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基于MIRA-CRISPR/Cas12a技术的苏黎世克罗诺杆菌快速检测方法建立

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现代食品科技 2024年

作者：杨亚玲赵欣亓梦李晓燕郭峻省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学食品科学与工程学院中国检验检疫科学研究院天津市疾病预防控制中心微生物检验检测所天津市疾病预防控制中心天津市传染病病原微生物重点实验室

该研究针对婴幼儿配方奶粉中重点监测的致病性苏黎世克罗诺杆菌，利用多酶恒温快速扩增技术（Multienzyme Isothermal Rapid Amplification,MIRA）和CRISPR/Cas12a检测系统，开发了一种快速检测体系。基于苏黎世克罗诺杆菌的CTU＿22970... 详细信息

该研究针对婴幼儿配方奶粉中重点监测的致病性苏黎世克罗诺杆菌，利用多酶恒温快速扩增技术（Multienzyme Isothermal Rapid Amplification,MIRA）和CRISPR/Cas12a检测系统，开发了一种快速检测体系。基于苏黎世克罗诺杆菌的CTU＿22970基因序列，设计了特异性MIRA引物和CrR NA，通过MIRA技术扩增得到靶标DNA，靶标DNA的存在可以激活CrR NA-Cas12a复合物的反式切割活性，最后通过胶体金侧向流层析试纸条技术实现检测信号的读出。该研究所构建的检测体系具有良好的特异性与灵敏度，经验证，克罗诺杆菌属内不同菌种与非克罗诺杆菌株的存在均不会激活Cas12a的反式切割功能。该体系可在1.5 h内完成检测，对纯培养物的检出限为1 CFU/mL，对实际样品的检测，初始含菌量为105 CFU/g的奶粉样品不增菌即可检出，初始含菌量为104、103、102、101、100 CFU/g的奶粉样品分别需要预孵育2、4、6、8、10 h检出。检测过程操作简单，不依赖大型仪器设备，无需专业培训，适用于现场化的检测应用，对食品中苏黎世克罗诺杆菌的控制具有重要的实际意义。

关键词：苏黎世克罗诺杆菌 CRISPR/Cas12a 胶体金侧向流层析快速检测

基于Eu3+荧光微球的丁香酚时间分辨荧光免疫层析技术的建立

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农业生物技术学报 2024年第9期32卷 2190-2202页

作者：宋妍灵翟璐李因来陈青舟廖杰金仁耀浙江工商大学海洋食品研究院杭州博岳生物技术有限公司杭州南开日新生物技术有限公司浙江华才检测技术有限公司

丁香酚具有来源广、成本低、效果好且残留期短等优点，被广泛应用于渔业麻醉，但国际上对于其安全性存在争议，认为丁香酚类化合物对啮齿动物是致癌物或潜在的致癌物。为提供一种高效、简便适用于现场快速检测水产品中丁香酚残留的方法... 详细信息

丁香酚具有来源广、成本低、效果好且残留期短等优点，被广泛应用于渔业麻醉，但国际上对于其安全性存在争议，认为丁香酚类化合物对啮齿动物是致癌物或潜在的致癌物。为提供一种高效、简便适用于现场快速检测水产品中丁香酚残留的方法，本研究建立了丁香酚时间分辨荧光免疫层析技术并制备免疫层析试纸条，利用Eu3+标记的荧光微球和抗丁香酚单克隆抗体进行标记，先后对微球活化时间、荧光标记缓冲液pH值、标记抗体量、荧光微球用量及T线和C线包被浓度等参数进行优化，并在最优条件下制备免疫层析试纸条并对其性能进行评价。结果表明，在最优条件下制成的试纸条在0.05～0.40μg/mL之间丁香酚标样浓度的对数值与T/C值具有良好的线性关系，标准曲线方程：y=-2.415lnx+2.589 4,R2=0.994，仪器检出限为0.1μg/mL，表明试纸条具有良好的灵敏度。样品添加回收率试验表明，回收率在94.16%～109.27%范围内，批内和批间变异系数分别为2.00%～7.33%和2.73%～6.97%。利用新研发试纸条对丁香酚标样检测与传统的高效液相色谱检测方法相比结果一致。稳定性试验证明，本研究制备的试纸条的有效保质期至少为1年。本研究所建立的方法适用于水产品中丁香酚残留的快速检测，同时为开发丁香酚快速检测技术提供依据。

关键词：丁香酚时间分辨荧光免疫层析试纸条

山楂叶类保健食品中总黄酮的提取及抗氧化活性研究

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食品安全质量检测学报 2024年第13期15卷 89-98页

作者：王雅楠黄姗尹玉云魏华琳陶健河南省食品和盐业检验技术研究院郑州450003 国家市场监管重点实验室(食品安全快速检测与智慧监管技术) 郑州450003 河南省检验检测研究院集团有限公司郑州450000

目的建立有效测定山楂叶类保健食品中总黄酮含量的方法 ,同时研究山楂叶总黄酮的抗氧化功效。方法以胶囊剂为例,研究山楂叶总黄酮提取的料液比例、溶剂乙醇体积分数和水浴蒸发温度,并采用响应面分析法优化最佳提取条件。验证方法的... 详细信息

目的建立有效测定山楂叶类保健食品中总黄酮含量的方法 ,同时研究山楂叶总黄酮的抗氧化功效。方法以胶囊剂为例,研究山楂叶总黄酮提取的料液比例、溶剂乙醇体积分数和水浴蒸发温度,并采用响应面分析法优化最佳提取条件。验证方法的线性、重复性、精密度、稳定性、准确度。对抗氧化性进行研究,测定山楂叶总黄酮的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine,DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率。结果建立以料液比0.025 (g/m L)、溶剂乙醇体积分数65%、水浴温度65℃的山楂叶总黄酮提取处理方法。建立的方法总黄酮重复性良好,平均含量为1.3 g/100 g,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.6%,仪器精密度为0.02%(n=6)。实验方法总黄酮回收率在90.57%~94.18%之间,RSD为1.3%。山楂叶总黄酮DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除效率分别能达到88.92%、84.46%、70.95%。结论本研究建立的山楂叶总黄酮检测方法结果准确,得出山楂叶总黄酮具有较强的抗氧化功效,为高效快速测定以山楂叶为原料的保健食品中总黄酮的含量提供理论依据。

关键词：总黄酮山楂叶响应面抗氧化活性

基于TOI-Net的高精度货车超载智能判别方法

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仪器仪表学报 2024年第5期45卷 319-328页

作者：梁健康杰虎赵宗扬吴斌王雪森天津大学精密测量技术与仪器国家重点实验室天津300072 天津市政工程设计研究总院有限公司上海300051

针对货车超载运输为道路安全带来巨大威胁,而目前主流的货车超载判别方法存在判别效率低、监管范围小、检测成本高的问题,提出了一种基于TOI-Net的高精度货车超载智能判别方法。首先,设计了针对于超载判别任务的货车行驶轨迹图像生成方... 详细信息

针对货车超载运输为道路安全带来巨大威胁,而目前主流的货车超载判别方法存在判别效率低、监管范围小、检测成本高的问题,提出了一种基于TOI-Net的高精度货车超载智能判别方法。首先,设计了针对于超载判别任务的货车行驶轨迹图像生成方法,可将多维度货车行驶轨迹时空数据转化为货车行驶轨迹图像,在降低数据复杂性的同时实现了特征的聚合;然后,设计了一个高精度货车超载智能判别模型TOI-Net,其由RepVGG模块和位置注意力模块组成,能够充分挖掘货车行驶轨迹数据中的超载信息特征,高效完成超载判别任务。在货车超载数据集上的实验结果表明,所提方法的超载判别准确率为96.1%,且性能指标均高于主流识别网络,实现了对于货车超载行为的精确、快速和全面的判别。

关键词：智能交通人工智能货车超载判别卷积神经网络注意力机制

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双酚A在包装饮品中污染现状及相关食品安全管理法规分析

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生态毒理学报 2024年第4期19卷 244-258页

作者：王鑫璇邢文山李超蒋依桐李玉娜天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点实验室天津300134 天津食品集团有限公司天津300074

随着现代生活水平的提高,包装饮品已经成为人们日常生活中不可或缺的一部分。双酚A(bisphenol A,BPA)作为一种常见的塑料制品添加剂,因其具有无色透明、耐用、轻巧和突出的防冲击性等特点,广泛应用于塑料容器、饮料瓶等食品包装材料。同... 详细信息

随着现代生活水平的提高,包装饮品已经成为人们日常生活中不可或缺的一部分。双酚A(bisphenol A,BPA)作为一种常见的塑料制品添加剂,因其具有无色透明、耐用、轻巧和突出的防冲击性等特点,广泛应用于塑料容器、饮料瓶等食品包装材料。同时,BPA也是典型的环境内分泌干扰物,长期暴露于一定浓度的BPA即使较低剂量也可对机体产生多种毒性损伤,引发人体发生各种炎症、细胞损伤、焦虑抑郁、生殖能力下降甚至癌症等多种疾病。由于近年来国内水源地的污染和含BPA的食品包装材料的广泛使用,我国市售的纯净水、果汁、牛奶和酒类等多种包装饮品均检测到BPA的存在。且因饮品加工处理工艺、温度、pH、储存时间以及包装材料不同等因素导致各种类包装饮品BPA暴露水平有所差异。本文介绍我国各地区多种市售包装饮品的BPA暴露水平,归纳了美国、欧盟、日本、中国以及其他国家或组织针对食品以及食品包装材料安全管理法规并进行分析讨论,结合国内外现有的监管措施,为消费者减少BPA的饮水暴露提出了有效建议,以期为BPA的人群暴露剂量与健康风险研究提供参考依据。

关键词：双酚A 饮品包装材料食品安全法规监管政策

基于Fe_(3)O_(4)纳米材料的磁固相萃取-高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸和山梨酸的含量

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中国食品添加剂 2023年第7期34卷 265-270页

作者：刘平天津市食品安全检测技术研究院天津300308

应用水热法制备了Fe_(3)O_(4)纳米材料,将其作为磁固相吸附剂用于复杂基质中苯甲酸和山梨酸的富集和净化。对影响磁固相萃取效果的参数进行优化如下:吸附剂用量、溶液pH、吸附时间、洗脱剂类型和洗脱时间,其最优条件为Fe_(3)O_(4)纳米... 详细信息

应用水热法制备了Fe_(3)O_(4)纳米材料,将其作为磁固相吸附剂用于复杂基质中苯甲酸和山梨酸的富集和净化。对影响磁固相萃取效果的参数进行优化如下:吸附剂用量、溶液pH、吸附时间、洗脱剂类型和洗脱时间,其最优条件为Fe_(3)O_(4)纳米材料的用量为15 mg、吸附时长为6 min、溶液pH为5、洗脱剂为甲醇:乙酸(8∶2,v/v)、洗脱时长为6min。将所得洗脱液转到高效液相色谱仪检测。该法对酱油中苯甲酸和山梨酸的检出限分别为0.012 mg/L和0.008 mg/L,加标回收率范围为94.4%~105.8%,标准曲线的相关系数≥0.9997。该方法简单便捷、灵敏度高、准确可靠,可用于酱油等复杂基质食品中苯甲酸和山梨酸含量的检测。

关键词：四氧化三铁纳米材料固相萃取高效液相色谱法酱油苯甲酸山梨酸

高效液相色谱-串联质谱法检测保健食品中25种非甾体类抗炎药

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食品安全质量检测学报 2022年第19期13卷 6409-6415页

作者：胡晓楠徐慧静李莹郭文丽纪卫红王欣天津市食品安全检测技术研究院天津300308

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)分析保健食品中25种非法添加非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)的分析方法。方法保健食品固体试样经甲醇超声提取,液体试样经水-甲醇萃取来提取,经液相色谱柱分离后,在多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式下测进行25种NSAIDs含量的测定,外标法定量。结果25种非甾体抗炎药在1~500 ng/mL范围内呈现良好线性关系,相关系数均大于0.99,检出限为1.5~2.0μg/kg,定量限为5.0~6.0μg/kg,6.0、12.0和60.0μg/kg 3个水平平均加标回收率为80.0%~108.2%,相对标准偏差为6.4%~9.9%(n=6)。结论该方法针对保健食品基质,对固体和液体样品分别采取超声萃取和液液直接萃取的提取方式,操作简便、节约成本、专属性强且灵敏度、回收率高,满足保健食品中NSAIDs的检测。

关键词：非甾体类抗炎药保健食品高效液相色谱-串联质谱法

免疫磁珠结合显色平板快速检测婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌

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食品研究与开发 2023年第14期44卷 187-191,204页

作者：王磊张洁张文馨崔晓雅天津市食品安全检测技术研究院天津300308

该研究利用羧基化磁珠偶联兔多克隆抗体,制备特异性免疫磁珠,并优化制备条件,然后与显色培养基联用,建立免疫磁珠-显色平板检测方法,用于富集分离婴儿奶粉中的阪崎克罗诺杆菌。结果表明,磁珠与抗体的最佳偶联温度37℃、偶联时间2.0 h,1... 详细信息

该研究利用羧基化磁珠偶联兔多克隆抗体,制备特异性免疫磁珠,并优化制备条件,然后与显色培养基联用,建立免疫磁珠-显色平板检测方法,用于富集分离婴儿奶粉中的阪崎克罗诺杆菌。结果表明,磁珠与抗体的最佳偶联温度37℃、偶联时间2.0 h,1 mg磁珠的最佳抗体添加量为200μg,饱和偶联量为182.77μg。制得的免疫磁珠,捕获目标菌的浓度范围为10~2~10~7 CFU/mL,捕获率为68.4%~82.4%,与非目标菌反应率低于10%。检测方法应用于模拟污染样品,在目标菌浓度10~2~10~5 CFU/mL时,捕获率为66.2%~71.5%。相比传统方法,该方法的检测周期缩短了2~3 d。

关键词：阪崎克罗诺杆菌免疫磁珠显色培养基快速检测婴儿配方食品

液相色谱-质谱法检测保健食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷

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食品安全质量检测学报 2022年第4期13卷 1150-1155页

作者：徐慧静牛建娜杨栩胡晓楠赵甲慧徐锡媛天津市食品安全检测技术研究院天津300308

目的建立液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)分析保健食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷顺反结构(顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷、反式白藜芦醇苷)含量的分析方法。方法保健食品经80%乙醇于低... 详细信息

目的建立液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)分析保健食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷顺反结构(顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷、反式白藜芦醇苷)含量的分析方法。方法保健食品经80%乙醇于低温条件下避光提取,经液相色谱柱分离后,在多反应监测(multiple response monitoring, MRM)模式下进行白藜芦醇及白藜芦醇苷顺反结构含量的测定,外标法定量。结果白藜芦醇及白藜芦醇苷顺反结构在5-200μg/L范围内呈现良好线性关系,相关系数均大于0.999,方法检出限为0.02-1.00μg/L,定量限为0.06-3.00μg/L,平均回收率为94.4%-115.7%,相对标准偏差为0.8%-7.6%(n=6)。结论该方法针对保健食品基质,具有保护白藜芦醇及白藜芦醇苷结构的特点,操作简便且回收率高,满足保健食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷顺反结构含量的检测要求。

关键词：白藜芦醇白藜芦醇苷液相色谱-质谱法保健食品