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腹腔镜中低位直肠癌根治术中盆腔自主神经监测(IMPAN)的价值

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复旦学报（医学版） 2020年第5期47卷 669-678页

作者：金旦娟李震洋顾晓冬郑创周珉玮陈宗祐项建斌复旦大学附属华山医院普外科上海200040

目的通过应用术中盆腔自主神经监测(intraoperative monitoring of pelvic autonomic nerves,IMPAN)对中低位直肠癌腹腔镜手术中盆腔自主神经丛(pelvic autonomic nerve plexus,PANP)进行探查和保护,探讨术中盆腔神经保护的方法及神经... 详细信息

目的通过应用术中盆腔自主神经监测(intraoperative monitoring of pelvic autonomic nerves,IMPAN)对中低位直肠癌腹腔镜手术中盆腔自主神经丛(pelvic autonomic nerve plexus,PANP)进行探查和保护,探讨术中盆腔神经保护的方法及神经监测的临床疗效。方法回顾性分析2012年1月至2018年12月在复旦大学附属华山医院开展的腹腔镜中低位直肠癌根治术患者的临床资料,筛选其中79例术前肛门功能正常、性生活相对活跃的资料完整患者进入本研究,其中盆腔神经丛监测组包括双侧监测和单侧监测共43例,常规直肠全系膜切除术(total mesorectal excision,TME)肉眼判断者36例为对照组。比较两组手术时间、术中出血量、淋巴结阳性人数比例、术后平均住院时间及留置导尿管时间,通过标准化问卷随访比较两组患者术后生活质量、术后排尿功能、排便功能及性功能变化。结果监测组与对照组平均手术时间、术中出血量、淋巴结阳性人数比例、术后平均住院时间及留置导尿管时间差异无统计学意义(P>0.05)。在79例患者中,双侧监测成功组(n=33)患者术后泌尿功能、生活质量相对较高,造口回纳后性功能障碍发生率较低。术后1年双侧监测组与对照组(n=36)相比,国际前列腺症状评分(international prostate symptom score,IPSS)分别为2.94±2.49 vs.5.19±3.30,生活质量(quality of life,QoL)评分为1.73±0.67 vs.2.56±0.84,差异有统计学意义(P<0.05),其中男性患者双侧监测组(n=21)与对照组(n=23)国际勃起功能问卷-5(international index of erectile function-5,IIEF-5)评分分别为20.23±3.86 vs.16.30±3.98,差异有统计学意义(P<0.05)。双侧监测组患者Wexner评分(4.21±1.47)低于单侧监测组(4.90±0.88)及对照组(6.00±1.70)(P<0.05)。单侧监测组(n=10)患者术后5~6月泌尿功能有轻度障碍,随着术后康复时间延长有所改善,术后1年泌尿、排便及性功能障碍发生率也相对较低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔镜中低位直肠癌根治术中采用IMPAN技术有助于定位盆腔植物神经的走向、变异以及确认其功能完整性,降低医源性损伤的发生率,提高患者的生活质量,改善预后。

关键词：腹腔镜中低位直肠癌术中神经监测盆腔自主神经

小鼠骨桥蛋白(OPN)基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体内抑制效果鉴定

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复旦学报（医学版） 2012年第5期39卷 496-501页

作者：郭满林晶陈进宏蔡端复旦大学附属华山医院普外科上海200040

目的构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果。方法参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA重组体。经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液。经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Western blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果。结果成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109 TU/mL病毒原液。与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别。结论利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型。为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具。

关键词：骨桥蛋白(OPN) 小发夹RNA(shRNA) 慢病毒载体小鼠

结直肠癌腹腔镜手术与开腹手术的短期疗效比较(英文)

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复旦学报（医学版） 2010年第1期37卷 92-99页

作者：王树彦陈宗祐复旦大学附属华山医院普外科上海200040

目的评估腹腔镜治疗结直肠癌的短期疗效,探讨腹腔镜治疗结直肠癌的可行性、安全性、有效性。方法自2004年1月至2009年3月,共有35名患者在我院接受了腹腔镜下结直肠癌手术,其中32例为根治性切除术(腹腔镜组),1例为探查术,2例中转开腹。... 详细信息

目的评估腹腔镜治疗结直肠癌的短期疗效,探讨腹腔镜治疗结直肠癌的可行性、安全性、有效性。方法自2004年1月至2009年3月,共有35名患者在我院接受了腹腔镜下结直肠癌手术,其中32例为根治性切除术(腹腔镜组),1例为探查术,2例中转开腹。随机选取同期相同数量的开腹手术患者作为开放组。回顾性统计、比较两组的短期疗效,包括手术时间、术中出血量、术中输血量、切口长度、组织病理学数据、术后并发症及术后功能恢复情况。结果腹腔镜组与开放组各为32例,其余3例(1例腹腔镜下探查术,2例中转开腹)独立分析。两组患者的性别、年龄、肿瘤位置及TNM分期无统计学差异。在组织病理学方面,两组无统计学差异(肿瘤切缘:5 cmvs5 cm,P=0.664;清扫淋巴结数量:7vs8,P=0.228)。腹腔镜组与开放组在手术时间(250 minvs180 min,P=0.006)、切口长度(10 cmvs20 cm,P<0.001)、术中输血需要(1例vs10例,P=0.003)、止痛剂使用量(12例vs25例,P=0.004)、术后住院天数(9.5 dvs11 d,P=0.008)、术后肠道功能恢复情况等方面具有统计学差异;在术中出血量(200 mLvs200 mL,P=0.098)、术后并发症发生率(8例vs6例,P=0.545)及术后引流量(507.5 mLvs669.0 mL,P=0.475)等方面无统计学差异。结论尽管病例数量有限,本回顾性分析显示,在肿瘤学安全性和短期疗效方面,腹腔镜下结直肠癌手术不亚于传统开腹手术。

关键词：结直肠癌腹腔镜开腹手术肿瘤学安全性短期疗效

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外泌体在胆管细胞癌中的研究进展

复旦学报（医学版） 2022年第6期49卷 997-1002页

作者：慈鸿飞贾户亮复旦大学附属华山医院普外科上海200040

胆管细胞癌(cholangiocarcinoma,CCA)是一种恶性程度较高,可发生于胆管树任何位置的实体肿瘤。CCA由于症状不明显且进展迅速,往往发现时已处于进展阶段,即使及时手术,5年存活率也小于10%。因此寻找CCA特异的生物标记物,早期筛查出CCA可... 详细信息

胆管细胞癌(cholangiocarcinoma,CCA)是一种恶性程度较高,可发生于胆管树任何位置的实体肿瘤。CCA由于症状不明显且进展迅速,往往发现时已处于进展阶段,即使及时手术,5年存活率也小于10%。因此寻找CCA特异的生物标记物,早期筛查出CCA可疑人群十分必要。外泌体属于细胞外囊泡的一种亚型,能够被细胞分泌出来,广泛分布于体液之中。由于外泌体包含有分泌细胞的某些特异物质,近年来作为潜在的生物标记物在肿瘤的发生和转移领域被广泛关注。本文总结了外泌体在CCA中的研究进展,分析目前研究存在的问题,以期为后续研究提供帮助。

关键词：胆管细胞癌(CCA) 外泌体细胞外囊泡

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小鼠肝星状细胞(HSC)中ATF5促进TRAIL基因的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用

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复旦学报（医学版） 2018年第6期45卷 781-787页

作者：黄文海陈宗祐项建斌李震洋顾晓冬复旦大学附属华山医院普外科上海200040

目的探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5 (activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用。方法半定量RT-PCR检测HSCs中ATF5 mRNA、TRAIL mRNA的表达水平,流式细胞术检测HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs,针对ATF-5基因进行RNA干扰,半定量RT-PCR检测慢病毒感染的HSCs中ATF5 mRNA及TRAIL mRNA水平。单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)观察HSCs和慢病毒感染的HSCs对T细胞的增殖反应。分别将单纯胰岛、胰岛联合HSCs、胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植到小鼠的肾包膜下,比较移植胰岛的存活时间。结果γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)上调HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平(P<0.01),IFN-γ亦可上调HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA水平明显下降(P<0.01),TRAIL mRNA水平亦下降(P<0.05)。IFN-γ作用于感染慢病毒的HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平亦增加(P<0.01),但明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。HSCs可明显抑制T细胞增殖反应(P<0.01),慢病毒感染的HSCs亦能抑制T细胞增殖反应(P<0.05),但抑制作用明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。单纯胰岛移植组(A组)移植胰岛中位存活时间为11天;胰岛联合HSCs移植组(B组)移植胰岛中位存活时间为88天,B组胰岛移植物存活时间明显长于A组(P<0.01);胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植组(C组)移植胰岛中位存活时间为18天,C组胰岛移植物存活时间长于A组(P<0.01),但明显短于B组(P<0.01)。结论小鼠HSCs中ATF5可促进TRAIL基因表达,表达TRAIL的HSCs可以抑制T细胞的增殖反应,此HSCs与胰岛细胞联合移植,明显延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间。

关键词：肝星状细胞(HSC) 转录激活因子5(ATF5) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胰岛移植小鼠

小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体外对树突状细胞的作用

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复旦学报（医学版） 2008年第4期35卷 483-488,493页

作者：顾晓冬洪军项建斌陈宗祐复旦大学附属华山医院普外科上海200040

目的构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体,并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)的作用。方法针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,再与pHelper1.0和pHe... 详细信息

目的构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体,并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)的作用。方法针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,再与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度;同法构建出CD86基因RNA干扰慢病毒载体。慢病毒感染体外培养的DC,通过荧光显微镜检测感染效率,Annexin V/PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况,流式细胞仪检测CD80和CD86的表达情况。结果PCR和测序证实,pGCL-CD80 shRNA和pGCL-CD86 shRNA慢病毒载体构建正确,病毒滴度均达2×107 TU/mL,适合感染DC的MOI值为20,此时慢病毒对DC具有低毒性,感染效率为85.42%。CD80和CD86表达的抑制率分别为82.05%和77.78%。结论成功构建出小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体,其有明显抑制DC表面CD80和CD86的表达,这为移植物排斥提供了新的治疗手段。

关键词：慢病毒 CD80 CD86 RNA干扰树突状细胞

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面向21世纪普外科发展的挑战

上海医学 2001年第7期24卷 389-390页

作者：张延龄复旦大学附属华山医院外科教研室 200040

早在20世纪90年代初期,不少外科专家撰文指出手术的微创化、局限化和重建化将是普外科未来的发展方向.

关键词：普外科发展趋势基础医学临床试验经济效益

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梗阻性黄疸的血清学及免疫学诊断

中国实用外科杂志 2001年第8期21卷 7-8页

作者：张延龄复旦大学华山医院外科教研室

张延龄教授梗阻性黄疸的血清学和免疫学诊断在判定导致黄疸的病变为良性抑或恶性性质及其定位意义不很大,但不可否认某些项目仍具有参考价值,如血清胆红素测定有助于了解黄疸的程度,应列为常规.测定胆红素结合型和非结合型浓度可以鉴别... 详细信息

张延龄教授梗阻性黄疸的血清学和免疫学诊断在判定导致黄疸的病变为良性抑或恶性性质及其定位意义不很大,但不可否认某些项目仍具有参考价值,如血清胆红素测定有助于了解黄疸的程度,应列为常规.测定胆红素结合型和非结合型浓度可以鉴别肝细胞性、溶血性或梗阻性原因的黄疸;即使在以结合性胆红素增加为主的梗阻性黄疸,有因运输或排泌障碍引起的,如见于DubinJohnson综合征、Rotor综合征、肝硬化、淀粉样变性、肝炎或妊娠,也有因胆道梗阻引起的,如见于胆石症、胆道狭窄、壶腹周围癌肿、胆管癌、慢性胰腺炎或原发性硬化性胆管炎等,需予以鉴别,并说明不是所有的梗阻性黄疸都需要手术.这一检查是人们熟知的项目,不加讨论,下面介绍几种新开展的检查方法.

关键词：梗阻性黄疸免疫学诊断免疫诊断胰腺癌肝细胞癌血清学

腺病毒介导p21基因转染抑制人血管平滑肌细胞增殖的研究

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复旦学报（医学版） 2003年第4期30卷 367-370,375页

作者：余波张学利王铁平李平蔡端复旦大学附属华山医院普外科上海200040 上海医学院生物化学与分子生物学系教研室上海200032

目的研究抗增殖性p21基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMC)的增殖抑制作用及其作用机制。方法通过腺病毒介导将外源性p21基因转入HVSMC,通过免疫印迹法(Western blot)检测p21基因的表达,原位末端标记法(TUNEL)、DNA片段梯度... 详细信息

目的研究抗增殖性p21基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMC)的增殖抑制作用及其作用机制。方法通过腺病毒介导将外源性p21基因转入HVSMC,通过免疫印迹法(Western blot)检测p21基因的表达,原位末端标记法(TUNEL)、DNA片段梯度分析及流式细胞分析(FCM)观察靶细胞的细胞周期变化及凋亡,利用酶联免疫光度仪分析靶细胞的增殖抑制情况。结果 Western blot结果显示p21基因转染后的HVSMC可高水平表达p21蛋白,而另两组无表达。感染后5 d,Adp21组的细胞数为0.275 5±0.01(525 nm波长下吸光度A值),AdlacZ组为0.340 9±0.02,空白组为0.347 5±0.02,Adp21组较另两组的差异有统计学意义(P<0.01)。TUNEL、DNA片段梯度分析及FCM检测均提示靶细胞发生了凋亡。FCM检测还发现明显的细胞周期阻滞现象,Adp21组G0-G1期细胞比例为66.23％,S期细胞比例为10.18％,而另两组G0-G1期和S期细胞比例分别为:47.73％、30.56％和45.31％、32.34％。结论复制缺陷性腺病毒在体外可有效介导外源性p21基因转染HVSMC,转染后的细胞除发生细胞周期阻滞外还出现明显的凋亡,其生长增殖受到抑制。

关键词：腺病毒介导 p21基因人血管平滑肌细胞细胞增殖抑制作用基因治疗静脉移植血管成形术