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两种不同方法提取骨髓间充质干细胞来源外泌体的比较

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宁夏医科大学学报 2023年第5期45卷 475-481页

作者：徐彧徐海瑾李家瑞孔斌李卉陆宏宋辉宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系银川750004

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体的提取方法。方法提取大鼠原代BMMSCs,分别采用超速差速离心法和ExoQuick-TC^(TM)法提取外泌体,随后采用透射电子显微镜(TEM)观察形态特征,BCA测定蛋白浓度,Western blot检测典型标志蛋白质,... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体的提取方法。方法提取大鼠原代BMMSCs,分别采用超速差速离心法和ExoQuick-TC^(TM)法提取外泌体,随后采用透射电子显微镜(TEM)观察形态特征,BCA测定蛋白浓度,Western blot检测典型标志蛋白质,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)分析其粒径。结果通过TEM和NTA分析表明,两种提取方法均可得到具有双层膜、茶托样结构的囊泡,直径为30~150 nm。超速差速离心法提取的外泌体颗粒浓度[(399.00±55.56)×10^(8)particles·mL^(-1)vs.(7.94±0.50)×10^(8)particles·mL^(-1)]及电镜下数量[(13.53±2.55)个vs.(1.60±0.20)个]均较ExoQuick-TCTM法增加(P均<0.05),粒径峰值[(109.53±6.45)nm]较ExoQuick-TCTM法[(139.27±1.45)nm]降低(P<0.05)。BCA测定蛋白浓度显示,超速差速离心法提取的外泌体蛋白浓度[(12.43±0.98)mg·mL^(-1)]较ExoQuick-TCTM法[(4.30±0.48)mg·mL^(-1)]增高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,超速差速离心法提取的外泌体标志性蛋白CD63和CD81的表达呈阳性,而ExoQuick-TC^(TM)法提取的外泌体呈阴性。结论超速差速离心法是一种更为可靠有效的BMMSCs外泌体提取方法。

关键词：大鼠骨髓间充质干细胞外泌体超速差速离心法 ExoQuick-TC^(TM)法

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大鼠类胚体的制备及实时观察

宁夏医科大学学报 2022年第6期44卷 573-579页

作者：李家瑞徐彧徐海瑾李建宁李岩宋辉杨怡宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004 宁夏医科大学内分泌学研究所银川750004 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004

目的探讨悬滴法与悬浮法制备的大鼠类胚体(embryoid bodies,EBs)的差异以及培养时间对EBs所包含三胚层组织特异性基因表达的影响。方法使用悬滴法与悬浮法将大鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)制备为EBs并连续培养10 d,在第5天... 详细信息

目的探讨悬滴法与悬浮法制备的大鼠类胚体(embryoid bodies,EBs)的差异以及培养时间对EBs所包含三胚层组织特异性基因表达的影响。方法使用悬滴法与悬浮法将大鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)制备为EBs并连续培养10 d,在第5天和第10天分别对两种方法制备的EBs进行形态学观察,并进行数量统计与直径检测,随后提取EBs蛋白与mRNA,通过Western blot与RT-qPCR实验检测EBs三胚层特异性蛋白和基因的表达水平。结果与悬浮法相比,悬滴法制备的EBs生成率低(P0.05);中胚层基因Brachyury表达降低(P0.05);外胚层基因VIM表达降低(P0.05)。在同时期不同方法制备的EBs中,xf10的EBs三胚层特异性基因表达高于xd10的EBs(P<0.05)。结论悬滴法制备的EBs生成率低于悬浮法,但大小均一,分化同步,培养时间对EBs特异性基因的表达具有重要的影响。

关键词：大鼠胚胎干细胞类胚体悬浮法悬滴法

hsa-miR-130家族生物信息分析及在SLE中差异表达分析

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中国免疫学杂志 2021年第19期37卷 2305-2311页

作者：栾鹏飞周少岚党洁贾维马占兵霍正浩宁夏医科大学基础医学院医学遗传学系与细胞生物学系宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004

目的:通过生物信息学方法预测hsa-miR-130家族靶基因及其功能机制。方法:检索PubMed有关hsa-miR130家族的研究报道并进行相关分析;检索miRbase获取hsa-miR-130家族序列;通过miRanda、TargetScan、PicTar数据库交叉预测靶基因,对其进行... 详细信息

目的:通过生物信息学方法预测hsa-miR-130家族靶基因及其功能机制。方法:检索PubMed有关hsa-miR130家族的研究报道并进行相关分析;检索miRbase获取hsa-miR-130家族序列;通过miRanda、TargetScan、PicTar数据库交叉预测靶基因,对其进行功能富集分析和信号转导通路富集分析。RT-qPCR验证hsa-miR-130a-3p在系统性红斑狼疮(SLE)患者PBMC中的表达情况。结果:hsa-miR-130家族成熟序列在各物种间高度保守;多数据库联合预测获得的285个靶基因存在于细胞的多个组分,主要包括调控细胞周期、信号转导、DNA合成调控等分子功能;并富集于雌激素膜受体信号转导等其他信号通路;hsa-miR-130a-3p在SLE患者中表达下调。结论:hsa-miR-130家族靶基因功能富集于多个生物学过程,并通过调控免疫相关靶基因参与SLE疾病过程,可作为潜在疾病研究标志物。

关键词： hsa-miR-130家族生物信息系统性红斑狼疮表达分析

系统性红斑狼疮患者PBMCs差异表达基因m6A修饰的生物信息学分析

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生物信息学 2023年

作者：王晶董辉党洁霍正浩马占兵宁夏医科大学总医院病理科宁夏医科大学总医院医学科学研究院宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系

采用生物信息学方法，通过公共数据库，分析系统性红斑狼疮（SLE）N6-甲基腺苷（m6A）修饰谱系。基于公共数据建立SLE m6A传修饰表达谱，分析m6A相关的DEGs在SLE中的潜在作用；利用ADEx数据库获取DEGs，利用m6a GEO数据集（GSE173312）... 详细信息

采用生物信息学方法，通过公共数据库，分析系统性红斑狼疮（SLE）N6-甲基腺苷（m6A）修饰谱系。基于公共数据建立SLE m6A传修饰表达谱，分析m6A相关的DEGs在SLE中的潜在作用；利用ADEx数据库获取DEGs，利用m6a GEO数据集（GSE173312），分析获取SLE m6A修饰谱；用DAVID对m6a DEGs进行GO/Pathway注释分析。在SLE患者中，m6a组分写入器RBM15B和擦除酶FTO的表达下调，阅读器IGFBP3的表达上调。SLE m6a修饰谱包括181个基因，其中123个基因的表达上调，58个基因的表达下调。这些基因主要参与了细胞凋亡和细胞周期通路、I型干扰素信号通路、DNA复制和B细胞MHC II分子调节等生物学过程。SLE患者的PBMCs细胞m6a修饰存在异常，并可能参与疾病的发生和发展。

关键词：系统性红斑狼疮 N6-腺苷酸甲基化差异表达基因生物标志物

DIAPP五步教学法在医学遗传学课堂的应用与实践

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基础医学教育 2022年第9期24卷 641-644页

作者：党洁王娅娜马占兵彭亮宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750001 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室

医学遗传学作为联系基础医学与临床医学的桥梁学科,具有较强的临床实践性及科学前沿性。为提高课堂教学质量,提升学生课堂参与度,宁夏医科大学医学遗传学课程组创新性采用DIAPP五步教学法,即采用设境(D)、探究(I)、分析(A)、解决(P)、亲... 详细信息

医学遗传学作为联系基础医学与临床医学的桥梁学科,具有较强的临床实践性及科学前沿性。为提高课堂教学质量,提升学生课堂参与度,宁夏医科大学医学遗传学课程组创新性采用DIAPP五步教学法,即采用设境(D)、探究(I)、分析(A)、解决(P)、亲验(P)五环节组织课堂教学,达成教学目标。文章就医学遗传学课堂DIAPP五步教学法的应用与实践进行阐述,以期为地方医学院校基础医学课程的学生培养提供借鉴和示范作用。

关键词：医学遗传学 DIAPP教学法课堂教学

H_(2)O_(2)诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁死亡模型的构建

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宁夏医科大学学报 2023年第5期45卷 469-474页

作者：王佳马丽媛母春兰刘春莲焦海燕宁夏医科大学教育部生育力保持重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004 宁夏医科大学总医院生殖中心银川750004

目的构建并鉴定H_(2)O_(2)诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁死亡模型。方法常规培养TM3细胞,采用MTS法选择H_(2)O_(2)的处理浓度,设置TM3细胞常规培养组(T组)、2 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理TM3细胞1 h组(H_(2)O_(2)-T组)、1μmol·L^(-1)GSH过氧化物酶4抑制剂(RSL3)处理TM3细胞1 h组(RSL3-T组)和3μmol·L^(-1)i FSP1处理TM3细胞24 h组(i FSP1-T组);采用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;检测试剂盒检测细胞的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物(LPO)含量,Phen-Green-SK荧光探针经激光共聚焦显微镜检测Fe2+含量;采用透射电镜观察线粒体形态结构。结果根据MTS法选择2 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理TM3细胞;与T组相比,H_(2)O_(2)-T组ROS水平、MDA和LPO含量均上升(P均细胞内Fe2+含量上升(P细胞内LPO、Fe2+含量差异均无统计学意义(P均>0.05);透射电镜结果显示,H_(2)O_(2)-T组细胞线粒体变小皱缩,嵴减少,外膜破裂,与RSL3-T组和i FSP1-T组相似。结论 H_(2)O_(2)可诱导小鼠睾丸间质细胞TM3细胞发生铁死亡。

关键词：铁死亡活性氧脂质过氧化物线粒体 Fe^(2+)含量

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淫羊藿苷对白消安致小鼠睾丸功能损伤的作用

宁夏医科大学学报 2024年第3期46卷 217-222,235页

作者：马丽媛王佳郭小宇刘春莲焦海燕宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004 宁夏医科大学总医院生殖中心宁夏医科大学第一临床医学院银川750004

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对白消安致睾丸功能损伤的治疗作用。方法造模阶段:将小鼠分为对照组(20%DMSO)和模型组(4 mg·kg^(-1)白消安),每组8只。使用ICA对模型小鼠进行治疗:将小鼠分为对照组(20%DMSO)、模型组(4 mg·kg^(-1)白消... 详细信息

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对白消安致睾丸功能损伤的治疗作用。方法造模阶段:将小鼠分为对照组(20%DMSO)和模型组(4 mg·kg^(-1)白消安),每组8只。使用ICA对模型小鼠进行治疗:将小鼠分为对照组(20%DMSO)、模型组(4 mg·kg^(-1)白消安)、ICA治疗组(4 mg·kg^(-1)白消安+120 mg·kg^(-1)ICA)、枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)治疗组(4 mg·kg^(-1)白消安+40 mg·kg^(-1)LBP,ICA阳性对照组)共4组,每组11只。所有实验小鼠均使用6周龄ICR雄性小鼠。测定小鼠睾丸及附睾质量;用牛鲍式计数板进行精子计数,使用全自动精子分析仪检测精子存活率,应用Diff-Quik快速染色试剂盒检测精子畸形率;HE染色观察睾丸组织并进行Johnsen评分。采用检测试剂盒检测睾丸组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和脂质过氧化物(lipid peroxides,LPO)含量。结果与对照组相比,白消安诱导的模型组小鼠睾丸、附睾质量降低(P均<0.05),睾丸指数降低(P<0.01),小鼠精子数量和精子存活率降低(P均<0.001),精子总畸形率升高(P<0.001),Johnsen评分降低(P<0.001);睾丸组织中MDA含量增加(P<0.01),GSH含量降低(P<0.01),LPO含量升高(P<0.001)。与模型组相比,ICA治疗组睾丸和附睾质量、睾丸指数、精子存活率和Johnsen评分均升高(P均<0.001),精子数量增加(P<0.01),精子总畸形率降低(P<0.001);睾丸组织中MDA含量降低(P<0.01),GSH含量增加(P<0.001),LPO含量降低(P<0.001)。结论ICA可减轻白消安诱导的小鼠睾丸功能损伤。

关键词：淫羊藿苷氧化应激白消安睾丸功能损伤

棕榈酸联合TGF-β1诱导脂肪性肝纤维化细胞模型

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宁夏医科大学学报 2021年第6期43卷 549-555页

作者：梁涵子李雨涵李家瑞李建宁宋辉杨怡宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系银川750004 宁夏医科大学内分泌学研究所银川750004 宁夏医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系银川750004

目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L^(-1) PA处理及... 详细信息

目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L^(-1) PA处理及2、5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1处理,两组均处理24 h后利用MTT细胞毒性实验检测细胞存活率,通过油红O染色检测细胞脂肪变性,采用qRT-PCR与Western blot实验检测细胞α-平滑肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA及蛋白表达水平,了解细胞纤维化情况。结果MTT结果显示,不同实验组与对照组比较,PA分别诱导HepG2细胞与LX-2细胞24 h后,两组细胞存活率在100、200、400μmol·L^(-1) PA的诱导下出现不同程度降低(P均细胞24 h后,细胞存活率在5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导下出现不同程度降低(P均细胞均随PA浓度的增大,脂滴形成增多,具有明显的浓度依赖性;不同浓度TGF-β1诱导24 h后,HepG2细胞内未见明显脂滴,2、5 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后LX-2细胞内可见少量脂滴,10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后可见LX-2细胞内脂滴明显增多。qRT-PCR结果显示,200、400μmol·L^(-1) PA诱导HepG2细胞内、400μmol·L^(-1) PA诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均细胞内CollagenⅠmRNA相对表达水平上调,5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均细胞内α-SMA及CollagenⅠ的蛋白相对表达水平均升高(P均细胞24 h、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞与HepG2细胞24 h是成功构建脂肪性肝纤维化细胞模型的适宜条件。

关键词：脂肪性肝纤维化模型 LX-2细胞 HepG2细胞 TGF-β1 棕榈酸

失活X染色体基因逃逸与系统性红斑狼疮的性别二态性

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遗传 2024年第1期46卷 18-33页

作者：马茜周少岚党洁霍正浩马占兵宁夏大学生命科学学院银川750021 宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系银川750004 宁夏医科大学总医院风湿免疫科银川750003 宁夏医科大学教育部生育力保持重点实验室银川750004

X染色体失活可平衡女性中两条X染色体的基因剂量。越来越多的证据表明,失活X染色体上存在许多能够逃逸失活的基因。逃逸的机制涉及到DNA、RNA、组蛋白的表观修饰以及众多的调控蛋白和染色质的空间结构。失活X染色体基因逃逸的研究为人... 详细信息

X染色体失活可平衡女性中两条X染色体的基因剂量。越来越多的证据表明,失活X染色体上存在许多能够逃逸失活的基因。逃逸的机制涉及到DNA、RNA、组蛋白的表观修饰以及众多的调控蛋白和染色质的空间结构。失活X染色体基因逃逸的研究为人类疾病(特别是自身免疫性疾病)性别二态性的研究开辟了新的途径。目前已证实包括TLR7、CD40L、IRAK-1、CXCR3、CXorf21等失活X染色体基因逃逸是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)女性好发的重要原因。本文主要综述了失活X染色体上基因逃逸以及与SLE性别二态性形成的分子机制。阐明SLE性别二态性形成的分子机制,不仅对疾病的诊断、治疗具有重要意义,而且对深入揭示人类免疫系统的发育及调控机理也有重要的理论意义。

关键词：失活X染色体基因逃逸性别二态性系统性红斑狼疮