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生物质谱在生物制品宿主细胞蛋白残留分析中的应用

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质谱学报 2024年第2期45卷 193-200页

作者：谢力琦王静朱添怡王佳馨黄懿乔亮上海探实生物科技有限公司上海201206 复旦大学化学系上海200438

宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量... 详细信息

宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量分布信息,需要使用正交方法全面监测。而生物质谱技术无需依赖抗体即可实现HCPs的定性和定量分析,已逐渐成为除ELISA法外的主要分析表征方法,但质谱技术存在缺乏统一的操作流程和验证标准、高丰度药物信号抑制以及高昂的仪器成本等问题。本文总结了质谱法在生物制品HCPs分析中的工作流程及其应用进展,详细阐述了流程中涉及的样品准备、液相色谱分离、质谱数据采集、质谱数据分析和报告的开发原则和关键方法参数,并对未来的研究方向及挑战进行展望。

关键词：宿主细胞蛋白生物质谱生物制品质量控制

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亚精胺生物活性及其开发应用的研究进展

中草药 2024年第16期55卷 5714-5722页

作者：任佳丽於天高欣晨陈位三赵盈李先宽於洪建天津中医药大学天津301617 甘李药业股份有限公司北京101100 合肥和晨生物科技有限公司安徽合肥230011

亚精胺是一类天然的多胺,普遍存在于鱼类、家禽等动物,谷物、蔬菜、中草药等植物以及乳酸菌、双歧杆菌等微生物细胞中,具有抗衰老、抗氧化、抗炎、心血管保护等多种药理作用。目前亚精胺在保健品、医药、植物生理等领域得到国内外的广... 详细信息

亚精胺是一类天然的多胺,普遍存在于鱼类、家禽等动物,谷物、蔬菜、中草药等植物以及乳酸菌、双歧杆菌等微生物细胞中,具有抗衰老、抗氧化、抗炎、心血管保护等多种药理作用。目前亚精胺在保健品、医药、植物生理等领域得到国内外的广泛研究。通过查阅亚精胺国内外相关文献资料并结合文献计量学,对亚精胺的植物源、动物源性食品、体内合成等多种来源,体内吸收、代谢、分布,药理作用及开发应用进行系统综述,以期为亚精胺在药品、保健品、化妆品等方面的开发应用提供参考。

关键词：亚精胺多胺代谢文献计量学开发应用

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酶-化学级联催化制备(S)-烟碱

精细化工 2024年第1期41卷 127-136页

作者：刘茜琳高静马丽宋浩雷贺莹郑晓冰河北工业大学化工学院天津300400 河北亚诺生物科技有限公司河北石家庄052160

传统(S)-烟碱合成方法步骤复杂且依赖多种化学催化剂。为了实现(S)-烟碱的绿色合成,设计了酶-化学级联途径:首先,构建了亚胺还原酶(IRED)与甲酸脱氢酶(FDH)的偶联体系,以麦斯明为底物合成(S)-降烟碱;然后,将(S)-降烟碱经Eschweiler-Cla... 详细信息

传统(S)-烟碱合成方法步骤复杂且依赖多种化学催化剂。为了实现(S)-烟碱的绿色合成,设计了酶-化学级联途径:首先,构建了亚胺还原酶(IRED)与甲酸脱氢酶(FDH)的偶联体系,以麦斯明为底物合成(S)-降烟碱;然后,将(S)-降烟碱经Eschweiler-Clarke反应制备(S)-烟碱。通过大肠杆菌宿主分别对IRED和FDH进行表达,得到含酶细胞及酶液,考察了pH和温度对细胞中IRED和FDH酶活力的影响。优化酶催化制备(S)-降烟碱的反应条件,在30℃、pH 7.5条件下,添加质量浓度为30 g/L的麦斯明、600 U/L FDH细胞、900 U/L IRED细胞、0.6 mmol/L NADP^(+)和质量浓度为90 g/L的甲酸钠,(S)-降烟碱的产率>98%,对映体过量(e.e.)值>99%。最后,通过化学法将(S)-降烟碱甲基化得到(S)-烟碱,此步骤产率和e.e.值均达99%以上。

关键词： (S)-烟碱亚胺还原酶甲酸脱氢酶 (S)-降烟碱生物工程

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挤压膨化鹿茸菇-大麦复合粉的理化特性、胃肠消化和酵解特性

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食品科学 2024年第13期45卷 198-209页

作者：丁怡炜范松涛白娟顾耀军肖香江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江202013 江苏江南生物科技有限公司江苏镇江212300

通过挤压膨化制备大麦粉(BF)、鹿茸菇-大麦复合粉(DLR)、鹿茸菇副产物-大麦复合粉(DBY),分析添加鹿茸菇组分对产品理化特性和营养功能的影响。结果表明,DLR和DBY的淀粉糊化程度明显降低。采用标准化INFOGEST 2.0方法模拟胃肠消化发现,DB... 详细信息

通过挤压膨化制备大麦粉(BF)、鹿茸菇-大麦复合粉(DLR)、鹿茸菇副产物-大麦复合粉(DBY),分析添加鹿茸菇组分对产品理化特性和营养功能的影响。结果表明,DLR和DBY的淀粉糊化程度明显降低。采用标准化INFOGEST 2.0方法模拟胃肠消化发现,DBY组因鹿茸菇副产物富含可溶性膳食纤维,其抗氧化能力显著高于BF和DLR组(P0.5,P<0.05)。综上,添加鹿茸菇组分有效改善复合大麦粉产品品质和功能特性,且DBY具有更好的抗氧化活性和肠道菌群调节作用,研究结果可为开发鹿茸菇-大麦膨化产品提供理论支持。

关键词：挤压膨化大麦鹿茸菇体外消化酵解肠道微生物

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牡丹花酶解肽的理化性质及促进皮肤健康功效

食品工业科技 2024年

作者：曾贝贝吕静鲁杏茹智文博李带根厦门元之道生物科技有限公司

为进一步促进牡丹花的开发利用，本研究以酶解的牡丹花酶解肽为研究对象，分析了其分子量分布与氨基酸组成，通过测定体外酪氨酸酶抑制率、抗糖化活性、透明质酸酶抑制率以及抗氧化活性研究其促进皮肤健康的功效，并进一步利用斑马鱼黑... 详细信息

为进一步促进牡丹花的开发利用，本研究以酶解的牡丹花酶解肽为研究对象，分析了其分子量分布与氨基酸组成，通过测定体外酪氨酸酶抑制率、抗糖化活性、透明质酸酶抑制率以及抗氧化活性研究其促进皮肤健康的功效，并进一步利用斑马鱼黑色素沉积模型进行验证。结果表明，牡丹花酶解肽是由15种氨基酸组成的平均分子量为644 Da的小分子肽，当浓度为10 mg/mL时，体外酪氨酸酶抑制率为88.96%，晚期糖基化终末产物（AGEs）抑制率为90.50%，透明质酸酶抑制率为60.43%，DPPH自由基清除率和羟自由基清除率分别为74.77%和94.74%。同时，斑马鱼模型的结果表明牡丹花酶解肽可有效抑制斑马鱼头部黑色素沉积，当样品浓度为1000 μg/mL时，黑色素抑制率达到40.59%。总之，体内外研究结果初步证明牡丹花酶解肽具有良好的促进皮肤健康的潜力。

关键词：牡丹花酶解肽美白皮肤健康抗氧化斑马鱼

猪伪狂犬病病毒LAMP-Taqman检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2024年第10期 2110-2115页

作者：李宇石磊时国强张莹露董振国河北三狮生物科技有限公司

基于环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV）LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组，并将环引物修饰荧光基团和... 详细信息

基于环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus, PRV）LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组，并将环引物修饰荧光基团和淬灭基团作为Taqman探针，以实际阳性样本和重组质粒为模板，测试体系组分添加量、特异性、灵敏度和重复性；同时，使用市售恒温检测试剂盒平行测试38份实际样本，验证LAMP-Taqman检测体系的实际检测效果。结果显示，各组分最佳终浓度为：PRV-FIP/BIP 0.8μmol/L,Bst DNA聚合酶0.7 U/μL,TaqDNA聚合酶0.24 U/μL,dNTPs 1.6 mmol/L,MgSO47.2 mmol/L;体系特异性好，不与其他病毒样本产生交叉反应，梯度样本的线性相关系数（R2）为0.995,重复性测试的变异系数小于3.000%,最低检出限可达2.81×10～2拷贝/μL;对实际样本的测试结果与市售恒温荧光法检测试剂完全一致。结果表明，基于LAMP-Taqman方法建立的PRV检测体系特异灵敏、稳定准确，是一种适用于猪群PRV精准检测的可靠技术方法。

关键词：伪狂犬病病毒环介导等温扩增技术 Taqman 检测方法

系统代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌CP提高L-亮氨酸生产

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食品与发酵工业 2024年

作者：吴开水刘韪玮马零徐庆阳江苏元易邦生物科技有限公司天津科技大学生物工程学院

L-亮氨酸是一种重要的支链氨基酸，在医药、食品、饲料、化妆品等多领域中具有重要价值。目前，工业上用于生产L-亮氨酸的菌株存在转化率低、副产物多、结晶后产率大幅下降等问题。为获得一株性能优越的L-亮氨酸生产菌株，该研究对L-亮... 详细信息

L-亮氨酸是一种重要的支链氨基酸，在医药、食品、饲料、化妆品等多领域中具有重要价值。目前，工业上用于生产L-亮氨酸的菌株存在转化率低、副产物多、结晶后产率大幅下降等问题。为获得一株性能优越的L-亮氨酸生产菌株，该研究对L-亮氨酸生产菌株谷氨酸棒状杆菌CP进行系统代谢工程改造，首先，敲除竞争途径并引入外源磷酸酮醇酶（由fxpk编码）加强前体物（丙酮酸和乙酰CoA）供应；其次，加强主代谢流（亮氨酸途径和支链氨基酸共同途径）提高L-亮氨酸产量；随后，加强胞内NADPH的供应；最后，敲除L-亮氨酸内转运蛋白BrnQ，最终获得的可高效生产L-亮氨酸的工程菌株CP06-1在5 L生物反应器中经50 h发酵后L-亮氨酸产量达65.3 g/L，糖酸转化率25.1%。此外，为解决L-亮氨酸结晶后产生的泡沫影响菌体吸收营养和溶氧的问题，该研究采取了半连续发酵的方式在L-亮氨酸结晶前通过放液-补液来延长菌株产酸高峰期，最终5 L生物反应器发酵50 h总生产L-亮氨酸228.8 g，糖酸转化率达27.9%，较分批补料提高了11.2%。该研究为L-亮氨酸生产菌株的改造和应用提供了一定的指导价值。

关键词： L-亮氨酸系统代谢工程谷氨酸棒状杆菌乙酰CoA NADPH 半连续发酵

对照提取物在浙贝母配方颗粒质量分析中的应用研究

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中药新药与临床药理 2024年第1期35卷 115-121页

作者：陈海燕吴垠巫少娟曾名德钟健宇张坚潮林丹丹张奕尧郭隆钢广州科曼生物科技有限公司广东广州510663

目的以浙贝母对照提取物(水提)和湖北贝母对照提物(水提)为参照,对12个不同厂家的22批浙贝母配方颗粒进行质量分析。方法以乙酸乙酯-甲醇-三乙胺-水(17∶1∶1∶0.5)为展开剂进行高效薄层色谱(HPTLC)指纹图谱分析;采用Agilent Eclipse ... 详细信息

目的以浙贝母对照提取物(水提)和湖北贝母对照提物(水提)为参照,对12个不同厂家的22批浙贝母配方颗粒进行质量分析。方法以乙酸乙酯-甲醇-三乙胺-水(17∶1∶1∶0.5)为展开剂进行高效薄层色谱(HPTLC)指纹图谱分析;采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.03%二乙胺溶液,梯度洗脱,柱温25℃,蒸发光检测器,进行高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析。根据浙贝母配方颗粒标准含量测定项下方法测定含量。结果 HPTLC和HPLC分析结果表明,22批标识为浙贝母配方颗粒的样品存在明显差异,其中有3家生产企业的4批浙贝母配方颗粒检出湖北贝母指纹图谱特征,其余18批浙贝母配方颗粒样品贝母素甲和贝母素乙的总量为0.291~3.179 mg·g^(-1),差异较大。结论目前市售的浙贝母配方颗粒样品质量差异较大,经标准化制备的对照提取物(水提)对分析浙贝母配方颗粒的质量比对照药材具有更好的适用性。

关键词：浙贝母湖北贝母配方颗粒对照提取物高效薄层色谱指纹图谱

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常见有机酸在肉鸡上的应用效果

饲料工业 2024年

作者：李志忠余淼吕继蓉黄明亚刘张育刘峰李思勉成都大帝汉克生物科技有限公司

自2020年7月1日执行农业农村部194号公告至今，饲料禁抗已经3年有余。有机酸作为酸化剂的组成原料，相比于无机酸有着刺激性、腐蚀性小，效果更好的优点，在畜禽养殖中被广泛应用。同时，2022年我国肉鸡产量超过巴西，成为美国之后世界... 详细信息

自2020年7月1日执行农业农村部194号公告至今，饲料禁抗已经3年有余。有机酸作为酸化剂的组成原料，相比于无机酸有着刺激性、腐蚀性小，效果更好的优点，在畜禽养殖中被广泛应用。同时，2022年我国肉鸡产量超过巴西，成为美国之后世界第二大肉鸡生产国，肉鸡产业对我国畜禽养殖行业有着举足轻重的地位。文章总结了前人关于常见有机酸在肉鸡上的应用效果，期望为后续研究人员在肉鸡上进行酸化剂相关研究起到参考作用。

关键词：酸化剂有机酸肉鸡生产性能应用效果