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两株兔源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及荚膜血清分型

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浙江农业学报 2024年第5期36卷 1041-1046页

作者：季权安徐翔飞鲍国连黄叶娥崔雪梅刘燕浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

为探明浙江省规模兔场主要传染病流行现状,明确其致病菌及血清型,开展了家兔流行病学调查与病原分离鉴定。调研发现,不少兔场存在以打喷嚏和鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性分泌物为主要临床特征的呼吸道传染病,进而对浙江省家兔主产区发... 详细信息

为探明浙江省规模兔场主要传染病流行现状,明确其致病菌及血清型,开展了家兔流行病学调查与病原分离鉴定。调研发现,不少兔场存在以打喷嚏和鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性分泌物为主要临床特征的呼吸道传染病,进而对浙江省家兔主产区发病严重兔场进行采样,从嵊州、宁波三家患病兔鼻腔中分离到两株病原菌,进行了病原分离鉴定、荚膜血清分型及药敏试验。根据分离菌的菌落形态、革兰氏染色特征、特异性PCR以及荚膜血清分型PCR鉴定结果,确定两株致病菌均为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,分别命名为ZJNB0321和ZJSZ0322。构建系统发育树,结果表明,两分离株属于同一分支,且与多杀性巴氏杆菌处于同一分支,并拥有独立的分支。药敏试验结果表明,不同地区分离株药敏特性不尽相同。研究结果为兔场合理用药及有效防控提供了科学依据。

关键词：兔呼吸道疾病多杀性巴氏杆菌荚膜血清型药敏试验

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副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 283-289页

作者：李军星余斌徐丽华苏菲叶十一袁秀芳浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素... 详细信息

副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法,并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示,CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时,按0.1 g/L等体积混合,在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基,并且均以包涵体形式存在,经包涵体离心粗纯化后,即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化,得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀,且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明,本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法,所制备的CDT具有良好的生物学活性。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死性膨胀毒素三顺反子质粒完整毒素

基于体外仿生酶水解物能值和化学成分预测谷物饲料原料的鸡代谢能值

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中国农业科学 2024年第10期57卷 2035-2045页

作者：李凯白国松滕春然马腾钟儒清陈亮张宏福中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/畜禽营养与饲养全国重点实验室

【目的】利用单胃仿生消化系统测定小麦、稻谷及糙米原料的鸡酶水解物能值（EHGE），结合两种体内法(自由采食法（FF）和排空强饲法（TF）)测定的小麦、稻谷及糙米原料的鸡代谢能值，建立基于酶水解物能值和原料化学成分的鸡代谢能值预... 详细信息

【目的】利用单胃仿生消化系统测定小麦、稻谷及糙米原料的鸡酶水解物能值（EHGE），结合两种体内法(自由采食法（FF）和排空强饲法（TF）)测定的小麦、稻谷及糙米原料的鸡代谢能值，建立基于酶水解物能值和原料化学成分的鸡代谢能值预测模型，为谷物原料鸡代谢能值快速预测提供参考。【方法】使用单胃仿生消化系统分别测定3种来源的小麦、稻谷及糙米共计9个样品的鸡酶水解物能值（EHGE），每个谷物样品设置5个重复，每个重复1根消化管。结合前期通过自由采食法和排空强饲法测定的同批次原料的鸡表观代谢能值（AME）和真代谢能值（TME），利用线性回归建立基于化学成分及酶水解物能值的AME、TME预测模型。【结果】（1）在干物质基础下，3种来源的小麦原料酶水解物能值分别为14.46、14.63和14.80 MJ·kg-1;3种来源的稻谷原料酶水解物能值分别为12.52、13.59和13.40 MJ·kg-1;3种来源的糙米原料酶水解物能值分别为14.74、15.10和15.23 MJ·kg-1。（2）粗灰分和中性洗涤纤维分别与FF法测定的AME和TME(AMEFF,TMEFF)和TF法测定的AME和TME(AMETF,TMETF)呈极显著的负相关（P三类谷物原料的EHGE与体内法测定的代谢能值具有较好的相关性。本研究条件下，基于化学成分建立的谷物AME和TME预测模型优于基于EHGE建立的预测模型。

关键词：鸡代谢能酶水解物能值预测模型谷物

饲粮表观代谢能水平对1~28日龄三穗鸭生长性能、屠宰性能及血浆生化指标的影响

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中国畜牧兽医 2024年第3期51卷 1069-1076页

作者：韩雪李美娟代国滔王清峰冯宇隆贵州省农业科学院贵州省畜牧兽医研究所贵阳550005

【目的】探究饲粮表观代谢能(apparent metabolizable energy,AME)水平对1~28日龄三穗鸭生长性能、屠宰性能及血浆生化指标的影响,并根据回归模型估算AME需要量。【方法】试验选取336只健康1日龄三穗鸭公鸭,采用单因子完全随机设计将试... 详细信息

【目的】探究饲粮表观代谢能(apparent metabolizable energy,AME)水平对1~28日龄三穗鸭生长性能、屠宰性能及血浆生化指标的影响,并根据回归模型估算AME需要量。【方法】试验选取336只健康1日龄三穗鸭公鸭,采用单因子完全随机设计将试验鸭平分为6组,每组7个重复,每个重复8只鸭。试验鸭分别饲喂AME为10.92、11.38、11.80、12.26、12.68和13.14 MJ/kg的玉米-豆粕型饲粮,试验期28 d。试验结束后,统计生长性能、屠宰性能,并检测血浆生化指标。【结果】饲粮AME水平显著影响日增重、料重比和腹脂率(P0.05);饲粮AME水平显著影响血浆谷草转氨酶(AST)活性(P0.05)。基于直线-折线回归模型,以料重比、日增重和腹脂率为评价指标估测1~28日龄三穗鸭AME最低需要量分别为11.83、11.42和12.24 MJ/kg。【结论】饲喂11.38 MJ/kg AME饲粮可有效改善1~28日龄三穗鸭日增重和料重比,并降低腹脂率。综合考虑,1~28日龄三穗鸭AME最适需要量为11.42~12.24 MJ/kg。

关键词：三穗鸭表观代谢能(AME) 屠宰性能生长性能需要量

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豆粕减量替代研究进展

河北农业 2024年第1期 87-88页

作者：张辉耀张秋良颜国华郑丽丽胡晓悦王志民何团拥杨玉增河北省畜牧兽医研究所

豆粕是大豆提取豆油后的副产物,具有营养全面、氨基酸组成均衡、成本低、易保存等优点。作为一种优质蛋白质饲料,豆粕被广泛用于畜禽养殖行业。中国是大豆的主要产国之一,但因为人均耕地面积小、人口庞大等原因限制,导致我国大豆产量不... 详细信息

豆粕是大豆提取豆油后的副产物,具有营养全面、氨基酸组成均衡、成本低、易保存等优点。作为一种优质蛋白质饲料,豆粕被广泛用于畜禽养殖行业。中国是大豆的主要产国之一,但因为人均耕地面积小、人口庞大等原因限制,导致我国大豆产量不能满足畜牧生产需求,需要大量从国外进口。受世界经济、政治等多重因素影响,2022年以来,我国饲料价格不断增长,豆粕价格超过5500元/吨。如何在减少对豆粕依赖的同时,不降低畜禽生产性能,是畜牧工作者应该思考和解决的问题。目前关于豆粕减量替代的研究方向主要有三个,分别是:提高豆粕利用率、开发替代饲料以及推广低蛋白日粮技术。

关键词：畜禽生产性能畜牧工作者蛋白质饲料畜牧生产豆粕价格替代饲料副产物人均耕地面积

鸭疫里氏杆菌LC1和CX1株的分离鉴定及致病性分析

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4196-4203页

作者：谢碧林林志敏林彬彬徐以娟林锋强闫露伍慧妮李翠婷周海欧李兆龙莆田市农业科学研究所莆田351100 福建省农业科学研究院畜牧兽医研究所福州350013

旨在对福建莆田某养殖场疑似感染鸭传染性浆膜炎患病番鸭病料进行菌株的分离、纯化、鉴定和致病性分析。采集10日龄患病番鸭的脑、肝组织进行菌株分离纯化、16S rDNA PCR鉴定和血清型鉴定,并检测分离纯化菌株的致病性。结果得到2株11型... 详细信息

旨在对福建莆田某养殖场疑似感染鸭传染性浆膜炎患病番鸭病料进行菌株的分离、纯化、鉴定和致病性分析。采集10日龄患病番鸭的脑、肝组织进行菌株分离纯化、16S rDNA PCR鉴定和血清型鉴定,并检测分离纯化菌株的致病性。结果得到2株11型鸭疫里氏杆菌,分别将其命名为LC1和CX1。对2株分离株进行16S rDNA序列测序,开展遗传进化分析和MLST分型,发现LC1和CX1分离株16S rDNA遗传进化上与鸭疫里氏杆菌福建分离株RAf115和上海分离株Yb2处在同一进化分支上,相似性为99.9%。测定其耐药性发现,分离株对β-内酰胺类、氯霉素类及四环素敏感,对大环内酯类和氨基糖苷类等抗菌素不敏感。进一步检测该分离株对雏番鸭致病性,结果发现两株菌株(1.3×10^(6)CFU·mL^(-1))的致死率为100%,且病死鸭表现典型心包炎、肝周炎、气囊炎和脾肿大的鸭疫里氏杆菌病。病理结果发现,致死鸭脾红白髓界线消失,呈现大量坏死灶。此外,两分离株致死鸭的心肌纤维呈撕裂状病变。综上,本研究分离并鉴定2株11型鸭疫里氏杆菌LC1和CX1,MLST分型分别为ST111、ST114,为鸭疫里氏杆菌病的防控及后续研究提供参考依据。

关键词：鸭疫里氏杆菌 LC1 CX1 遗传进化分析致病性

中药复方制剂对奶牛乳房炎主要病原菌体外抑菌活性及治疗效果评价

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中国奶牛 2024年第8期 23-28页

作者：刘伯承周望平杨俊陈一峰高帅刘海林湖南省畜牧兽医研究所长沙410131

为探究中药复方制剂对奶牛乳房炎病原菌抑菌活性、临床疗效及免疫功能开展了本试验。根据中医辨证理论,将蒲公英、紫花地丁、金银花、丝瓜络等15味中草药自拟4个复方,以临床型奶牛乳房炎样品分离鉴定的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大... 详细信息

为探究中药复方制剂对奶牛乳房炎病原菌抑菌活性、临床疗效及免疫功能开展了本试验。根据中医辨证理论,将蒲公英、紫花地丁、金银花、丝瓜络等15味中草药自拟4个复方,以临床型奶牛乳房炎样品分离鉴定的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌为受试株进行体外抑菌试验。将30头患病奶牛分成3个组,选用抑菌作用较强的复方IV进行临床治疗试验,分别为高剂量组(40mL)、中剂量组(30mL)和低剂量组(20mL),并设健康组作为阴性对照。检测乳体细胞数和乳清ALT、AST、LDH、SA及淋巴细胞刺激指数(SI)、嗜中性粒细胞吞噬力。结果表明,中药复方IV对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌的MIC值为31.25mg/mL,抑菌活性优于复方Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;临床治疗试验显示,高、中、低三个剂量组对临床型奶牛乳房炎有效率分别为93.3%、85.7%、78.6%,治愈率分别为80%、78.6%、71.4%;治疗组给药7d后体细胞数、乳酶及白蛋白含量均极显著低于治疗前(P<0.01),其中高、中剂量组显著低于低剂量组(P<0.05);治疗后各组淋巴细胞刺激指数及嗜中性粒细胞吞噬率均极显著高于治疗前(P<0.01),而高剂量组嗜中性粒细胞吞噬率极显著高于低剂量组(P<0.01),显著高于中剂量组(P<0.05),与健康组比较无显著差异。综合表明,中药复方IV对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌有较强的抑菌活性,临床治疗效果良好;能修复乳腺上皮细胞,降低体细胞数,提高患病奶牛免疫机能。

关键词：中药复方制剂奶牛乳房炎体细胞数临床疗效

北京鸭DHAV-3抗性与易感品系的脂质轮廓鉴定与分析

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2253-2260页

作者：常卓梁素芸王帅钦杨宇泽薛振华赵春颖林逍然路永强侯水生北京市畜牧总站北京100101 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京... 详细信息

【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京鸭和易感北京鸭各6只,采集血液与肝脏组织,进行血液生化指标测定与基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的非靶向肝脏脂质组检测。采用t检验、偏最小二乘分析(PLS-DA)和差异倍数(FC)综合筛选品系间显著差异脂质。【结果】Z7-R系北京鸭血浆总胆固醇、低密度脂蛋白和磷脂含量均显著高于Z7-S系(P三酯(TG),且Z7-R系含量均高于Z7-S系(P<0.05);甘油磷脂类主要为溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)和游离脂肪酸(FFAs),且Z7-R系含量均低于Z7-S系(P<0.05)。共筛选到10个显著差异的脂质显著富集到鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、甘油酯代谢、亚油酸代谢和α-亚麻酸代谢通路中。【结论】脂质组学技术可用于区分北京鸭Z7-R系与Z7-S系,筛选到的10个显著差异脂质物质可作为潜在的DHAV-3抗性与易感性状相关生物标志物。

关键词：北京鸭鸭甲肝病毒基因3型脂质组代谢

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紫花苜蓿MsBBX20基因克隆及耐盐功能分析

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草业学报 2024年第10期33卷 55-73页

作者：周昕越蒋庆雪贾会丽马琳樊璐王学敏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 山西农业大学草业学院山西太原030032

BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物,其品质优良,有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基因... 详细信息

BBX家族转录因子参与光形态建成、成花生理、避荫反应、种子生长发育、激素信号转导及对逆境胁迫的响应等植物重要生长发育过程。紫花苜蓿是耐盐性较强的牧草饲料作物,其品质优良,有“牧草之王”的美誉。发掘并探索紫花苜蓿MsBBX20基因响应非生物胁迫的分子机理,有助于揭示紫花苜蓿抗逆生物学基础,为紫花苜蓿抗逆分子育种提供新的基因资源。通过RT-PCR、3'/5'RACE PCR技术克隆得到MsBBX20基因cDNA序列,生物信息学分析发现其CDS全长834 bp,编码278个氨基酸,该基因编码的蛋白质为锌指结构蛋白家族成员。利用qRTPCR技术分析MsBBX20在紫花苜蓿不同组织和不同非生物胁迫下的表达模式。通过基因枪轰击技术,在洋葱表皮瞬时表达MsBBX20进行亚细胞定位。克隆得到大小为1737 bp的MsBBX20启动子序列并分析了顺式作用元件,该启动子可驱动GUS报告基因在烟草的叶、茎和根中高效表达。将MsBBX20启动子序列与包含GUS基因的pCAMBIA-1301载体连接,瞬时转化烟草并通过组织化学染色对不同组织进行GUS活性分析。构建pCAMBIA3301-MsBBX20植物超表达载体,通过农杆菌介导的方法遗传转化野生型拟南芥,获得超表达MsBBX20的拟南芥株系。用不同浓度盐溶液(150、200和300 mmol·L^(-1)NaCl)处理拟南芥转基因株系并分析其MDA含量和抗氧化酶活性。进化分析表明紫花苜蓿MsBBX20蛋白与红三叶TpBBX20的亲缘关系最近。MsBBX20蛋白定位于细胞核。MsBBX20基因在花中表达量最高,且MsBBX20可以响应干旱、盐、冷、脱落酸、赤霉素、光照等多种非生物胁迫。遗传转化获得MsBBX20过表达拟南芥株系,并选择3个高表达阳性株系进行功能验证。在不同浓度NaCl处理条件下,过量表达MsBBX20的拟南芥株系的丙二醛(MDA)含量显著低于对照,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均显著高于对照。克隆获得紫花苜蓿锌指蛋白转录因子基因MsBBX20,该基因在花中表达量最高,能够响应多种非生物逆境胁迫和外源激素处理,表明MsBBX20可能参与紫花苜蓿的多个逆境响应过程。进一步的研究证明MsBBX20可能通过调节植物的抗氧化酶系统,缓解逆境造成的植物细胞氧化损伤,提高转基因拟南芥对盐胁迫的抗性,进而增强植株的耐盐性。

关键词：紫花苜蓿 MsBBX20 基因克隆耐盐性功能分析

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