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生物化学与生物物理进展 1989年第6期16卷 471-472,475页

作者：李兰戈郭守祥崔汝珍天津医学院生物化学教研室

利用~3H-秋水仙碱与微管蛋白的特异性结合及DEAE纤维素对微管蛋白的离子交换作用,以测定~3H-秋水仙碱微管蛋白复合物的含量,了解脑神经原的分化状态。此法简便、快速,稳定、经济。

关键词： DEAE纤维素法微管蛋白测定

蛋白激酶对活性氧调节7721人肝癌细胞生长的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 67-72页

作者：刘珊林刘冠中程建施冬云陈惠黎张亚东复旦大学医学院生物化学教研室上海200032 复旦大学医学院生物化学教研室

以有义和反义人锰型超氧化物歧化酶 (MnSOD)、蛋白激酶B (PKB)cDNA分别转染人 772 1肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型 ,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧化水平及PKB的活性 ,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转... 详细信息

以有义和反义人锰型超氧化物歧化酶 (MnSOD)、蛋白激酶B (PKB)cDNA分别转染人 772 1肝癌细胞系建立高、低表达MnSOD和PKB的模型 ,通过改变细胞内、外源性活性氧和抗氧化水平及PKB的活性 ,研究活性氧调节肝癌细胞生长过程中与PKB信号转导途径的关系。结果表明 ,低浓度外源性活性氧过氧化氢 (1～ 10μmol/L)应激及MnSOD低表达细胞中内源性活性氧水平升高 ,都可促进肝癌细胞增殖 ,而抗氧化剂丹参素 (4 0mg/L)干预及MnSOD高表达使细胞内源性活性氧水平相对下降 ,都可一定程度抑制细胞的生长。采用3 2 P参入法检测细胞PKB酶活性 ,发现细胞内、外源性活性氧均能激活PKB ,而采用抗氧化干预 ,能明显抑制PKB的酶活性。采用RT PCR法检测AP 1转录因子组成成员c fos和c jun基因的mRNA表达 ,发现与PKB活性呈正比。说明活性氧在特定细胞内氧化 /还原环境下可通过激活PKB途径传递信号、调控转录因子AP 1表达、促进肝癌细胞生长

关键词： PKB 活性氧抗氧化 AP-1 肝癌细胞

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人血浆载脂蛋白E的分离提纯

生物化学与生物物理进展 1992年第2期19卷 140-143页

作者：解用虹徐秀双郭刚郭善一王维兆天津医学院生物化学教研室天津300070

利用仅2.5h的不连续密度梯度超速离心,可自人血浆分离获得纯净的极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后,其可溶成分经Heparin-Sepharose CL-6B亲和层析柱,可分为低盐洗脱峰Ⅰ和高盐洗脱峰Ⅱ。峰Ⅱ经SDS-PAGE鉴定为单一染色带,测定其分子量为... 详细信息

利用仅2.5h的不连续密度梯度超速离心,可自人血浆分离获得纯净的极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后,其可溶成分经Heparin-Sepharose CL-6B亲和层析柱,可分为低盐洗脱峰Ⅰ和高盐洗脱峰Ⅱ。峰Ⅱ经SDS-PAGE鉴定为单一染色带,测定其分子量为33900。此即为纯净的人血浆载脂蛋白E,载脂蛋白E的分离提纯为制备其羊克隆抗体和进行血浆浓度及表型测定提供了有利条件。

关键词：分离亲和层析载脂蛋白E

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人胎肝匀浆碘化甲腺氨酸5′脱碘酶的研究

中国生物化学与分子生物学报 1986年第6期 85-87页

作者：王嘉仪,王木尼,李丹宁,杨仁逵,苏学良天津医学院生物化学教研组天津医学院生物化学教研组天津医学院生物化学教研组天津医学院生物化学教研组天津医学院生物化学教研组

甲状腺素（T4）在外周组织5′单脱碘为3.5.3′-三碘甲腺氨酸（T3）而使其生物学活性大大提高,故催化此反应的碘化甲腺氨酸5′脱碘酶被视为甲状腺激素生物学作用的重要调节因子。不同胎令脏器该酶活性的研究将为了解胎儿期间甲状腺激素... 详细信息

甲状腺素（T4）在外周组织5′单脱碘为3.5.3′-三碘甲腺氨酸（T3）而使其生物学活性大大提高,故催化此反应的碘化甲腺氨酸5′脱碘酶被视为甲状腺激素生物学作用的重要调节因子。不同胎令脏器该酶活性的研究将为了解胎儿期间甲状腺激素的代谢及共对胚胎生长发育的影响提供重要线索。本文将对人胎肝匀浆碘化甲腺氨酸5′脱碘酶研究结果作一简要报道。

关键词：肝匀浆脱碘酶人胎碘化

星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第7期24卷 41-47+103页

作者：张百芳彭芳芳章江洲武栋成武汉大学医学院生物化学教研室武汉大学医学院生物化学教研室武汉 430071 中国

目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带:免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果... 详细信息

目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带:免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平。结果:经星形孢菌素0.1μmol/L处理后NG108-15细胞呈典型的凋亡形态学变化,星形孢菌素处理后6h即出现DNA凋亡梯带,可持续至24h,Bax蛋白表达在星形孢菌素处理后6h开始上升,12h至最高峰,24h后下降,Bcl-2蛋白表达在星形孢菌素处理后3h明显上升,随后逐渐下降,星形孢菌素处理后6h可见caspase-3切割产物出现,但Cdk5蛋白的表达水平未见明显变化,p53蛋白表达在星形孢菌素处理12h后下降。结论:星形孢菌素诱导了NG108-15细胞的凋亡,可能与Bax蛋白表达的增加及caspase-3切割有关,而与p53和Cdk5无明显相关性。

关键词：星形孢菌素 NG108-15细胞细胞凋亡 DNA断片 bax基因 bcl-2基因 p53基因细胞周期素依赖激酶

siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

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生物化学与生物物理进展 2008年第3期35卷 327-334页

作者：朱月春吕会茹李丹怡童淑芬昆明医学院生物化学教研室昆明650031

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载... 详细信息

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-U6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-timePCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PD!).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD!的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

关键词： siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶人皮肤黑色素瘤稳转细胞株细胞周期 P53 Caspase-3

醛糖还原酶基因 5′调控区新的点突变对基因表达调控的影响(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第10期35卷 904-908页

作者：谢平李清解刘美莲黄建军曾卫民陈淑华宋惠萍中南大学湘雅医学院生物化学教研室中南大学湘雅医学院生物化学教研室长沙410078

为了进一步研究醛糖还原酶 (AR)基因 5′调控区存在的可引起蛋白质表达发生改变的遗传变异及其对糖尿病并发症的影响 ,应用PCR SSCP对中国人 2型糖尿病患者的AR基因 5′调控区进行筛选 ,在两名糖尿病患者中发现一新点突变C- 1 6 7→A ,... 详细信息

为了进一步研究醛糖还原酶 (AR)基因 5′调控区存在的可引起蛋白质表达发生改变的遗传变异及其对糖尿病并发症的影响 ,应用PCR SSCP对中国人 2型糖尿病患者的AR基因 5′调控区进行筛选 ,在两名糖尿病患者中发现一新点突变C- 1 6 7→A ,使AR基因 5′调控区产生一个新的CCAAT盒。含点突变的两名患者尽管患病多年 ,长期处于高血糖状态 ,但无糖尿病并发症发生。而且他们的红细胞中AR活性都很低 ,处于无视网膜病变患者组的下限范围。将含野生型和点突变DNA片段分别克隆至氯霉素乙酰转移酶报告基因载体 (pCAT) ,检测CAT的活性确定野生型和突变型序列的转录活性。同时进行凝胶滞留试验以观测DNA与蛋白质的相互作用。结果显示 :含C- 1 6 7→A的启动子相对转录活性 (5 .7% )明显低于野生型(15 .7% )。凝胶滞留试验中 ,突变序列迁移速率较野生型慢。以上结果说明 ,AR基因 5′调控区C- 1 6 7→A点突变干扰了启动子区顺式作用元件与反式作用因子的结合 ,导致AR基因转录活性降低 ,使患者组织中AR活性下降 ,从而阻止或减缓 2型糖尿病视网膜病变发生发展。

关键词：醛糖还原酶基因点突变糖尿病慢性并发症

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高苯丙氨酸血症大鼠脑内单胺类递质的研究

生物化学与生物物理进展 1995年第4期22卷 352-354,376页

作者：万福生南国华江西医学院生物化学教研室

以３ｄ龄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腹腔注射苯丙氨酸（Ｐｈｅ）诱导高苯丙氨酸血症，荧光法测定大脑皮层及其突触体中去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）含量；Ｙ型电迷宫法测其学习记忆能力．结果... 详细信息

以３ｄ龄Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腹腔注射苯丙氨酸（Ｐｈｅ）诱导高苯丙氨酸血症，荧光法测定大脑皮层及其突触体中去甲肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）含量；Ｙ型电迷宫法测其学习记忆能力．结果显示：高苯丙氨酸血症大鼠大脑皮层ＮＥ、ＤＡ及５－ＨＴ含量降低３８．６％～６７．４％，突触体中ＮＥ、ＤＡ和５－ＨＴ含量降低５１．９％～７０．２％，学习记忆能力明显低于对照组．结果提示，苯酮尿症智力障碍可能与大脑皮层及其突触体中某些单胺类递质含量降低相关．

关键词：高苯丙氨酸血症单胺类递质病理

中药大黄的綜合研究 Ⅱ.蒽醌衍生物的紙上层析

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药学学报 1963年第12期 725-730页

作者：苏学夏陈琼华天津医学院生物化学教研组

本文研究了中药大黄中蒽醌衍生物纸上层析的扩展剂体系和其他条件.实验试用了33种扩展剂体系,我们选择了8种效果较好者,其中以四氯化碳-苯-水体系为最好.以此改进的纸上层析法进行了不同品种大黄中蒽醌衍生物含量的测定,实验结果表明,... 详细信息

本文研究了中药大黄中蒽醌衍生物纸上层析的扩展剂体系和其他条件.实验试用了33种扩展剂体系,我们选择了8种效果较好者,其中以四氯化碳-苯-水体系为最好.以此改进的纸上层析法进行了不同品种大黄中蒽醌衍生物含量的测定,实验结果表明,不同品种及同品种不同部位的大黄中各种蒽醌衍生物的含量差异很大.蒽醌衍生物总量及致泻与抗菌有效成分,都以西宁大黄为最高.

关键词：大黄素甲醚西宁大黄蒽醌衍生物中药大黄四氯化碳氯代烃扩展剂大黄酸大黄酚层析色层分析

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淋巴细胞凋亡与p53蛋白表达关系的研究

生物化学与生物物理进展 1999年第2期26卷 150-153页

作者：钟叔平汕头大学医学院生物化学教研室

培养Ｂ９５８细胞，分离ＥＢ病毒，转染外周血和扁桃体淋巴细胞，建立永生化的ＬＣＬｓ和ＴＬＣＬ细胞株；带有ｗｔＰ５３基因的ＬＣＬｓ在ＤＮＡ损伤剂———顺铂处理前未检出ｐ５３蛋白，经顺铂处理后，ＬＣＬｓ随作用时间延长细胞... 详细信息

培养Ｂ９５８细胞，分离ＥＢ病毒，转染外周血和扁桃体淋巴细胞，建立永生化的ＬＣＬｓ和ＴＬＣＬ细胞株；带有ｗｔＰ５３基因的ＬＣＬｓ在ＤＮＡ损伤剂———顺铂处理前未检出ｐ５３蛋白，经顺铂处理后，ＬＣＬｓ随作用时间延长细胞存活率明显下降、ｐ５３蛋白水平升高、ＤＮＡ电泳显出梯状带；含ｍｔＰ５３基因的淋巴瘤细胞在顺铂处理前可检出高浓度的ｐ５３蛋白，经顺铂处理后，细胞存活率与ｐ５３蛋白并无明显改变．这些结果表明：顺铂引起细胞ＤＮＡ损伤、激活ｗｔｐ５３蛋白的表达。

关键词：细胞凋亡顺铂 p53蛋白淋巴细胞肿瘤药物疗法