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牛呼肠孤病毒3型σ1蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

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中国动物传染病学报 2024年

作者：汪杰许鹏举王杨林罗宇航黄艳华周雨露覃一峰黄伟坚广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室

为了制备牛呼肠孤病毒（MRV）结构蛋白σ1的多克隆抗体及建立血清学检测手段，本研究将σ1基因序列克隆至pET-32a(+)。获得重组质粒pET-32a-MRV3-σ1，并转化至BL21感受态细胞进行诱导表达与纯化，将纯化好的重组蛋白免疫于Balb/c小鼠... 详细信息

为了制备牛呼肠孤病毒（MRV）结构蛋白σ1的多克隆抗体及建立血清学检测手段，本研究将σ1基因序列克隆至pET-32a(+)。获得重组质粒pET-32a-MRV3-σ1，并转化至BL21感受态细胞进行诱导表达与纯化，将纯化好的重组蛋白免疫于Balb/c小鼠制备多克隆抗体，同时以纯化后的σ1重组蛋白作为诊断抗原，建立检测MRV3的间接ELISA方法。结果显示，σ1蛋白的分子质量约为49.8 kDa，以包涵体形式表达，可应用于Western blot法及IFA检测，成功制备出MRV3-σ1多克隆抗体。建立的ELISA检测方法的批间及批内变异系数均小于10%；对MRV3阳性血清具有特异性，与牛冠状病毒、牛肠道病毒等阳性血清无交叉反应。表明该方法敏感性高、特异性强，为MRV3的临床检测和防控提供了技术支持。

关键词：牛呼肠孤病毒多克隆抗体蛋白间接ELISA

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 178-182页

作者：边金妮黄诗婷许佳乐米雪王奕斐杜琛陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室南宁530005

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆... 详细信息

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

关键词：猪肠病毒G型部分VP1蛋白原核表达多克隆抗体

H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR检测方法的建立及应用

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 135-141页

作者：徐毅余良政林霜任同伟王豪曾昊郭嘉宁郭金凡黄崇强欧阳康黄伟坚韦祖樟陈樱广西大学动物传染病与分子免疫学实验室广西大学动物科学技术学院南宁530004

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列,分别设计了4对特异性扩增引物,在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下,分别对其特异性和敏感性进行验证,建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法,并对155份临床样品进行了检测。结果显示,该检测方法特异性好、灵敏度高,对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10^(0) copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现,检测结果与多重PCR检测结果一致,证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。

关键词：猪流感病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒多重PCR

庚酰化乙二醇壳聚糖温敏性水凝胶的制备及其药物缓释

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复合材料学报 2024年第5期41卷 2674-2682页

作者：韩晓杰李征征天津科技大学化工与材料学院天津300457 沂水县第四中学临沂276405 复旦大学聚合物分子工程国家重点实验室上海200433

为了制备一种物理交联的温敏性水凝胶,本文选择水溶性乙二醇壳聚糖(GC)作为基体,通过庚酸酐与GC分子链上的氨基进行酰化反应实现改性,合成了具有不同庚酰度(DS)的庚酰化乙二醇壳聚糖(HAGC)。庚酸酐与GC分子链上氨基的进料摩尔比在0.2~0... 详细信息

为了制备一种物理交联的温敏性水凝胶,本文选择水溶性乙二醇壳聚糖(GC)作为基体,通过庚酸酐与GC分子链上的氨基进行酰化反应实现改性,合成了具有不同庚酰度(DS)的庚酰化乙二醇壳聚糖(HAGC)。庚酸酐与GC分子链上氨基的进料摩尔比在0.2~0.25之间,DS介于26.4%~31.5%。通过在GC骨架上引入疏水性庚酰基团,提高GC在有机溶剂中的溶解度和体外生物降解性,而且还引入了温敏性溶胶-凝胶转变性质。HAGC通过分子间相互作用(氢键和亲疏水相互作用)发生物理交联,响应环境温度变化而发生溶胶-凝胶相变,通过改变HAGC的DS和溶液浓度,可有效调节HAGC水凝胶的溶胶-凝胶转变温度处于25~37℃之间。HAGC水凝胶具有三维多孔结构,随着DS增加,HAGC水凝胶的交联密度增大、溶胀比降低、药物释放速率减慢。HAGC水凝胶对吉西他滨具有缓释作用,药物释放时间可达5天,药物释放率达到70%~91%。HAGC水凝胶以其优良的温敏性能,在药物注射载体领域具有重要的应用价值。

关键词：乙二醇壳聚糖庚酰化温敏性水凝胶溶胶-凝胶转变药物缓释

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载脂蛋白E在恶性肿瘤中的作用机制

生物化学与生物物理进展 2024年第7期51卷 1551-1565页

作者：高博文王丽徐泱复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科癌变与侵袭原理教育部重点实验室上海200032 复旦大学生物医学研究院上海200032

载脂蛋白E(apoE)是脂质代谢中的重要分子,通过调节细胞增殖、能量代谢、氧化应激、机体固有免疫等方式,在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,并影响患者的治疗效果,已成为潜在的肿瘤标志物和有潜力的治疗靶点,对于深入理解多种恶性... 详细信息

载脂蛋白E(apoE)是脂质代谢中的重要分子,通过调节细胞增殖、能量代谢、氧化应激、机体固有免疫等方式,在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用,并影响患者的治疗效果,已成为潜在的肿瘤标志物和有潜力的治疗靶点,对于深入理解多种恶性肿瘤的病因学,推动恶性肿瘤的预防及开发新的治疗策略具有重要意义。本文对apoE的生物化学与分子生物学属性进行介绍,并梳理apoE在各个癌种的发生发展中发挥的作用,总结apoE与肿瘤的各种生物学特性之间的关系,探讨其作为肿瘤标志物与治疗靶点的潜力和应用价值。

关键词：载脂蛋白E 恶性肿瘤脂质代谢基因多态性肿瘤免疫

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利用5′帽子亲和层析纯化IVT mRNA

科学通报 2024年

作者：杜彬荷林金钟复旦大学mRNA药物研发中心复旦大学遗传工程国家重点实验室

mRNA作为指导蛋白质合成的活性分子,在翻译基础研究和mRNA药物研发中具有广阔的研究价值和应用前景.真核生物细胞质mRNA通常具有区别于其他类型RNA分子的5′端帽结构,在mRNA核转运、抵御核酸外切酶和介导翻译起始过程中发挥重要作用.无... 详细信息

mRNA作为指导蛋白质合成的活性分子,在翻译基础研究和mRNA药物研发中具有广阔的研究价值和应用前景.真核生物细胞质mRNA通常具有区别于其他类型RNA分子的5′端帽结构,在mRNA核转运、抵御核酸外切酶和介导翻译起始过程中发挥重要作用.无帽mRNA分子在机体内引起严重的免疫反应,因此mRNA的加帽率是评判其成药性的核心指标.虽然加帽m RNA可以通过基于T7 RNAP的共转录加帽技术和基于牛痘加帽酶的酶法加帽技术获得,但仍缺乏精确分选加帽m RNA的底盘技术.针对这一现象,本研究选取了覆盖真核生物、古菌、病毒在内的18种帽结合蛋白进行表达纯化测试,并表征了热稳定性、帽结构亲和性等参数.从中筛选获得3种代表性帽结合蛋白进行加帽RNA的亲和层析测试,实验结果表明, Hs IF4E K119A和Ct IF4E可以有效地富集加帽RNA,并且可以通过改变盐浓度的方法实现加帽RNA的洗脱.本研究开发的基于帽结构的亲和层析技术具有成本低、效率高、易于放大的特征,有望为分选加帽m RNA提供新的解决方案.

关键词：帽结构帽结合蛋白亲和层析 mRNA纯化 mRNA药物

结核病控制的新挑战:出人意料的气溶胶检测新发现

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中国防痨杂志 2024年第7期46卷 739-742页

作者：李蒙高谦复旦大学基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室/上海市重大传染病和生物安全研究院上海200032

气溶胶是结核分枝杆菌传播的重要媒介,存在于气溶胶和痰液中的结核分枝杆菌的特性是否相同?近期在美国科学院院刊上发表了一篇气溶胶中结核分枝杆菌特征的论文,其研究结果颠覆了已有的认知。笔者将对此研究进行介绍,并提出基于此研究的... 详细信息

气溶胶是结核分枝杆菌传播的重要媒介,存在于气溶胶和痰液中的结核分枝杆菌的特性是否相同?近期在美国科学院院刊上发表了一篇气溶胶中结核分枝杆菌特征的论文,其研究结果颠覆了已有的认知。笔者将对此研究进行介绍,并提出基于此研究的一些思考。

关键词：结核传染病控制气溶胶

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N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶的功能与机制

生物化学与生物物理进展 2024年第5期51卷 985-999页

作者：芦鑫荣童永亮孔维溧邹琳沈旦枫吕绍衔刘瑞杰张绍兴张瑜芯侯琳琳孙桂芹陈力复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生健康委员会重点实验室上海200032 浙江中医药大学医学技术与信息工程学院杭州310053 青岛农业大学动物医学院青岛266106

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖... 详细信息

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)之间的β-14糖苷键。其水解产物是寡糖链和一个GlcNAc,或带有一个GlcNAc的糖肽或糖蛋白。本文对ENGase的发现、分布、蛋白质结构、酶学反应及生物学功能进行阐述,为ENGase的生物学研究提供思路,为糖生物学与糖组学的应用研究奠定基础。

关键词： N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶 N-糖基化游离寡糖糖链编辑糖生物学

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少电子离子束缚态电子g因子精密测量

物理学报 2024年

作者：屠秉晟复旦大学现代物理研究所，核物理与离子束应用教育部重点实验室上海EBIT实验室

少电子离子束缚态电子g因子的精密测量是借助原子分子体系研究束缚态QED理论的有效途径。特别是在高电荷态重核体系中，原子核与内壳层电子之间极强的电磁相互作用为研究极端电磁场环境下的QED效应提供了独一无二的条件。通过精确测量... 详细信息

少电子离子束缚态电子g因子的精密测量是借助原子分子体系研究束缚态QED理论的有效途径。特别是在高电荷态重核体系中，原子核与内壳层电子之间极强的电磁相互作用为研究极端电磁场环境下的QED效应提供了独一无二的条件。通过精确测量束缚态电子g因子，还可以分析核效应、测定核结构参数、确定基本物理常数等。少电子离子束缚态电子g因子的研究已经成为精密谱学方向的前沿课题。潘宁离子阱（借助稳态电磁场囚禁离子的系统）是进行g因子测量的有效实验装置之一。本综述将对基于潘宁离子阱开展少电子离子束缚态电子g因子的实验研究进行全面回顾，介绍基本实验原理与测量方法，重点论述该领域在近几年中的重要实验成果，并对未来发展做简要展望。

关键词：少电子离子 g因子潘宁阱精密测量