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氧化苦参碱对牙周膜干细胞干性标志物表达和成骨分化的作用

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 3992-3999页

作者：罗晶雍敏陈琦杨长怡赵恬马静梅冬兰虎金鹏杨昭君王钰然刘博宁夏医科大学口腔医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏回族自治区干细胞与再生医学重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院口腔正畸科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院牙周病科宁夏回族自治区银川市750004

背景:人牙周膜干细胞是牙周再生组织工程潜在的功能细胞,然而长期体外培养会导致牙周膜干细胞干性减低并发生复制性衰老,从而影响其治疗效果。目的:探讨氧化苦参碱在体外对牙周膜干细胞干性维持和骨向分化的影响,并寻找潜在的影响机制... 详细信息

背景:人牙周膜干细胞是牙周再生组织工程潜在的功能细胞,然而长期体外培养会导致牙周膜干细胞干性减低并发生复制性衰老,从而影响其治疗效果。目的:探讨氧化苦参碱在体外对牙周膜干细胞干性维持和骨向分化的影响,并寻找潜在的影响机制。方法:采用组织块酶消化法从人牙周膜组织中分离、培养得到牙周膜干细胞,并使用流式细胞仪进行间充质细胞表面标志物鉴定。用0,2.5,5,10μg/mL氧化苦参碱孵育牙周膜干细胞,通过CCK8实验检测氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性的影响,筛选后续实验合适的药物质量浓度,采用Western blot检测牙周膜干细胞中干细胞非特异性蛋白SOX2和OCT4的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测牙周膜干细胞中成骨相关基因和蛋白表达水平。结果与结论:①CCK8实验结果显示2.5μg/mL氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性有显著增强作用,后续实验选用2.5μg/mL氧化苦参碱进行干预;②与空白对照组相比,氧化苦参碱组牙周膜干细胞的干性标志物SOX2蛋白表达水平变化不明显(P>0.05),OCT4蛋白表达明显上调(P<0.05);③与成骨诱导组相比,氧化苦参碱+成骨诱导组牙周膜干细胞成骨相关基因ALP、RUNX2 mRNA表达及成骨相关蛋白ALP蛋白表达明显下调(P<0.05);④氧化苦参碱上调牙周膜干细胞干性标志物表达,抑制牙周膜干细胞骨向分化,高通量测序结果表明可能与WNT2、WNT16、COMP、BMP6有关。

关键词：牙周膜干细胞苦参碱类生物碱成骨细胞增殖氧化苦参碱干性维持高通量测序

跨皮神经电刺激对关节炎大鼠脊髓三种神经肽释放量的影响

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广东医学 2007年第12期28卷 1923-1925页

作者：郝银菊蒋袁絮宁夏医学院基础学院药理学教研室银川750004

目的通过比较2Hz及100Hz跨皮神经电刺激(transcutenous electrical nerve stimulation,TENS)治疗大鼠慢性单发佐剂性关节炎症痛时3种神经肽脊髓释放量的变化,探讨其在TENS治疗中的作用。方法采用油包水型完全氟氏佐剂(CFA)右侧踝关节腔... 详细信息

目的通过比较2Hz及100Hz跨皮神经电刺激(transcutenous electrical nerve stimulation,TENS)治疗大鼠慢性单发佐剂性关节炎症痛时3种神经肽脊髓释放量的变化,探讨其在TENS治疗中的作用。方法采用油包水型完全氟氏佐剂(CFA)右侧踝关节腔内注射致炎,TENS治疗,放射免疫分析法测定致炎前及致炎后1～9周大鼠脊髓灌流液中与疼痛有关的神经肽:八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptid,CCK-8)、孤啡肽(orpha-ningFQ,OFQ)及内吗啡肽-2(endomorphin-2,EM2)释放量的动态变化。结果①100HzTENS不改变关节炎时脊髓CCK-8释放量的减少;②2Hz和100HzTENS能增加佐剂性关节炎第3,7周时脊髓OFQ释放量;③100HzTENS可将炎症早期降低的脊髓EM2释放量升高到正常范围内。结论2Hz及100HzTENS对慢性炎症痛大鼠脊髓灌流液中CCK-8、OFQ和EM2释放量的影响可能是两者疗效存在差异的机制之一。

关键词：关节炎慢性痛跨皮神经电刺激放射免疫分析法神经肽

雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞增殖的影响及可能的作用机制

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肿瘤 2018年第7期38卷 652-661页

作者：刘俊江袁丹周正平刘蒙蒙遵义医学院病理学教研室贵州遵义563000 遵义医学院电镜室贵州遵义563000

目的 :探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂[他莫昔芬(tamoxifen,TAM)和氟维司群(fulvestrant或ICI-182780)]对高分化人子宫内膜样癌Ishikawa细胞增殖的影响,以及可能的作用机制。方法 :体外培养Ishikawa细胞,实验分为6组:TAM、ICI-182780、β-雌二醇(β-estradiol)单药组以及TAM、ICI-182780联合β-雌二醇组,以未用任何药物处理的Ishikawa细胞作为对照组。采用MTT法检测细胞的增殖情况,分别在光学显微镜和电子显微镜下观察细胞形态的变化,实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测细胞中p57^(kip2)以及cyclin E m RNA和蛋白的表达情况。结果 :与对照组相比,TAM组细胞的增殖能力稍有增强(P>0.05),其余各组细胞的增殖能力均有减弱(P值均<0.05);与β-雌二醇组相比,TAM组、β-雌二醇+TAM组细胞的增殖能力增强,而ICI-182780组、β-雌二醇+ICI-182780组细胞的增殖能力减弱(P值均<0.05)。与对照组相比,β-雌二醇+ICI-182780组细胞密度明显减少,其余各组细胞则无明显变化;各实验组细胞表面微绒毛均有减少,TAM组和β-雌二醇组中仅有个别细胞出现内质网轻度肿胀,ICI-182780组出现部分细胞内质网中度肿胀,β-雌二醇+TAM组和β-雌二醇+ICI-182780组中多数细胞内质网和线粒体明显肿胀,自噬现象增多。与对照组相比,TAM组中p57^(kip2) m RNA和蛋白的表达水平均有所下调,cyclin E m RNA和蛋白的表达水平则被上调,在其余各组中p57^(kip2)m RNA和蛋白的表达水平均被有所上调,cyclin E m RNA和蛋白的表达水平均被下调;与β-雌二醇组相比,在ICI-182780组和β-雌二醇+ICI-182780组中p57^(kip2) m RNA和蛋白的表达水平均有上调,cyclin E m RNA和蛋白的表达水平均为下调,在TAM组和β-雌二醇+TAM组中p57^(kip2) m RNA和蛋白的表达水平均为下调,cyclin E m RNA和蛋白的表达水平则为上调。结论:ICI-182780可抑制Ishikawa细胞的增殖,而TAM则微弱促进Ishikawa细胞增殖,ICI-182780和TAM对子宫内膜样癌的作用并不完全一致。这可能与ICI-182780能上调抑癌基因p57^(kip2)表达,下调癌基因cyclin E表达;TAM则是微弱下调p57^(kip2)表达,上调cyclin E表达有关。ICI-182780可能比TAM更适合子宫内膜样癌患者的内分泌个体化治疗。

关键词：癌,子宫内膜样 β-雌二醇他莫昔芬氟维司群细胞增殖

电压门控性氯离子通道2在血管紧张素Ⅱ促H9C2细胞肥大中的作用

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吉林大学学报（医学版） 2011年第2期37卷 284-287页

作者：牟荣张勇于春艳钟加滕孙连坤刘菲刘玉和北华大学基础医学院病理学教研室吉林吉林132016 吉林大学白求恩医学院病理生理学教研室吉林长春130021

目的:利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外复制心肌细胞H9C2肥大模型,观察电压门控性氯离子通道2(CLC-2)对心肌细胞肥大过程的影响,阐明其作用机制。方法:将H9C2分为对照(control)组、AngⅡ组、坎地沙坦(candesartan)组、坎地沙坦与AngⅡ联合应... 详细信息

目的:利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外复制心肌细胞H9C2肥大模型,观察电压门控性氯离子通道2(CLC-2)对心肌细胞肥大过程的影响,阐明其作用机制。方法:将H9C2分为对照(control)组、AngⅡ组、坎地沙坦(candesartan)组、坎地沙坦与AngⅡ联合应用(candesartan+AngⅡ)组。流式细胞术检测各组H9C2细胞体积的变化,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞中CLC-2mRNA和蛋白表达的变化。结果:与对照组比较,AngⅡ组大体积细胞百分比明显增加(P<0.01),细胞中CLC-2mRNA和蛋白表达水平均增加(P<0.01);与AngⅡ组比较,candesartan+AngⅡ组大体积细胞百分比降低(P<0.01),CLC-2mRNA和蛋白表达也降低(P<0.01)。结论:AngⅡ可诱导心肌细胞H9C2肥大,其机制可能与CLC-2影响细胞内氯离子浓度有关。

关键词：电压门控性氯离子通道2 心肌细胞肥大血管紧张素Ⅱ

缺氧条件下胶质瘤分泌的外泌体通过JAK/STAT3信号通路促进胶质瘤干细胞迁移

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第三军医大学学报 2020年第4期42卷 392-400页

作者：程玥叶秀峰重庆医科大学基础医学院病理学教研室

目的探讨胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体对胶质瘤干细胞迁移的作用。方法超高速离心法提取缺氧和常氧条件下胶质瘤细胞分泌的外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)、Western blot检测等方法对外泌体进行鉴定;用DIO染... 详细信息

目的探讨胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体对胶质瘤干细胞迁移的作用。方法超高速离心法提取缺氧和常氧条件下胶质瘤细胞分泌的外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)、Western blot检测等方法对外泌体进行鉴定;用DIO染料标记外泌体,荧光显微镜观察胶质瘤干细胞能否摄取外泌体。将PBS(空白组)、常氧(20%O2,常氧组)和缺氧(1%O2,缺氧组)条件下提取的外泌体与胶质瘤干细胞共培养,CCK-8法测定胶质瘤干细胞增殖情况,Transwell实验检测胶质瘤干细胞迁移能力变化,Western blot检测JAK/STAT3通路蛋白磷酸化水平的改变。结果在胶质瘤干细胞的胞质中检测到外泌体携带的荧光染料DIO。CCK-8结果显示:提取的外泌体以不同浓度(浓度梯度依次为1、5、10、20、40μg/mL)处理不同时间(12、24、48、72 h)后,常氧组和缺氧组胶质瘤干细胞的细胞活力差异无统计学意义。与空白组和常氧组比较,缺氧组提取外泌体共培养组的胶质瘤干细胞迁移能力显著提高(P<0.05),JAK/STAT3通路蛋白磷酸化水平也显著增加(P<0.05)。结论胶质瘤细胞在缺氧条件下分泌的外泌体部分通过提高JAK/STAT3通路磷酸化水平促进胶质瘤干细胞迁移。

关键词：外泌体胶质瘤干细胞缺氧细胞迁移 JAK/STAT3

视黄酸影响大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达

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中华肝脏病杂志 2001年第5期9卷 306-308页

作者：黄光存张锦生张月娥上海市复旦大学基础医学院病理学教研室 200032

目的研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。方法分离、培养正常大鼠肝星状细胞，传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理，然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像... 详细信息

目的研究视黄酸影响培养大鼠肝星状细胞周期素依赖激酶抑制剂的表达。方法分离、培养正常大鼠肝星状细胞，传代细胞经1ng/ml转化生长因子β1刺激后再以1nmol/ml视黄酸处理，然后采用MTT法、免疫细胞化学法、原位杂交技术并结合图像定量分析观察细胞增殖、α-平滑肌肌动蛋白、视黄酸受体β2及p16、p21与p27等基因的表达情况。结果视黄酸明显抑制星状细胞增殖（41.50%, P＜0.05）、降低α-平滑肌肌动蛋白水平（55.09%, P＜0.05），并诱导视黄酸受体β2基因的表达。同时，视黄酸增高p16蛋白水平（218.75%, P＜0.05），促进p21蛋白表达；而两组细胞均未能以免疫细胞化学法检出p27。此外，视黄酸对p16、p21与p27 mRNA水平均无影响。结论视黄酸抑制由转化生长因子β1介导的大鼠肝星状细胞激活与其上调p16、p21基因转录后表达有关。

关键词：视黄酸肝星状细胞转化生长因子β1 肝纤维化细胞周期素依赖激酶抑制剂大鼠

大鼠气管损伤修复过程中ABCG2转运蛋白的表达

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解剖学报 2006年第2期37卷 163-167页

作者：王琳琳贾兰玲贾心善中国医科大学基础医学院病理学教研室沈阳110001

目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶（5-FU）造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部... 详细信息

目的观察离体大鼠气管上皮损伤修复过程中气管干细胞的动态变化.方法用氟脲嘧啶（5-FU）造成离体大鼠气管上皮损伤,应用间接免疫荧光法和Western blotting动态观测了修复过程中各时间点气管上皮ABCG2的表达.结果 1.5-FU作用12 h后大部分气管上皮脱落,残留的G0期细胞中部分可见ABCG2表达阳性.去除5-FU后3 h细胞数目增多,为扁平状,ABCG2阳性细胞数也随之增多;6～9 h上皮细胞由扁平变为立方,ABCG2阳性细胞数继续增多;24 h上皮细胞呈立方状,并连接成片,ABCG2阳性细胞较前明显减少;48 h气管上皮接近恢复假复层结构,此时仅见极少量ABCG2阳性细胞.正常气管上皮未检测到ABCG2表达.*** blotting分析表明,ABCG2表达量的变化趋势与免疫荧光结果一致.结论 ABCG2的表达与干细胞的数量呈正相关,可作为气管干细胞的标志物.

关键词： ABCG2 气管干细胞氟脲嘧啶间接免疫荧光法免疫印迹法大鼠

连接蛋白43在肺癌组织中表达及对E-cadherin的影响

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中华病理学杂志 2006年第6期35卷 339-343页

作者：张永兴徐洪涛齐凤杰王恩华中国医科大学基础医学院病理学教研室沈阳110001

目的探讨连接蛋白(Cx)43和E-cadherin蛋白在肺癌中表达及两者关联性,研究Cx43对E-cadherin表达的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测85例原发性肺腺癌、鳞癌组织中Cx43和E-cadherin蛋白表达,分析两者的相关性;采用Cx43基因转染人肺巨... 详细信息

目的探讨连接蛋白(Cx)43和E-cadherin蛋白在肺癌中表达及两者关联性,研究Cx43对E-cadherin表达的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测85例原发性肺腺癌、鳞癌组织中Cx43和E-cadherin蛋白表达,分析两者的相关性;采用Cx43基因转染人肺巨细胞癌LH7细胞,分析转染Cx43后对E-cadherin蛋白表达以及对细胞生长速度和细胞周期的影响。结果Cx43和E-cadherin蛋白在癌旁肺组织中均呈膜阳性表达,而在肺癌组织中表达下降,其阳性率分别为50·6%和67·1%,且两者表达下降存在关联性。Cx43和E-cadherin蛋白的表达下降程度与肺癌的分化程度、P-TNM分期和淋巴结转移正相关。LH7细胞转染Cx43基因后,Cx43蛋白表达增加的同时,E-cadherin蛋白也表达升高,且两者均为胞质表达,未见明确的细胞膜表达;转染Cx43基因后细胞增殖速度减慢,与对照组相比,G1期细胞增多,而S、G2期细胞数目减少。结论Cx43和E-cadherin蛋白在肺癌组织中表达下降,且两者之间存在关联性,表达下降程度与临床病理参数相关;LH7细胞转染Cx43基因后,在出现胞质Cx43表达增加的同时,可诱导E-cadherin的胞质表达;Cx43可通过参与细胞周期调节抑制细胞生长速度。

关键词：肺肿瘤连接蛋白43 细胞粘附分子细胞,培养的

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食管鳞癌组织中淋巴管生成2种检测方法比较

郑州大学学报（医学版） 2007年第1期42卷 4-6页

作者：赵阿红宋一民张红新高冬玲张岚张云汉陈奎生郑州大学基础医学院病理学教研室

目的:探讨人食管鳞癌组织中淋巴管生成灵敏的检测方法。方法:分别采用免疫组化SP法(以血管内皮生长因子受体-3为淋巴管特异性标记物)和酶组织化学法检测49例食管鳞癌组织和癌旁组织中淋巴管密度(分别记为LVDi与LVDe)。结果:癌组织中LVD... 详细信息

目的:探讨人食管鳞癌组织中淋巴管生成灵敏的检测方法。方法:分别采用免疫组化SP法(以血管内皮生长因子受体-3为淋巴管特异性标记物)和酶组织化学法检测49例食管鳞癌组织和癌旁组织中淋巴管密度(分别记为LVDi与LVDe)。结果:癌组织中LVDe的表达和癌旁组织中LVDi、LVDe的表达在有、无淋巴结转移时差异均有统计学意义(P<0.01)。有淋巴结转移癌组织中LVDi与LVDe之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:酶组织化学法可较好地显示食管鳞癌组织中的淋巴管。

关键词：食管肿瘤鳞状细胞癌血管内皮生长因子受体-3 淋巴管生成免疫组织化学酶组织化学