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HeLa细胞中与组织型转谷氨酰胺酶相互作用蛋白质的筛选

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第5期35卷 478-482页

作者：李平张宇清王霞谭理朱运松上海200032 复旦大学上海医学院分子遗传研究室复旦大学上海医学院分子遗传研究室教育部分子医学重点实验室

组织型转谷氨酰胺酶 (tissuetransglutaminase ,tTG ,TGII)是转谷氨酰胺酶家族成员之一 ,多数细胞凋亡过程中均有tTG表达水平的升高。为研究tTG在细胞凋亡过程中发挥作用的机制 ,利用Gal 4酵母双杂交系统筛选了HeLa细胞中与tTG相互作用... 详细信息

组织型转谷氨酰胺酶 (tissuetransglutaminase ,tTG ,TGII)是转谷氨酰胺酶家族成员之一 ,多数细胞凋亡过程中均有tTG表达水平的升高。为研究tTG在细胞凋亡过程中发挥作用的机制 ,利用Gal 4酵母双杂交系统筛选了HeLa细胞中与tTG相互作用的蛋白质 ,获得了 17个阳性酵母克隆。序列测定显示其中 1个克隆所含cDNA序列编码TIA 1相关蛋白 (TIA 1 relatedprotein ,TIAR )C端 12 9个氨基酸残基序列 ,GST下拉 (pull down)实验也证实tTG与TIAR能相互作用 ,而且这种相互作用需要Ca2 + 参与作用。这些结果提示tTG可能通过其Ca2 + 依赖的转谷氨酰胺活性对TIAR进行修饰从而影响TIAR的功能 ,可能在细胞凋亡中发挥着一定的作用。

关键词：组织型转谷氨酰胺酶 TIA-1相关蛋白酵母双杂交

孕酮促进小鼠胚胎干细胞的增殖和存活能力(英文)

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生理学报 2009年第5期61卷 431-438页

作者：申善维宋后燕复旦大学上海医学院教育部分子医学重点实验室上海200032

已有研究表明雌二醇刺激小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mES cells)的增殖,为了探讨另一种甾体激素-孕酮对mES细胞增殖的影响,本研究分别采用MTT实验和BrdU掺入实验获得增殖曲线,克隆形成实验(clone forming assay)检测孕... 详细信息

已有研究表明雌二醇刺激小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mES cells)的增殖,为了探讨另一种甾体激素-孕酮对mES细胞增殖的影响,本研究分别采用MTT实验和BrdU掺入实验获得增殖曲线,克隆形成实验(clone forming assay)检测孕酮对单细胞存活能力和增殖能力的影响,Western blot检测胚胎干细胞特异的标志基因Oct-4的表达,流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测细胞周期,以及real-time PCR检测细胞周期有关的基因和部分原癌基因的表达。结果显示,和雌激素一样,孕酮也具有促mES细胞增殖的作用。在孕酮处理组,克隆数目比对照组显著增多。Western blot结果显示在孕酮处理组,Oct-4表达变化不大,mES仍处在干细胞状态。FACS结果显示:加入孕酮后,和对照组相比,mES处在S+G2/M期的细胞比例增多。Real-time PCR结果显示孕酮处理使细胞周期蛋白(cyclins)、细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶(cyclin-dependent kinases)、c-myc、c-fos基因表达上调。以上结果提示,孕酮促进mES细胞增殖和存活能力,孕酮促增殖的作用可能和上述细胞周期有关基因的表达上调有关。

关键词：孕酮胚胎干细胞细胞周期蛋白细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶原癌基因

基因芯片分析干扰素对乙型肝炎病毒转染细胞基因表达的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1053-1060页

作者：熊炜王迅刘晓颖项黎郑玲洁刘江霞袁正宏复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV... 详细信息

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV基因组的HepG2 .2 .15细胞经IFN α或IFN γ处理 6h后 ,用含 14 112个靶基因的人cDNA基因芯片检测了各组基因表达谱的差异。结果证实 ,许多与细胞周期、增殖、凋亡相关的基因及部分EST和功能未知基因受IFN调节 ;IFN诱导后 ,一些与激酶和信号转导、转录调节、抗原递呈和处理相关的基因在两株细胞间表达存在差异 ,提示HBV影响IFN诱导的细胞基因的表达。进一步挑选部分显著差异表达的基因 ,研究其对HBV复制的影响 ,结果发现在两个细胞株中IFN诱导后基因表达差异的双遍在蛋白 (Diubiquitin)和髓样细胞分化蛋白 (MyD88)均可显著降低HBV抗原表达 ,并证实MyD88能抑制HBV复制。这有助于揭示IFN抗病毒效应及HBV持续性感染机制 ,为分子水平寻找新型抗HBV药物的靶点打下基础。

关键词：基因芯片乙型肝炎病毒干扰素细胞基因表达谱

PAI-2与IRF-3相互作用的鉴定(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第7期35卷 661-665页

作者：张宇清李平侯敏王霞樊静谭理朱运松复旦大学上海医学院分子遗传学教研室教育部分子医学重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院分子遗传学教研室

2型纤溶酶原激活物抑制剂 (plasminogenactivatorinhibitortype 2 ,PAI 2 )除了参与纤溶活性的调节、肿瘤的浸润和迁移外 ,在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。现已明确 ,PAI 2分子中的CD螺旋间区是PAI 2与其他蛋白质相互作用的结构... 详细信息

2型纤溶酶原激活物抑制剂 (plasminogenactivatorinhibitortype 2 ,PAI 2 )除了参与纤溶活性的调节、肿瘤的浸润和迁移外 ,在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。现已明确 ,PAI 2分子中的CD螺旋间区是PAI 2与其他蛋白质相互作用的结构域 ,该区的缺失将直接导致PAI 2丧失对TNF α诱导细胞凋亡的拮抗功能 ,但其作用机制不详。以PAI 2的CD螺旋间区为诱饵 ,利用Gal 4酵母双杂交系统筛选凋亡过程中的HeLa细胞cDNA文库 ,发现干扰素调节因子 3(interferonregulatoryfactor 3,IRF 3)C端的 98个氨基酸残基与PAI 2的CD螺旋间区之间存在相互作用。通过RT PCR获得IRF 3的全长cDNA。免疫共沉淀实验进一步证实PAI 2通过其CD螺旋间区与IRF 3在细胞内也存在特异性的相互作用。IRF 3是一种转录调节因子 ,在抗病毒感染、免疫调节、病毒诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。因此证实PAI 2与IRF 3之间存在相互作用 ,为进一步研究PAI 2参与抗病毒感染或抗细胞凋亡等方面打下了基础

关键词： 2型纤溶酶原激活物抑制剂干扰素调节因子3 酵母双杂交免疫共沉淀

趋化因子IP10抑制乳腺癌细胞4T1播散转移的研究

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中华医学杂志 2006年第3期86卷 176-181页

作者：杨秀利储以微徐林李宝华熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室 200032

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移... 详细信息

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移模型和体外杀伤实验研究接种IP10-4T1对4T1细胞播散转移的影响。结果IP10-4T1细胞中IP10mRNA转录水平相对含量为0.92±0.12与未转染的4T1细胞(0.35±0.12)和pcDNA3-4T1细胞(0.29±0.08)比较差异有统计学意义(P实验性肺转移结果显示,IP10-4T1组小鼠肺重为0.27g±0.02g,与4T1细胞组(0.48g±0.08g)和pcDNA3-4T1组(0.43g±0.16g)比较明显减轻(P=0.021);其肺表面形成的转移结节数较对照组少;IP10-4T1组肺组织中形成的4T1细胞克隆数为2.6±1.7,明显低于4T1组(34.0±6.3)和pcDNA3-4T1组(33.0±2.3,P<0.05);2/6的IP10-4T1组小鼠肺组织内可见转移灶,而对照组全部形成肺转移灶。接种IP10-4T1细胞组小鼠的淋巴细胞杀伤率在各个效/靶比均高于对照组(P<0.05)。结论增加肿瘤局部IP10的表达,能增强机体细胞免疫应答水平,通过肿瘤特异性的杀伤作用,抑制肿瘤细胞在体内播散转移。

关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞培养

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药物性肝损伤的免疫学机制

临床肝胆病杂志 2025年第12期40卷 2538-2542页

作者：王宇李爽刘成海上海市宝山区中西医结合医院消化科上海 201999 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海 201203 教育部肝肾疾病重点实验室上海市中医临床重点实验室上海 201203

药物性肝损伤（DILI）机制复杂，涉及多种途径协同促进并互为因果，其中免疫反应在致病机制中扮演重要角色。在遗传背景因素下，药物活性代谢产物、药物-分子复合物、危险信号分子或可作为DILI发生的免疫反应触发因子，激活药物抗原性... 详细信息

药物性肝损伤（DILI）机制复杂，涉及多种途径协同促进并互为因果，其中免疫反应在致病机制中扮演重要角色。在遗传背景因素下，药物活性代谢产物、药物-分子复合物、危险信号分子或可作为DILI发生的免疫反应触发因子，激活药物抗原性超敏反应机制、P-i假说和固有免疫危险信号机制。使肝脏出现固有免疫、适应性免疫级联反应，导致肝脏固有免疫耐受状态失衡，进而造成肝脏组织的免疫炎症性损伤。本文主要阐述DILI的免疫学发生机制，以期为DILI治疗靶点的研发及规避用药不良反应等提供新的思路。

关键词：化学性与药物性肝损伤免疫治疗学

CXCL16在小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 282-285页

作者：徐焕宾龚燕萍蒋正刚刘瑞梓熊思东复旦大学上海医学院免疫系教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型,通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化,根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析,比较CXCL16... 详细信息

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型,通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化,根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析,比较CXCL16的表达水平和肝脏损伤程度的关系。从模型中各个时间点的肝损伤组织中分离浸润单核细胞,计算浸润的细胞数量变化,并进一步分析其中主要的CD4和CD8T淋巴细胞亚群的数量变化,研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用和意义。结果成功复制了小鼠免疫性肝损伤模型,发现在肝脏炎症和损伤中CXCL16表达水平显著上调,CXCL16的表达水平与肝脏损伤程度密切相关,肝脏组织浸润的单核细胞数量明显增加,淋巴细胞尤其是CD4+、CD8+T淋巴细胞数量也有明显的增加。结论小鼠肝脏损伤过程中CXCL16表达水平的增加与肝损伤程度密切相关,CXCL16趋化淋巴细胞浸润可能是导致肝脏损伤的重要机制之一。

关键词： CXCL16 小鼠免疫性肝损伤趋化因子类淋巴细胞

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

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复旦学报（医学版） 2003年第4期30卷 313-316页

作者：张宇清侯敏王霞孙兴会李平朱运松复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细... 详细信息

目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2D CD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73～76)无关。

关键词： PAI-2 突变体 TNF-α 肿瘤坏死因子-α 细胞凋亡纤溶酶原激活剂抑制物2型

肺癌细胞高、低转移株中uPA基因启动子的序列和活性

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复旦学报（医学版） 2004年第3期31卷 243-246页

作者：王丽石李平谭理朱运松复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basi... 详细信息

目的　分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法　用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。结果　 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论　uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的。

关键词：肺癌转移株 uPA基因启动子序列活性癌细胞