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荔枝花蕊蛋白双向电泳体系的建立与优化

热带作物学报 2012年第10期33卷 1812-1818页

作者：黄榕辉陈品品王晓艳盖永红陈伟王平福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室福建福州350002 福建农林大学生命科学学院福建福州350002 福建农林大学园艺学院福建福州350002

以荔枝品种‘元红’处于花性分化时期的花蕊为材料，对蛋白提取方法、蛋白样品上样量、凝胶浓度、平衡时间及染色方法等步骤进行优化。采用酚抽法提取蛋白质，用24cm、pH4-7的IPG胶条，1．2mg上样量，12％T凝胶，胶条平衡20min，用考马... 详细信息

以荔枝品种‘元红’处于花性分化时期的花蕊为材料，对蛋白提取方法、蛋白样品上样量、凝胶浓度、平衡时间及染色方法等步骤进行优化。采用酚抽法提取蛋白质，用24cm、pH4-7的IPG胶条，1．2mg上样量，12％T凝胶，胶条平衡20min，用考马斯亮蓝法染色，2-DE图谱经ImageMaster2DPlatinum软件分析，可以检测到至少1200个蛋白点。荔枝雌花双向电泳体系的建立，为开展荔枝花性分化蛋白质组学方面的研究奠定了基础．

关键词：荔枝花蕊蛋白质双向电泳

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细菌纤维素高产菌株的筛选及鉴定

食品科学 2010年第5期31卷 211-214页

作者：曹海鹏袁帅赵昆张霞胡承四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室四川成都610064

以残次的水果为原料,经静置富集培养、多次筛选纯化等步骤,分离出一株细菌纤维素产量较高且遗传性能稳定的菌株G-29。根据第二版《伯杰系统细菌学手册》和第九版《伯杰氏细菌鉴定手册》,对该菌株进行形态、生理生化特征和16SrDNA分子序... 详细信息

以残次的水果为原料,经静置富集培养、多次筛选纯化等步骤,分离出一株细菌纤维素产量较高且遗传性能稳定的菌株G-29。根据第二版《伯杰系统细菌学手册》和第九版《伯杰氏细菌鉴定手册》,对该菌株进行形态、生理生化特征和16SrDNA分子序列分析。初步鉴定该菌为葡糖醋杆菌属(Gluconacetobactersp.)一个新菌种或者中间葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius)的一个亚种。菌株G-29已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCNO:M208234。

关键词：细菌纤维素葡糖醋杆菌生理生化特征鉴定

白菜NAC转录因子BrcCUC3基因克隆及其对叶缘和主枝发育的影响

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农业生物技术学报 2012年第4期20卷 337-346页

作者：惠麦侠张鲁刚余祥王晗白金娟何玉科西北农林科技大学园艺学院旱区作物生物学国家重点实验室中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室

植物NAC(矮牵牛NAM基因、拟南芥ATAF1/2和CUC2基因)转录因子CUP-SHAPED COTYLEDON(CUC)亚家族成员在植物茎尖分生组织形态建成、器官边界分离、叶发育方面发挥着重要作用。采用基因同源克隆的方法获得了白菜(Brassica ***)基因BrcCUC3,... 详细信息

植物NAC(矮牵牛NAM基因、拟南芥ATAF1/2和CUC2基因)转录因子CUP-SHAPED COTYLEDON(CUC)亚家族成员在植物茎尖分生组织形态建成、器官边界分离、叶发育方面发挥着重要作用。采用基因同源克隆的方法获得了白菜(Brassica ***)基因BrcCUC3,并转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)做了初步的功能鉴定。研究结果表明,白菜BrcCUC3的编码区长1008bp,编码335个氨基酸,基因结构分析显示BrcCUC3包含3个外显子、2个内含子,内含子剪接位点符合GT-AG规则。氨基酸序列分析表明,BrcCUC3蛋白具有典型的植物NAC domain结构域。BrcCUC3编码区氨基酸序列与其它植物的CUC3蛋白有很高的一致性,尤其与甘蓝(Brasica oleracea)、萝卜(Raphanus sativus)和拟南芥CUC3蛋白高度一致,一致性分别达到98%,97%和83%。在不同物种CUC3的系统进化树上,BrcCUC3归属于双子叶植物分支的十字花科亚组,由不同植物20条CUC3编码区氨基酸序列所建立的系统进化树与真实的植物进化基本一致。荧光定量PCR分析结果表明,BrcCUC3在白菜叶深裂株系叶片中的表达量比叶全缘叶片中的高。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)浸花法转化拟南芥,获得了转BrcCUC3基因的拟南芥植株。过表达BrcCUC3的转基因拟南芥呈现叶缘出现裂刻、主枝增加的新表型。初步说明该基因参与叶形和主枝的发育调控,为揭示白菜叶形发育分子调控机制和通过基因工程创制植物叶形新种质提供分子依据。

关键词：白菜 BrcCUC3基因 NAC-domain 过表达叶发育

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江苏省植物细胞遗传学研究回顾与展望

遗传 2021年第5期43卷 397-424页

作者：王海燕龚志云蒋甲福周宝良娄群峰曹清河席梦利陈佩度顾铭洪张天真陈发棣陈劲枫李宗芸王秀娥南京农业大学农学院作物遗传与种质创新国家重点实验室/JCIC-MCP南京210095 扬州大学农学院江苏省作物遗传生理重点实验室/植物功能基因组学教育部重点实验室/江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室扬州225009 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所徐州221131 南京林业大学林学院南京210037 江苏师范大学生命科学学院徐州221116 浙江大学农业与生物技术学院杭州310058

20世纪初“遗传的染色体学说”的提出和证明标志着细胞遗传学交叉学科建立,伴随相关学科的发展,20世纪60年代末期细胞遗传学又与分子遗传学相结合,建立发展了分子细胞遗传学交叉学科。分子细胞遗传学以DNA分子原位杂交技术为核心,不断... 详细信息

20世纪初“遗传的染色体学说”的提出和证明标志着细胞遗传学交叉学科建立,伴随相关学科的发展,20世纪60年代末期细胞遗传学又与分子遗传学相结合,建立发展了分子细胞遗传学交叉学科。分子细胞遗传学以DNA分子原位杂交技术为核心,不断拓展应用领域,为生命科学研究提供了直观、高效的技术手段。原位杂交技术与基因组、细胞生物学等技术结合,被广泛应用于人类、动物、植物的起源、进化、驯化等基础研究和远缘杂交、染色体工程等应用研究。通过形象地展示DNA、RNA、蛋白质在细胞中的实际位置,揭示DNA序列之间的实际位置和顺序、亲缘物种间的进化关系和结构重排、基因组拼接序列的质量、转录水平RNA和翻译水平蛋白质的位置和数量变化等。江苏省遗传学会会员单位南京农业大学、扬州大学、南京林业大学、江苏师范大学、徐淮地区农科院等自20世纪中期开展细胞遗传学理论技术研究,伴随学科发展不断创新,建立了较完善的分子细胞遗传技术体系,并成功应用于开展植物系统进化、远缘杂交、染色体工程、基因组学等研究,取得了一批研究成果。本文将主要综述江苏省在该领域取得的重要进展,并展望未来发展方向。

关键词：江苏省遗传学会分子细胞遗传学 DNA分子原位杂交染色体工程基因组学

高特异性CRISPR/Cas系统及其Acrs

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生命的化学 2020年第10期40卷 1760-1770页

作者：王钱繁杨海涛王泽方陈成天津大学生命科学学院生物学系天津300072 上海科技大学生命科学与技术学院免疫化学研究所上海201210 天津大学生命科学学院分子生物学与结构生物学实验室天津300072

CRISPR/Cas系统是在细菌和古生菌中发现的一种适应性免疫系统,可以在序列特异性RNA的引导下利用其核酸酶活性效应蛋白或复合物靶向入侵的移动遗传元件(MGEs),从而抵御噬菌体的侵袭。目前,Ⅱ-A型CRISPR/Cas系统作为一种有效的基因编辑手... 详细信息

CRISPR/Cas系统是在细菌和古生菌中发现的一种适应性免疫系统,可以在序列特异性RNA的引导下利用其核酸酶活性效应蛋白或复合物靶向入侵的移动遗传元件(MGEs),从而抵御噬菌体的侵袭。目前,Ⅱ-A型CRISPR/Cas系统作为一种有效的基因编辑手段已被广泛应用。但研究人员发现,与Ⅱ-C型CRISPR/Cas9系统相比,Ⅱ-A型系统具有高特异性,并且其效应蛋白具有较小的相对分子质量。这一特性使其在进行体内基因编辑时更适于通过重组腺病毒相关载体递送。近年来,在噬菌体体内发现了多种可以抑制CRISPR/Cas系统的抗CRISPR蛋白(Acrs)。这为调节或抑制CRISPR/Cas系统效应蛋白的活性,降低基因编辑中的脱靶效应提供了新的策略。本文综述了Ⅱ-C型CRISPR/Cas系统及其抑制蛋白的结构和机制的研究进展,并简要概述其余已报道Acrs蛋白的作用机制,以期为Ⅱ-C型CRISPR/Cas系统及在基因编辑甚至基因治疗方面的研究和应用提供理论支持和参考。

关键词： CRISPR/Cas系统抗CRISPR蛋白基因编辑

甜菜谷胱甘肽S-转移酶基因家族鉴定及在镉胁迫下的响应分析

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植物研究 2022年第5期42卷 790-801页

作者：钟鑫爱孟诗琪周婉婷姚琦张琼兴旺刘大丽国家甜菜种质中期库黑龙江大学哈尔滨150080 黑龙江大学省高校甜菜遗传育种重点实验室/现代农业与生态环境学院哈尔滨150080 黑龙江大学省高校生化与分子生物学重点实验室/生命科学学院哈尔滨150080

为了研究谷胱甘肽S-转移酶基因(GST)家族在甜菜(Beta vulgaris)中对其生长发育及受到非生物胁迫时的潜在功能,以甜菜BvGSTs家族为研究对象,对其理化性质、进化关系、顺式作用元件、染色体定位及在镉胁迫下的转录表达特性进行深入地分析... 详细信息

为了研究谷胱甘肽S-转移酶基因(GST)家族在甜菜(Beta vulgaris)中对其生长发育及受到非生物胁迫时的潜在功能,以甜菜BvGSTs家族为研究对象,对其理化性质、进化关系、顺式作用元件、染色体定位及在镉胁迫下的转录表达特性进行深入地分析。结果表明:甜菜基因组中共有52个BvGSTs基因家族成员,分布于7个亚家族中;它们的相对分子质量在17~28 kDa,理论等电点pI在5.16~6.77,大部分成员定位于细胞质。BvGSTs结构中共发现9个motif,其中motif 8为Phi亚家族所特有。30个BvGSTs分别位于8条甜菜染色体,存在4处串联重复。根据顺式作用元件分析,甜菜BvGSTs可参与多种生物与非生物胁迫响应。转录组学分析发现全部52个BvGSTs均不同程度的参与到甜菜对镉胁迫的应答过程。其中在地下部,大多数Tau亚家族成员的表达受到镉胁迫的正向调控;在地上部,Phi亚家族受镉胁迫的显著诱导,Tau亚家族的表达被抑制。qRT-PCR分析表明,4个差异表达显著的BvGSTs的转录受到了镉胁迫调控,并与转录组测序结果相符。上述结果为进一步对甜菜谷胱甘肽S-转移酶在镉胁迫过程中的生物学功能的研究奠定基础。

关键词：甜菜全基因组鉴定谷胱甘肽S-转移酶镉胁迫

肠道病毒71型与脊髓灰质炎病毒抗体交叉反应性研究

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现代免疫学 2012年第3期32卷 187-192页

作者：潘青松杨春富曾玫方钟金明飞徐斌冷启彬张红锋华东师范大学生命科学学院上海200241 中科院上海巴斯德研究所上海200025 复旦大学附属儿科医院上海201102 复旦大学附属华山医院上海200040

通过临床血清样本研究及实验动物验证,探讨肠道病毒71型(EV71)与脊髓灰质炎病毒(PV)之间的抗体交叉反应性。以酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测健康儿童血清中IgG型抗体与EV71及PV的反应性;用原核表达与亲和纯化等方法分别获得EV71和PV... 详细信息

通过临床血清样本研究及实验动物验证,探讨肠道病毒71型(EV71)与脊髓灰质炎病毒(PV)之间的抗体交叉反应性。以酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测健康儿童血清中IgG型抗体与EV71及PV的反应性;用原核表达与亲和纯化等方法分别获得EV71和PV的衣壳蛋白VP1及非结构蛋白3C;将PV-VP1、EV71-VP1、EV71灭活疫苗及PV灭活疫苗(IPV)分别经皮下免疫BALB/c小鼠制得免疫血清,以蛋白免疫印迹实验分别研究PV-VP1或EV71-VP1小鼠阳性血清与EV71-VP1和PV-VP1的反应情况,进一步以竞争ELISA试验分别研究EV71-VP1对PV-VP1与其特异性免疫血清特异结合的影响。微量中和试验研究PV阳性抗血清对EV71的体外中和效应。结果:已接种PV疫苗但未曾感染EV71的健康儿童的IgG抗体与EV71有较高的反应性,且针对EV71及PV两种病毒的IgG抗体的相对含量成正相关;蛋白免疫印迹实验显示PV-VP1与EV71-VP1免疫的小鼠抗血清中存在交叉抗体,竞争ELISA试验进一步表明EV71-VP1蛋白能明显抑制PV-VP1与其特异性免疫血清抗体的结合,反之亦然。但中和实验揭示PV阳性血清在体外不能中和EV71病毒。PV之间存在大量交叉反应性抗体,但PV免疫后产生的与EV71交叉反应的抗体是非中和性质抗体。非中和抗体可能通过免疫调理效应在EV71病毒的致病的过程中发挥重要作用。

关键词：肠道病毒71型脊髓灰质炎病毒交叉反应性抗体

籼稻不同定位群体抽穗期和株高的QTL比较研究

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中国农业科学 2011年第15期44卷 3069-3077页

作者：张振华郭梁朱玉君樊叶杨庄杰云中国水稻研究所水稻生物学国家重点实验室/国家水稻改良中心杭州师范大学生命与环境科学学院

【目的】通过分析控制不同定位群体水稻抽穗期、株高和产量性状表现的QTL,挖掘同时控制株高与产量性状且对抽穗期影响小的QTL区间,为水稻高产育种提供参考。【方法】以杂交稻恢复系密阳46作为共同父本,分别与保持系协青早B和珍汕97B配组... 详细信息

【目的】通过分析控制不同定位群体水稻抽穗期、株高和产量性状表现的QTL,挖掘同时控制株高与产量性状且对抽穗期影响小的QTL区间,为水稻高产育种提供参考。【方法】以杂交稻恢复系密阳46作为共同父本,分别与保持系协青早B和珍汕97B配组,构建2个籼籼交重组自交系群体,在同一地点多年种植,对不同群体抽穗期和株高相关的QTL定位结果进行比较。【结果】共定位到12个抽穗期QTL和11个株高QTL,其中2个抽穗期QTL在2个群体中都能检测到,分别位于第6染色体短臂和第7染色体长臂近着丝粒区域。通过与前期相同群体产量性状QTL定位结果比较,发现6个多效性区间,其中,1个同时控制抽穗期、株高和产量性状,3个同时控制抽穗期和产量性状,2个同时控制株高和产量性状。【结论】相对于共同的父本密阳46,水稻矮败型保持系协青早B与野败型保持系珍汕97B对抽穗期和株高的遗传控制存在较大差异,并以株高更为明显。第2染色体长臂RM6—RM240的QTL作用较稳定,对株高和产量性状作用方向一致,且对抽穗期无显著影响,对于通过"矮中求高"实现水稻高产育种具有重要的应用价值。

关键词：水稻数量性状座位(QTL) 抽穗期株高产量性状

镜湖花臂尾轮虫夏季种群内不同克隆的生活史特征

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水生生物学报 2007年第5期31卷 611-617页

作者：董丽丽席贻龙张雷安徽师范大学生命科学学院重要生物资源的保护和利用研究安徽省重点实验室安徽省高校生物环境与生态安全省级重点实验室

应用生命表统计学等方法对镜湖花臂尾轮虫夏季种群内4个在生化遗传特征上互不相同的克隆(克隆A、B、C和D)在4种温度(15℃、20℃、25℃和30℃)下的生活史特征及其对升高的温度的反应进行了比较研究。结果表明,温度对花臂尾轮虫存活率和... 详细信息

应用生命表统计学等方法对镜湖花臂尾轮虫夏季种群内4个在生化遗传特征上互不相同的克隆(克隆A、B、C和D)在4种温度(15℃、20℃、25℃和30℃)下的生活史特征及其对升高的温度的反应进行了比较研究。结果表明,温度对花臂尾轮虫存活率和繁殖率的影响在不同克隆间存在着差异。20℃和25℃下,4个克隆轮虫的世代时间和净生殖率均分别无显著的差异;20℃、25℃和30℃下,4个克隆轮虫的平均寿命和出生时的生命期望亦然。其余各温度下,4个克隆间轮虫的其他生命表参数均有显著的差异。20℃、25℃和30℃下,4个克隆轮虫所产后代中的混交雌体百分率间均具有显著的差异,且克隆C轮虫所产后代中的混交雌体百分率最高。15℃下,克隆D轮虫的个体适合度最高;25℃下,克隆A和B轮虫的个体适合度较高。4个克隆轮虫的生活史特征对升高的温度的反应也存在着差异。忽略温度的影响时,4克隆间,克隆D轮虫的世代时间、平均寿命和出生时的生命期望最短,净生殖率、种群内禀增长率和个体适合度均最低;克隆C轮虫所产后代中的混交雌体百分率最高。30℃下,4个克隆轮虫的种群内禀增长率存在着差异可能是不同基因型的轮虫克隆群在种群内所占的比例不同的重要原因;而它们的个体适合度相似则可能是不同基因型的轮虫克隆群在夏季镜湖中共存的主要原因之一。

关键词：萼花臂尾轮虫夏季种群克隆生活史特征温度