆区免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM的方式起到抑制细胞激活的作用。FcγRIIB在多种细胞上的异常表达可引发各种疾病,如自身免疫疾病、感染性疾... 详细信息

FcγRIIB作为一种抑制性受体,可介导对多种免疫细胞的负反馈调节反应,其可通过依赖或不依赖胞浆区免疫受体酪氨酸抑制基序ITIM的方式起到抑制细胞激活的作用。FcγRIIB在多种细胞上的异常表达可引发各种疾病,如自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤等。阐明FcγRIIB的生物学功能及与疾病间的联系,将有助于人们在治疗这些疾病方面找到新的靶点,进而提供一种有效的治疗方法。

关键词： FcγRIIB 生物学功能疾病

磷脂酰肌醇3激酶β(PI3Kβ)和PI3Kδ在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第1期37卷 39-46页

作者：张少婷朱光荣石君杨继辉蒋宗英张良颖窦凯凯孙建民宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏银川750004

目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特... 详细信息

目的探究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作用。方法在BaF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、 W557K558del,分别用PI3Kα、 PI3Kβ、 PI3Kδ亚型特异性抑制剂或者广谱PI3K抑制剂处理细胞,免疫沉淀法和Western blot法检测KIT及其下游信号活化情况。胃肠间质瘤GIST-T1细胞采用相同药物及浓度处理,免疫共沉淀和Western blot法检测KIT及其下游信号的活化情况,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比,在表达野生型KIT及其突变体的BaF3细胞中, PI3Kδ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号分子蛋白激酶B(AKT)和胞外信号调节激酶(ERK)活化的抑制作用最强,其次为PI3Kα和PI3Kβ亚型特异性抑制剂。在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号活化的抑制作用最强,其次为PI3Kδ和PI3Kα亚型特异性抑制剂。结论在BaF3细胞中, PI3Kδ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,而在GIST-T1细胞中, PI3Kβ亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用,这些结果表明不同PI3K亚型在KIT突变介导的细胞转化中起不同作用,且在不同的细胞中其作用也有不同。

关键词：胃肠间质瘤(GIST) 三型酪氨酸激酶受体 KIT 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)