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乙型肝炎病毒通过自分泌运动因子/溶血磷脂酸信号损伤对糖稳态的作用及其机制研究

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中国现代医学杂志 2024年第16期34卷 17-25页

作者：朱政全梁斌石明连谷云艳周先丽梁成钦刘永明苏何玲桂林医学院生物化学与分子生物学重点实验室广西桂林541199 桂林医学院病理学教研室广西桂林541199 桂林医学院药物化学教研室广西桂林541199

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)通过自分泌运动因子(ATX)/溶血磷脂酸(LPA)信号对糖稳态的损伤作用及相关机制。方法利用基因芯片数据库分析HBV对ATX表达的影响。Western blotting检测HBV细胞株HepG2215、稳定表达HBV反式调节蛋白HBx和PreS2... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)通过自分泌运动因子(ATX)/溶血磷脂酸(LPA)信号对糖稳态的损伤作用及相关机制。方法利用基因芯片数据库分析HBV对ATX表达的影响。Western blotting检测HBV细胞株HepG2215、稳定表达HBV反式调节蛋白HBx和PreS2的HBx-HepG2和PreS2-HepG2细胞、对照组HepG2细胞的ATX蛋白表达水平。双萤光素酶报告基因检测HBx和PreS2对ATX启动子作用。构建稳定表达HBx和Pre-S2的小鼠分泌胰岛素细胞HBx-NIT、PreS2-NIT,检测两者对胰岛素分泌的影响。利用rAAV8-1.3HBV经尾静脉注射C57BL/6小鼠复制HBV小鼠模型,NC为注射同体积生理盐水的C57BL/6小鼠。小鼠按2 g/kg腹腔注射葡萄糖进行糖耐量试验(GTT)。采用液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附试验和血糖分析仪分别检测小鼠血清LPA、血清胰岛素和血糖浓度。结果HepG2215细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2(P<0.05)。PreS2与ATX启动子共转染组萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P<0.05),HBX与ATX启动子共转染组的萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P<0.05)。HBx-HepG2细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2细胞(P<0.05),PreS2-HepG2细胞高于HepG2细胞(P<0.05)。添加不同浓度LPA后NIT细胞胰岛素分泌表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。1~3μmol/L LPA相对表达量与胰岛素分泌呈负相关(r=-0.990,P<0.05)。HBx-NIT细胞添加Ki16425前的胰岛素水平低于NIT细胞(P<0.05),PreS2-NIT细胞低于NIT细胞(P<0.05)。NIT、HBx-NIT和PreS2-NIT细胞添加Ki16425后的胰岛素水平较添加前高(P<0.05)。实验组血清LPA相对表达量、平均空腹血糖浓度、注射葡萄糖后的60、120 min平均血糖浓度和血糖浓度曲线下面积(AUC)平均值较对照组高(P<0.05)。实验组注射葡萄糖后15 min血清胰岛素浓度、血清胰岛素水平的AUC值较对照组低(P<0.05)。用HBV小鼠GTT血糖AUC绘制的ROC曲线显示,曲线面积为0.770(95%CI:0.556,0.984),特异性为60.00%(95%CI:0.122,0.738),敏感性为90.00%(95%CI:0.555,0.998)。用HBV小鼠空腹血糖浓度绘制的ROC曲线显示,曲线面积为0.865(95%CI:0.703,1.027),特异性为80.00%(95%CI:0.444,0.975),敏感性为60.00%(95%CI:0.262,0.878)。实验组胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感指数均小于对照组,胰岛素抵抗指数大于对照组(P<0.05)。结论HBV反式调节蛋白HBx和Pre-S2上调ATX的表达,增强ATX/LPA信号,导致胰岛素分泌抑制,糖耐量异常,糖稳态受损。

关键词：乙型肝炎病毒反式调节蛋白自分泌运动因子/溶血磷脂酸信号糖稳态

靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞毒性作用的体内外验证

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 289-295页

作者：张仪婷席文锦王鹏举赵晓娟郑瑞梁思辛蒙若彤阎博杨安钢空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 延安大学生命科学学院陕西延安716000

目的对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估,为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞,采用软琼脂集落形成实验,观察HER2-CAR-T细胞集落... 详细信息

目的对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估,为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞,采用软琼脂集落形成实验,观察HER2-CAR-T细胞集落形成情况并对集落形成率进行统计分析;将HER2-CAR-T细胞悬液与兔红细胞悬液共孵,通过直接观察法以及酶标仪检测法评估红细胞溶解情况;对雄性新西兰兔耳缘静脉注射HER2-CAR-T细胞制剂,通过组织切片染色观察HER2-CAR-T细胞对动物血管的刺激作用;以pMD 2.G载体上的水泡性口炎病毒囊膜糖蛋白(VSV-G)基因为目标序列,利用荧光定量PCR进行慢病毒载体安全性的验证;取接受HER2-CAR-T细胞输注的小鼠心、肝、肺、肾,HE染色观察其病变情况。结果成功制备了HER2-CAR-T细胞,这些细胞在体外不具备软琼脂集落形成能力,HER2-CAR-T细胞制剂对新西兰兔红细胞不产生溶血现象。新西兰兔耳缘静脉输注HER2-CAR-T细胞后未发现明显血管刺激反应,也未检测到VSV-G的特异性扩增,治疗组小鼠心、肝、肺、肾组织未见明显病变。结论所制备的HER2-CAR-T细胞具有可靠安全性。

关键词：安全性毒理学靶向人表皮生长因子2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞集落形成实验溶血血管刺激性器官毒性

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科研反哺教学在医学生物化学中的应用

基础医学教育 2024年第7期26卷 553-557页

作者：徐彩娜吴山力刘畅张纪周阚慕洁吉林大学基础医学院生物化学教研室长春130021

生物化学作为医学专业基础课程,内容抽象复杂。本科生基础相对薄弱,在有限的学习时间内难以理解消化,从而影响了学习效果和科研创新能力的培养。文章分析了高校医学专业生物化学教学存在的问题,提出了科研反哺教学的必要性,通过将科研... 详细信息

生物化学作为医学专业基础课程,内容抽象复杂。本科生基础相对薄弱,在有限的学习时间内难以理解消化,从而影响了学习效果和科研创新能力的培养。文章分析了高校医学专业生物化学教学存在的问题,提出了科研反哺教学的必要性,通过将科研融入课堂、鼓励学生参加科研实践、构建科研训练平台、提高教学团队科研水平、优化考核评价机制等多种途径对医学专业生物化学的教学模式进行了改革与探索,旨在通过科研反哺教学提升本科生的科研思维和创新能力。

关键词：生物化学基础医学教学改革科研反哺教学科研训练

基于TCGA数据挖掘及网络药理学探讨卤泛群治疗胶质母细胞瘤的潜在机制

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中国药理学通报 2024年第4期40卷 756-764页

作者：曹振程路畅秦祎雄郭勇韩标桂林医学院智能医学与生物技术学院广西桂林541199 桂林医学院生物化学与分子生物学重点实验室广西桂林541199

目的运用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)基因组学数据挖掘潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群(halofantrine),通过网络药理学方法探讨卤泛群防治胶质母细胞瘤的作用机制,并结合细胞实验对卤泛群防治胶质母细胞瘤的机制进行... 详细信息

目的运用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)基因组学数据挖掘潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群(halofantrine),通过网络药理学方法探讨卤泛群防治胶质母细胞瘤的作用机制,并结合细胞实验对卤泛群防治胶质母细胞瘤的机制进行验证。方法通过癌症临床公开数据库TCGA挖掘胶质母细胞瘤发生发展的关键基因,利用CMAP数据库寻找潜在治疗胶质母细胞瘤的药物,借助STITCH、Drug bank、Binding DB、BATMAN-TCM、TargetNet、SwissTarget、PubChem检索药物靶点信息,利用Drug bank、DisGeNET、GeneCards,TDD筛选胶质母细胞瘤靶点。通过Cytoscape构建“药物-活性成分-靶点”可视化网络图,通过进行GO、KEGG和分子对接分析,预测其作用机制。利用CCK-8及qPCR等方法验证卤泛群对胶质母细胞瘤细胞及治疗靶点的作用。结果筛选出潜在治疗胶质母细胞瘤的药物卤泛群,卤泛群有150个作用靶点,胶质母细胞瘤治疗靶点有173个,和药物交集靶点有12个,获得3个核心靶点:EGFR、MAPK14、IGF1R。分子对接结果显示,卤泛群与核心靶点结合的潜能和活性良好。CCK-8和qPCR实验结果表明卤泛群可通过EGFR、MAPK14、IGF1R靶点抑制胶质母细胞瘤细胞增殖。结论卤泛群通过EGFR、MAPK14、IGF1R靶点发挥治疗胶质母细胞瘤的作用。

关键词： TCGA数据库网络药理学胶质母细胞瘤卤泛群分子对接作用机制

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肌肽通过抑制ROS/NLRP3/GSDMD介导的焦亡减轻OGD/R对BV2细胞损伤

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中国药理学通报 2024年 2150-2158页

作者：冉睿黎王宇彤宋俊秋边疆王德威姜晓涵尤富麟杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室大连工业大学生物工程学院

目的探究肌肽对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导BV2细胞损伤的保护作用及对ROS/NLRP3/GSDMD通路介导焦亡的影响。方法 BV2细胞随机分为对照组(Con)、模型组(OGD/R)、肌肽组(OGD/R+CAR)、抑制剂组(OGGD/R+MCC950)、肌肽+抑制剂组(OGD/R+CA... 详细信息

目的探究肌肽对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导BV2细胞损伤的保护作用及对ROS/NLRP3/GSDMD通路介导焦亡的影响。方法 BV2细胞随机分为对照组(Con)、模型组(OGD/R)、肌肽组(OGD/R+CAR)、抑制剂组(OGGD/R+MCC950)、肌肽+抑制剂组(OGD/R+CAR+MCC950)。采用MTT法检测细胞存活率;微量酶标法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率;Hoechst 33342/SYTOX Green染色法检测细胞损伤情况;DCFH-DA检测细胞中ROS水平;免疫荧光观察细胞内INF-κB p65入核水平;Western blot检测细胞NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、GGSDMD-N的蛋白表达水平;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、IL-18水平。结果与Con组相比,OGD/R组细胞存活率明显降低,LDH释放明显升高,细胞形态受损,SYTOX Green阳性率与细胞中ROS水平明显升高,细胞核中NF-KB p65荧光强度增强,细胞内NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、GSDMD-N蛋白表达水平及IL-1β、IL-18水平明显升高。与OGD/R组相比,其他组的细胞存活率明显升高,LDH释放率明显降低,细胞损伤得到一定程度的改善,SYTOX Green阳性率和细胞中ROS生成水平明显降低,细胞核中NF-KB p65荧光强度明显降低,相关蛋白表达水平及细胞上清液中IL-1β、IL-18水平明显降低。结论肌肽通过抑制氧化应激及NF-κB激活,进而抑制NLRP3/GSDMD信号途径的焦亡对OGGD/R致BV2细胞损伤发挥保护作用。

关键词：肌肽氧糖剥夺/复糖复氧小胶质细胞 NF-κB 焦亡 NLRP3炎症小体

小分子化合物与铝佐剂联用对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833保护效果的影响及机制初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 189-197页

作者：孙恬峻张晓丽夏真萍赵卓章金勇王乂中国海洋大学医药学院海洋药物教育部重点实验室青岛266003 陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038 陆军军医大学药学与检验医学系临床血液学教研室重庆400038

目的评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate,DTC)、左旋咪唑(levamisole,LMS)、咪喹莫特(imiquimod,Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响,并进一步对其机制进行初步研究... 详细信息

目的评价二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethyldithiocarbamate,DTC)、左旋咪唑(levamisole,LMS)、咪喹莫特(imiquimod,Imi)3个小分子化合物对铜绿假单胞菌疫苗候选抗原PA0833免疫原性和保护效果的影响,并进一步对其机制进行初步研究。方法抗原PA0833分别与上述3种小分子以及铝佐剂配伍制备疫苗,通过肌肉注射的方式于0、14、21 d分别免疫BALB/c小鼠。收集3次免疫后血清,ELISA测定PA0833特异性IgG抗体水平。采用铜绿假单胞菌PAO1感染免疫后的小鼠,通过生存率、体重变化、临床评分、炎症因子检测和肺组织病理学改变等评价疫苗的保护效果。在此基础上,对小鼠连续7 d肌肉注射DTC,取肺脏组织进行转录组测序分析,并通过流式细胞术检测其对抗原提呈细胞活化的影响。结果联用小分子免疫组能够有效提高PA0833特异性IgG抗体效价,降低细菌感染后肺组织中细菌负荷和TNF-α、IL-6、IL-1β炎症因子水平,显著提高细菌感染后的生存率,其中DTC效果最好。转录组测序结果表明,相比于PBS对照组,DTC处理组样本有121个基因表达上调、18个基因下调;差异表达基因主要富集在免疫信号通路,IL-17信号通路活化明显。流式细胞术结果表明DTC能促进脾细胞中Th17细胞分化,且能促进抗原提呈细胞活化。结论本研究中的3种小分子都能够有效地增强抗原的免疫原性,其中DTC效果最优,可用于新型疫苗佐剂的研发。

关键词：佐剂二乙基二硫代氨基甲酸钠(DTC) 铜绿假单胞菌疫苗

星形胶质细胞敲除铜蓝蛋白对小鼠脑铁代谢的影响

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解剖学报 2024年第4期55卷 475-481页

作者：李海艳李忠达何立娟承德医学院人体解剖学教研室河北承德067000 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024

目的探讨铜蓝蛋白(CP)在脑铁代谢中的作用机制。方法将CP^(flox/flox)小鼠与^(GFAP)-cre小鼠杂交,得到胶质纤维酸性蛋白(^(GFAP))-cre介导的CP基因敲除小鼠,即CP^(GFAP)cKO小鼠。6月龄88只雄性小鼠被分为WT、^(GFAP)-cre、CP^(flox/flox)和CP^(GFAP)cKO 4组。通过基因型鉴定、免疫荧光染色和Western blotting方法检测星形胶质细胞是否特异性敲除CP;Morris水迷宫实验检测星形胶质细胞敲除CP的小鼠学习和记忆功能;通过电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和同步辐射微束X线荧光光谱法(μ-XRF)检测皮层、海马区铁水平;血清和组织铁试剂盒测定血清和肝铁含量。结果基因型鉴定、免疫荧光染色和Western blotting结果确认星形胶质细胞特异性敲除CP基因小鼠建立模型成功;Moris水迷宫实验结果观察到星形胶质细胞特异性敲除CP基因,小鼠的学习记忆能力明显降低;ICP-MS、μ-XRF结果显示,皮层区和海马区铁含量显著下降;而血清铁和肝铁含量没有明显变化。结论星形胶质细胞特异性敲除CP基因的小鼠的学习记忆能力下降与脑铁降低密切相关;CP的主要功能可能是协助脑细胞摄取铁。

关键词：铜蓝蛋白星形胶质细胞铁认知免疫印迹法小鼠

氮掺杂的绿色碳点开关型荧光传感器灵敏检测组氨酸

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化学试剂 2024年第6期46卷 46-52页

作者：蔡留莹康鹏董微沈阳医学院公共卫生学院辽宁沈阳110034 沈阳医学院化学教研室辽宁沈阳110034

以柠檬酸为碳源,尿素提供氮源,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂,采用水热法一步合成水溶性好的氮掺杂绿色荧光碳点(N-CDs)。为增强N-CDs的荧光强度,选用1,6-己二胺作为表面修饰剂,制备的N-CDs荧光量子产率达16.8%。该N-CDs形貌近似球形,平... 详细信息

以柠檬酸为碳源,尿素提供氮源,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂,采用水热法一步合成水溶性好的氮掺杂绿色荧光碳点(N-CDs)。为增强N-CDs的荧光强度,选用1,6-己二胺作为表面修饰剂,制备的N-CDs荧光量子产率达16.8%。该N-CDs形貌近似球形,平均粒径约为30 nm。同时本实验基于荧光猝灭法构建N-CDs/Bio“开-关”型荧光传感器,利用传感器荧光强度的变化灵敏检测组氨酸(His)。传感器荧光强度变化(ΔF)与His浓度在1.73~25.85 mmol/L范围内呈现良好线性关系,线性方程为ΔF=6.133×[His]+4.531,相关系数R 2=0.9984,检测限为0.3669 mmol/L。进一步检测实际人血清样本中的His,回收率为96.3%~100.1%。传感器检测方法简便、灵敏度高,是优异的His荧光检测传感器。

关键词：绿色荧光碳点组氨酸水热法开关荧光传感器

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 2-10页

作者：王晓琼明光阳陈致富苟强袁月赵莉群章金勇胡仁建重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗,在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白,经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制... 详细信息

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗,在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白,经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗,经皮下注射免疫新西兰兔,心脏采血分离血清,用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体,同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次,间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d,通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型,感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗,通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异,以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05),免疫组生存率显著高于对照组[70%(7/10)vs 10%(1/10),P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及细菌定植量显著低于对照组(t=3.127,P<0.05);疫苗主动免疫与被动免疫均具有良好的保护效果,且对抗生素治疗有明显的增效性;KPC-2多克隆抗体在体外表现出明显的吞噬杀菌活性(t=5.427,P<0.05)。结论KPC-2疫苗具有良好的免疫原性和保护效果,体液免疫应答在其保护中发挥了重要作用,证明采用耐药靶标作为抗原制备疫苗具有可行性。

关键词：肺炎克雷伯菌 KPC-2 细菌耐药疫苗