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颠茄AbWRKY1基因的克隆与功能研究

农业生物技术学报 2025年

作者：潘航穆德会杨嘉谭艾娟马炳南许国菊杨立航强玮贵州大学生命科学学院/农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室

颠茄(Atropa belladonna)是《中国药典》收录的托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)商业药源植物，WRKY转录因子可能调控TAs的生物合成。本研究对颠茄中WRKY转录因子基因家族进行了组织表达、系统进化和诱导表达分析，筛选出正调控TA... 详细信息

颠茄(Atropa belladonna)是《中国药典》收录的托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)商业药源植物，WRKY转录因子可能调控TAs的生物合成。本研究对颠茄中WRKY转录因子基因家族进行了组织表达、系统进化和诱导表达分析，筛选出正调控TAs生物合成的基因AbWRKY1，并鉴定了其功能。AbWRKY1具有和TAs合成途径基因相同的组织和诱导表达特征，特异性地在颠茄不定根中表达，并且受到钙通道抑制剂维拉帕米(verapamil)的诱导。AbWRKY1和其他物种具有次生代谢调控功能的WRKY聚在同一簇。AbWRKY1蛋白包含326个氨基酸，定位于细胞核。酵母单杂交显示，AbWRKY1能够和莨菪碱6β-羟化酶(hyoscyamine 6β-hydroxylase, H6H)基因启动子上W-box富集区发生相互作用。在颠茄中通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术抑制AbWRKY1表达使东莨菪碱和莨菪碱含量分别降低了44.91%和79.33%。超表达AbWRKY1显著提高了颠茄发根中东莨菪碱、山莨菪碱和莨菪碱3种药用TAs的含量，同时上调了4个TAs合成途径基因腐胺N-甲基转移酶(putrescine Nmethyltransferase, PMT)、托品酮还原酶Ⅰ(tropinone reductaseⅠ, TRⅠ)、莨菪碱脱氢酶(hyoscyamine dehydrogenase, HDH)和H6H的表达量。本研究为阐明TAs生物合成的转录调控和颠茄分子育种提供了理论基础。

关键词： WRKY转录因子颠茄托品烷生物碱(TAs) 病毒诱导的基因沉默(VIGS) 超表达

大鼠血管球囊成形术后血管局部纤连蛋白的改变

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中华心血管病杂志 1998年第4期26卷 296-298页

作者：吴永全汪丽蕙胡大一张晓菲张文军林仲翔北京医科大学第一医院心内科北京医科大学肿瘤所细胞生物室北京红十字朝阳医院心脏中心

目的探讨细胞外基质在血管成形术后再狭窄中的作用。方法在大鼠胸主动脉球囊损伤模型上，应用免疫组化和原位杂交的方法，观察纤连蛋白（Ｆｎ）在损伤后不同时间点和位置的蛋白和ｍＲＮＡ的表达。结果Ｆｎ在球囊损伤后第３天开始表达，... 详细信息

目的探讨细胞外基质在血管成形术后再狭窄中的作用。方法在大鼠胸主动脉球囊损伤模型上，应用免疫组化和原位杂交的方法，观察纤连蛋白（Ｆｎ）在损伤后不同时间点和位置的蛋白和ｍＲＮＡ的表达。结果Ｆｎ在球囊损伤后第３天开始表达，第７天进一步增加，１４天达高峰，３０天仍持续高表达，在新生内膜及近内膜的中层最为明显。结论Ｆｎ在球囊损伤后异常增加，为新生内膜形成的重要原因。

关键词：细胞外基质纤连蛋白类血管成形术

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贮存前白细胞过滤对血小板细胞因子的影响

陕西医学杂志 2005年第3期34卷 303-304页

作者：王明元周晓华狄文英程根林苏州大学生物技术研究所苏州市红十字中心血站苏州215006

目的 :研究机采血小板在贮存过程中细胞因子的变化 ,以及机采血小板同时进行白细胞过滤对贮存后细胞因子的影响。方法 :将 2 0例血小板供者 ,随机分为机采血小板同时过滤白细胞组 ( 994- EF组 )和机采时不过滤白细胞组 ( 994- E组 ) ,贮... 详细信息

目的 :研究机采血小板在贮存过程中细胞因子的变化 ,以及机采血小板同时进行白细胞过滤对贮存后细胞因子的影响。方法 :将 2 0例血小板供者 ,随机分为机采血小板同时过滤白细胞组 ( 994- EF组 )和机采时不过滤白细胞组 ( 994- E组 ) ,贮存 5 d。在 0、3、5 d分别采样检测 IL- 1 β、IL- 6、TNF- α含量和白细胞计数 ,采用配对t检验统计分析。结果 :994- EF组采集的单采血小板残存白细胞量大大低于 994- E组 ( P<0 .0 5 ) ;IL- 1 β、IL- 6、TNF- α细胞因子水平 994- EF组保存期间无明显变化 ,994- E组则随保存时间延长而明显增加。结论 :采集过程中直接进行白细胞去除可有效阻止血小板贮存过程的细胞因子蓄积 ,从而有助于减少非溶血性发热反应的发生 ,同时避免机采后再单独加用白细胞滤器在开放环境下可能引起的细菌污染。

关键词：细胞因子机采血小板白细胞过滤 IL-6 TNF-a 白细胞滤器单采血小板 EF 结论变化

苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达

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生物工程学报 1998年第4期14卷 384-388页

作者：刘敬忠向华胡维朱章菱祝瑾李氢元首都医科大学附属北京红十字朝阳医院中国科学院微生物研究所遗传室

利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术从欧芹总ＲＮＡ分离制备了苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ，重组到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ及ｐＥＴ２３ｂ中，后者转化大肠杆菌ＪＭ１０９ＤＥ３获得ＰＡＬ的高效表达。插入片段两... 详细信息

利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术从欧芹总ＲＮＡ分离制备了苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ，重组到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ及ｐＥＴ２３ｂ中，后者转化大肠杆菌ＪＭ１０９ＤＥ３获得ＰＡＬ的高效表达。插入片段两端共９２０ｂｐ的测序结果与文献符合率为９９７８％。工程菌细胞裂解液用ＳＤＳＰＡＧＥ（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分析显示在分子量７７ｋＤａ处有一条表达很强的蛋白区带，与ＰＡＬ亚基分子量相符，约占菌体总蛋白的１５％。用ＨＰＬＣ法检测到苯丙氨酸被ＰＡＬ脱氨的产物肉桂酸，且该ＰＡＬ酶活力特异性好，适于ＰＫＵ治疗之用。

关键词：基因表达大肠杆菌苯丙酮尿症 PALcDVA

人参皂苷Rb1对NEP基因启动子活性的影响

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山东大学学报（医学版） 2013年第10期51卷 42-48,53页

作者：张晓金孙高英杨玲玲郭元芳郝秀玉郝建荣毕文祥山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所济南250012 北京市红十字血液中心北京100088

目的构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,探查神经内肽酶(NEP)基因启动子中与人参皂苷Rb1影响NEP启动子活性有关的位点。方法用NEP基因5'上游启动区2.4 kb片段和荧光素酶报告基因载体pGL3-basic构建NEP启动子-荧光素酶报告基因质... 详细信息

目的构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,探查神经内肽酶(NEP)基因启动子中与人参皂苷Rb1影响NEP启动子活性有关的位点。方法用NEP基因5'上游启动区2.4 kb片段和荧光素酶报告基因载体pGL3-basic构建NEP启动子-荧光素酶报告基因质粒pGL3-nep2.4;用Erase-a-Base System对pGL3-nep2.4质粒2.4 kb DNA插入片段5'端进行缺失,构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒;用Rb1处理NEP启动子缺失体转染的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,检测双荧光素酶活性,观察Rb1对NEP启动子活性的影响。结果成功构建了含NEP启动子DNA序列的重组质粒pGL3-nep2.4。荧光素酶活性检测显示,转染pGL3-nep2.4质粒的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性是转染pGL3-basic的13.1倍(P0.05),RegionⅣ缺失质粒pGL3-226转染细胞荧光素酶活性也与对照组无明显差异(P>0.05),而含RegionⅣ质粒pGL3-244转染细胞荧光素酶活性则是对照组的1.61倍(P<0.01)。结论 NEP基因5'上游2.4 kb DNA片段有较强的启动子活性,Rb1能明显增加其活性。NEP基因2.4 kb DNA片段有2个正调控区(RegionⅠ和RegionⅣ)和2个负调控区(RegionⅡ和RegionⅢ),Rb1通过RegionⅣ发挥正调控作用。

关键词：人参皂苷Rb1 神经内肽酶启动子

安徽省山丘型血吸虫病流行区野鼠血吸虫感染状况调查

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医学动物防制 2025年第1期 1-4+10页

作者：汪峰峰章乐生尹晓梅朱海朱磊黄殷殷慈胜利陈雪峰汪天平安徽省血吸虫病防治研究所寄生虫病媒介生物控制室池州市贵池区血吸虫病防治站石台县疾病预防控制中心

目的了解安徽省2个山丘型血吸虫病流行区野鼠的血吸虫感染状况，为血吸虫病防治策略的制定提供依据。方法选择安徽省池州市2个山丘型血吸虫病流行区（贵池区和石台县）,每个县（区）分别选择1个有感染性钉螺分布的村为观察村，未发现... 详细信息

目的了解安徽省2个山丘型血吸虫病流行区野鼠的血吸虫感染状况，为血吸虫病防治策略的制定提供依据。方法选择安徽省池州市2个山丘型血吸虫病流行区（贵池区和石台县）,每个县（区）分别选择1个有感染性钉螺分布的村为观察村，未发现感染性钉螺的村为对照村。采取夹夜法捕获野鼠，计算鼠密度。采用肝脏组织压片镜检、肠系膜组织镜检和改良加藤厚涂片法（Kato-katz法）检测野鼠血吸虫的感染情况，并利用χ2检验比较不同鼠种日本血吸虫的感染率差异。结果贵池区观察村（栗坑村）,共捕获黑线姬鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、褐家鼠和社鼠5种野鼠，鼠密度为4.44%,日本血吸虫感染率为39.56%,不同种类野鼠日本血吸虫的感染率差异有统计学意义（χ2=7.584,P=0.023）;对照村（龙池村）的鼠密度为2.24%,未发现野鼠日本血吸虫感染。石台县观察村（东庄村）,共捕获黑线姬鼠、黄毛鼠、褐家鼠和社鼠4种野鼠，鼠密度为11.73%,日本血吸虫感染率为46.90%,不同种类野鼠日本血吸虫的感染率差异有统计学意义（χ2=10.637,P=0.014）;对照村（七都村）鼠密度为8.78%,未发现野鼠感染日本血吸虫。结论安徽部分山丘地区野鼠种类多、密度高、血吸虫感染率高，其可能是血吸虫病传播的潜在传染源，应加强监测。

关键词：安徽省山丘型血吸虫病流行区野鼠血吸虫病感染率

检测体内异种II型胶原异体移植引起的细胞毒反应

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生物医学工程学杂志 2007年第1期24卷 162-165页

作者：沈雁唐毅钟灿灿梁佩红黄雪芳邹海燕陈鸿辉梁伟国广州市红十字会医院创伤外科研究所广州510220

检测用猪II型胶原免疫新西兰大白兔的异种异体细胞免疫反应。用II型胶原免疫新西兰大白兔60 d,定期抽取血浆检测抗II型胶原抗体;第60 d取兔的外周血淋巴细胞、兔脾细胞、淋巴结分别分离淋巴细胞,进行体外二次II型胶原刺激,检测由此引起... 详细信息

检测用猪II型胶原免疫新西兰大白兔的异种异体细胞免疫反应。用II型胶原免疫新西兰大白兔60 d,定期抽取血浆检测抗II型胶原抗体;第60 d取兔的外周血淋巴细胞、兔脾细胞、淋巴结分别分离淋巴细胞,进行体外二次II型胶原刺激,检测由此引起的反应性的细胞增殖规律。实验分为二组,第一组加入不同浓度植物血凝素(PHA)作阳性对照,并测定非特异性免疫;第二组加入不同浓度II型胶原,检测特异性免疫。正常兔的淋巴细胞在PHA剌激下发生增殖,但对II型胶原的第一次剌激不发生增殖,而免疫兔对PHA和II型胶原的剌激均能发生显著的增殖。表明异种II型胶原在一定浓度下,可以引起免疫兔的抗II型胶原抗体的升高,并可引起兔脾、外周血淋巴细胞增殖,异种II型胶原能在体内引起细胞免疫反应。

关键词： Ⅱ型胶原细胞免疫细胞毒

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乳酸乳球菌基因表达载体系统的研究

微生物学通报 1998年第4期25卷 230-232页

作者：向华谭华荣刘敬忠中国科学院微生物研究所北京100080 北京红十字朝阳医院基础医学研究中心北京100020

乳酸乳球菌(IaCtOCOOCCClaCrts)是乳球菌属(IastOCOCCCS)最重要和最典型的一个种,该菌为兼性厌氧的革兰氏阳性菌,是乳品工业发酵的重要菌类,是在食品及医药工程领域具有重要应用前景的食品级微生物[‘]。乳酸乳球菌中存在大量的染色体... 详细信息

乳酸乳球菌(IaCtOCOOCCClaCrts)是乳球菌属(IastOCOCCCS)最重要和最典型的一个种,该菌为兼性厌氧的革兰氏阳性菌,是乳品工业发酵的重要菌类,是在食品及医药工程领域具有重要应用前景的食品级微生物[‘]。乳酸乳球菌中存在大量的染色体外因子(如质粒和噬菌体),为其分子生物学研究和基因载体系统的发展提供了极好的材料。在近十多年中,随着乳酸乳球菌内源性质粒的去除和电穿孔转基因技术的建立以及乳酸乳球菌各类表达信号的分离和克隆,已建立和发展了一系列具有不同用途的乳酸乳球菌载体和受体系统。这些载体包括基本的…

关键词：乳酸乳球菌基因表达载体系统

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克服异种移植免疫排斥的研究进展

中国修复重建外科杂志 2009年第1期23卷 106-110页

作者：王东梅宋长兴张志欣北京结核胸部肿瘤研究所北京101149 北京市红十字血液中心

目的综述克服异种移植免疫排斥的方法。方法广泛查阅近年国内外克服异种移植免疫排斥的相关文献,并进行总结与分析。结果目前对异种移植免疫排斥机制和分子生物学技术的研究,为解决异种移植免疫排斥提供了新的思路。结论异种器官移植应... 详细信息

目的综述克服异种移植免疫排斥的方法。方法广泛查阅近年国内外克服异种移植免疫排斥的相关文献,并进行总结与分析。结果目前对异种移植免疫排斥机制和分子生物学技术的研究,为解决异种移植免疫排斥提供了新的思路。结论异种器官移植应用于临床仅是时间问题。

关键词：异种移植移植免疫免疫排斥