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生物化学实验报告对培养学生综合素质的思考

基础医学教育 2025年 54-57页

作者：李梦瑶武丽涛蓝茜宁启兰蒋小英朱文华西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系

随着生物化学实验教学内容的不断改进和丰富,实验教学改革取得了初步的成效。但实验教学的改革,不仅体现在实验内容和实验技术,还包括学生实验报告的改革。实验报告不仅可以反映学生对实验的掌握情况,也能体现学生对实验和理论结合的思... 详细信息

随着生物化学实验教学内容的不断改进和丰富,实验教学改革取得了初步的成效。但实验教学的改革,不仅体现在实验内容和实验技术,还包括学生实验报告的改革。实验报告不仅可以反映学生对实验的掌握情况,也能体现学生对实验和理论结合的思考,还可以直观地反映出实验教学改革的成效。对实验报告的内容进行优化,不仅可以打破固有的实验报告书写模式,更好地培养学生的科研逻辑思维,还可以加强学生对理论知识的理解,激发学生对实验的兴趣,从而提高学生的综合素质。因此,对实验报告进行优化,在推进生物化学实验教学改革中有着不可替代的作用。

关键词：生物化学实验报告教学改革综合素质学习兴趣

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膜受体蛋白质机器动态修饰的发现及表征

中国科学:化学 2025年

作者：翁亦澄郑江南田瑞军南方科技大学理学院化学系化学生物学与组学分析研究中心上海交通大学生物医学工程学院

膜受体蛋白质机器通过动态翻译后修饰调控蛋白质复合物组装,以时空特异的方式精准地控制细胞的生物学表型.基于质谱的蛋白质组学目前已经成为动态翻译后修饰和蛋白质复合物分析的主流技术平台.本课题组以化学生物学工具赋能质谱技术为... 详细信息

膜受体蛋白质机器通过动态翻译后修饰调控蛋白质复合物组装,以时空特异的方式精准地控制细胞的生物学表型.基于质谱的蛋白质组学目前已经成为动态翻译后修饰和蛋白质复合物分析的主流技术平台.本课题组以化学生物学工具赋能质谱技术为研究思路,围绕着生理、病理环境中的膜受体蛋白质机器动态酪氨酸磷酸化修饰和蛋白质复合物取得了一些重要进展:通过化学探针捕获与富集相互作用的蛋白质,鉴定了在肿瘤微环境中的配体-膜蛋白受体相互作用与免疫过程中酪氨酸磷酸化介导形成的蛋白质机器;另一方面,通过开发活细胞中的化学生物学工具,描绘了特定时空条件下膜受体蛋白质机器调控的动态复合物与磷酸化级联过程.

关键词：膜受体蛋白质机器蛋白质组学蛋白质复合物酪氨酸磷酸化

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岩藻糖糖链与肝癌细胞的迁移作用

生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 932-937页

作者：吴兴中陈迎风复旦大学医学院生物化学与分子生物学系上海200032

通过凝集素印迹转移电泳和亲和层析技术 ,对岩藻糖糖基化蛋白在肝癌细胞中的作用进行了研究 .在化学诱发的大鼠肝癌过程中 ,分子质量在 2 3ku到 4 0ku范围内与荆豆凝集素 (UEA)及扁豆凝集素 (LCA)结合的岩藻糖糖基化蛋白显著减少 ,诱癌... 详细信息

通过凝集素印迹转移电泳和亲和层析技术 ,对岩藻糖糖基化蛋白在肝癌细胞中的作用进行了研究 .在化学诱发的大鼠肝癌过程中 ,分子质量在 2 3ku到 4 0ku范围内与荆豆凝集素 (UEA)及扁豆凝集素 (LCA)结合的岩藻糖糖基化蛋白显著减少 ,诱癌至 17～ 2 0周这些条带重新恢复 ,而分子质量为 80ku的条带却在诱癌过程中逐周增加 .比较高、低转移性肝癌细胞的岩藻糖糖基化蛋白 ,发现高转移性肝癌细胞具有多种增强的条带 .利用橘果粉胞凝集素 (AAL)和LCA亲和层析柱分离了这些岩藻糖基化糖蛋白 ,并用这些糖蛋白直接作用于肝癌细胞 ,发现AAL 糖蛋白具有显著抑制肝癌细胞迁移的作用 ,迁移细胞数从对照的 (10 0± 4 9) %下降到 (48 1± 2 5 ) % (P <0 0 1) ,LCA 糖蛋白也有类似作用 .用胰酶和木瓜蛋白酶水解蛋白质部分后 ,形成的糖肽抑制肝癌细胞迁移的作用并不改变 ,甚至增强 .此外直接用肝癌转移灶的组织测定了岩藻糖转移酶活性 ,发现α1,6岩藻糖基转移酶活性显著比正常肝组织高 ,而α1,3岩藻糖基转移酶活性没有显著的改变 .用系列凝集素分析发现这些糖链主要能结合伴刀豆凝集素A ,也能结合E 型及L 型植物凝集素 ,显示这种糖蛋白的糖链可能含有较多的高甘露糖型 .这些结果提示糖链在诱癌过程中结构有了改变。

关键词：岩藻糖糖链肝癌细胞迁移作用岩藻糖基转移酶肿瘤转移

c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗免疫对小鼠白色脂肪的调节作用

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：董梦娟常宇骁宁唤唤路延之康健徐铭泽代婷李嘉玲郝乐冉张琳娜柏银兰宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学军事医学创新中心延安大学生命科学学院

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血... 详细信息

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗（rBCG）调节小鼠附睾白色脂肪（eWAT）代谢及免疫的作用及机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗（BCG）和重组卡介苗（rBCG），监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量，血球仪计血管基质成分（SVFs）数量。制备小鼠脂肪组织切片，HE染色后显微镜下观察和比较各组小鼠eWAT脂肪细胞大小、数量和形态以及冠状结构（CLS）形成等变化。qRT-PCR检测各组小鼠脂肪代谢相关因子、细胞因子和衰老相关基因的转录水平。结果BCG和rBCG免疫小鼠体重随时间逐渐增加，rBCG免疫诱导eWAT比重增加，SVFs数量降低。HE染色结果显示，BCG免疫促进eWAT脂肪细胞增生和rBCG免疫促进脂肪细胞肥大，BCG和rBCG免疫均可诱导eWAT中CLS形成。qRT-PCR检测结果显示，rBCG免疫可抑制eWAT脂肪分解和能量消耗相关基因表达。BCG免疫对细胞因子转录作用影响不大，而rBCG显著诱导IFN-γ和IL-1Ra，抑制IL-15和IL-2的转录，但不诱导衰老相关基因的表达。结论 rBCG免疫可诱导eWAT脂肪细胞肥大，其机制与抑制eWAT脂肪分解及调节细胞因子表达有关。

关键词：卡介苗重组卡介苗环二腺苷酸白色脂肪脂肪代谢细胞因子

结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶的重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：胡家豪宁唤唤董梦娟路延之代婷张从玥徐子晴王姝予周正言柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学基础医学院学员队空军军医大学军事医学创新中心宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系延安大学生命科学学院

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB，以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB，Westernblot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，收集小鼠血清与肺泡灌洗液（BALF），ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功，该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB，大量扩增并纯化获得滴度为5.53×1010PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加，同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达Mtb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB，并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答，可用于结核病新疫苗策略的研究。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶黏膜免疫

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HOX家族及其在癌症中的研究进展

生物化学与生物物理进展 2017年第9期44卷 737-750页

作者：林铃吴兴中复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

编码转录因子的同源异形盒(homeobox,HOX)基因在染色体上串联成簇排列,是生物发育中决定身体节段边界的重要基因.HOX在机体不同部位有相应的表达模式,同时HOX的表达也包含着成体细胞的位置信息.HOX基因在癌症发生发展中起重要作用,在白... 详细信息

编码转录因子的同源异形盒(homeobox,HOX)基因在染色体上串联成簇排列,是生物发育中决定身体节段边界的重要基因.HOX在机体不同部位有相应的表达模式,同时HOX的表达也包含着成体细胞的位置信息.HOX基因在癌症发生发展中起重要作用,在白血病中的研究一直以来都受到关注,近年来HOX在肺癌、胃肠道肿瘤、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌等实体瘤中的研究也成为新的热点.HOX基因的表达调控、细胞学功能和转录活性的研究对阐明HOX在癌症中的作用具有重要意义.

关键词： HOX家族表观遗传调控非编码RNA 转录活性肿瘤

磺酰化乳糖基神经酰胺表达水平对肝癌细胞转移潜能的影响

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生物化学与生物物理进展 2003年第3期30卷 395-400页

作者：吴兴中李尉本家查锡良复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

研究磺酰化乳糖基神经酰胺 (SM 3 )的表达水平与肝癌细胞转移潜能的关系 .采用免疫荧光染色和细胞酶联免疫两种方法 ,观察了不同转移潜能的肝癌细胞中磺酰化乳糖基神经酰胺的表达水平 ,发现高转移性肝癌细胞表达SM 3的水平明显高于低转... 详细信息

研究磺酰化乳糖基神经酰胺 (SM 3 )的表达水平与肝癌细胞转移潜能的关系 .采用免疫荧光染色和细胞酶联免疫两种方法 ,观察了不同转移潜能的肝癌细胞中磺酰化乳糖基神经酰胺的表达水平 ,发现高转移性肝癌细胞表达SM 3的水平明显高于低转移性肝癌细胞 .高转移性肝癌细胞经过 10 μmol/L维甲酸处理 ,抑制肝癌细胞的转移潜能以后 ,SM 3的表达水平显著下降 (P 分子半乳糖基神经酰胺水平并不降低 ,提示磺酰化作用受到了抑制 .通过脑苷脂磺酰基转移酶 (CST)基因的转染 ,使Hep3B肝癌细胞高表达SM3 .发现CST转染的肝癌细胞与转移相关的行为显著改变 ,经黏附试验发现 ,CST基因转染的肝癌细胞对层粘连蛋白和玻连蛋白 (vitronectin)的黏附显著增强 ,比未转染的或转染载体的肝癌细胞升高 3～ 4倍 .裸鼠体内试验表明 ,这种具有高度表达CST基因的Hep3B细胞比对照组细胞具有更高的转移能力 (P <0 0 5 ) .

关键词：磺酰化乳糖基神经酰胺表达水平肝癌细胞转移潜能

胞浆型磷脂酶A_2介导弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

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生物化学与生物物理进展 2004年第4期31卷 350-355页

作者：王■ 周新汪炳华陈丽达张冀曹金秀武汉大学中南医院基因诊断中心武汉大学医学院生物化学与分子生物学系武汉430071 武汉大学医学院生物化学与分子生物学系

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白 (MM LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A2 (cPLA2 )在此过程中的作用 .MTT法测定细胞存活率 ;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡 ;3 H 花生四烯酸 (3 H AA)预标法测... 详细信息

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白 (MM LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A2 (cPLA2 )在此过程中的作用 .MTT法测定细胞存活率 ;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡 ;3 H 花生四烯酸 (3 H AA)预标法测定PLA2 活性 ;蛋白质印迹检测cPLA2 磷酸化 ;激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化 .结果表明 ,MM LDL (10 0～ 30 0mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征 ,凋亡率随MM LDL浓度的增加而上升 .MM LDL能引起胞内钙离子浓度增加 ,cPLA2 的活化及磷酸化 .15 μmol/LAACOCF3 和 5mmol/LEGTA在抑制cPLA2 活性的同时 ,部分抑制MM LDL诱导的HUVECs凋亡 .加入外源性AA (5 0 μmol/L)能逆转AACOCF3 引起的凋亡抑制 .结果提示 ,cPLA2 参与了MM LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递 .

关键词：弱氧化修饰低密度脂蛋白钙花生四烯酸内皮细胞细胞凋亡胞浆型磷脂酶A2

稳定表达淋巴细胞趋化因子的大鼠系膜细胞载体的构建

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复旦学报（医学版） 2003年第6期30卷 565-568页

作者：朱春芳徐荣左欧周罗复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

目的探讨以肾小球系膜细胞作为高表达大鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)的载体的可行性,从而为深入研究淋巴细胞趋化因子的作用和体内活性创造条件。方法采用RT-PCR法获得大鼠的Ltn的编码区全长的cDNA序列;应用基因重组技术和限制性内切酶酶... 详细信息

目的探讨以肾小球系膜细胞作为高表达大鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)的载体的可行性,从而为深入研究淋巴细胞趋化因子的作用和体内活性创造条件。方法采用RT-PCR法获得大鼠的Ltn的编码区全长的cDNA序列;应用基因重组技术和限制性内切酶酶切法构建并鉴定pcDNA 3.1/Ltn真核表达载体;用Lipofec-tAMINE PLUS脂质体转染法将构建的质粒及空质粒瞬时转染于SKOV3细胞;用RT-PCR和ELISA法检测LtnmRNA及蛋白质水平的表达,进而用pcDNA 3.1/Lac Z和pcDNA 3.1/Ltn稳定转染原代培养的WKY大鼠肾小球系膜细胞,用潮霉素B筛选获得稳定表达报告基因Lac Z和大鼠Ltn的细胞克隆。结果测序结果显示质粒载体中正确地插入了大鼠Ltn的编码基因;RT-PCR显示在瞬时转染的SKOV3细胞和稳定转染的4个系膜细胞克隆中Ltn mRNA表达增高;ELISA证实细胞培养上清中Ltn的蛋白质浓度较对照组明显升高。此外,X-gal染色显示获得了2个稳定表达β-半乳糖苷酶基因的系膜细胞克隆。结论本研究成功地构建了真核表达质粒载体pcDNA 3.1/hygro/Ltn,获得了稳定表达大鼠Ltn的肾小球系膜细胞克隆,并在mRNA及蛋白质水平上证实了Ltn的表达,为进一步研究Ltn的体内活性奠定了基础。

关键词：淋巴细胞趋化因子大鼠载体肾小球系膜细胞基因转染肾小球疾病