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兴奋性氨基酸受体的激活介导冷水应激诱导的tau蛋白磷酸化(英文)

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生物化学与生物物理进展 2010年第5期37卷 510-516页

作者：武凤英冯琼程敏闫洁许玉霞朱粹青复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

为探讨兴奋性神经传递系统是否参与冷水应激引起的tau蛋白磷酸化,将小鼠于4℃冷水应激5min.采用免疫印迹和免疫组织化学方法分析应激后脑内c-fos和磷酸化tau蛋白的表达情况;运用HPLC检测冷水应激后小鼠脑内兴奋性或抑制性神经递质的变化... 详细信息

为探讨兴奋性神经传递系统是否参与冷水应激引起的tau蛋白磷酸化,将小鼠于4℃冷水应激5min.采用免疫印迹和免疫组织化学方法分析应激后脑内c-fos和磷酸化tau蛋白的表达情况;运用HPLC检测冷水应激后小鼠脑内兴奋性或抑制性神经递质的变化;同时分析兴奋性氨基酸受体和L-型钙通道拮抗剂预处理后冷水应激小鼠脑内磷酸化tau蛋白的水平.冷水应激后1h,海马内磷酸化tau蛋白的水平显著升高,同时伴c-fos的染色增加.HPLC检测显示,兴奋性和抑制性神经递质呈现急剧上升而后又下降的趋势.冷水应激后15min,天冬氨酸和甘氨酸水平显著升高,1h后天冬氨酸、谷氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸显著下降.NMDA受体拮抗剂MK-801(5mg/kg)和AMPA受体拮抗剂DNQX(0.5,5mg/kg)可显著抑制冷水应激引起的磷酸化tau蛋白水平的升高,代谢性谷氨酸受体拮抗剂MAP-4不影响tau蛋白的磷酸化,另外,L-型钙通道阻断剂尼莫地平可抑制冷水应激引起的磷酸化tau蛋白水平的升高.这些结果表明,冷水应激可影响兴奋性神经传递系统,通过离子型兴奋性氨基酸受体和异常神经激活来调节tau蛋白的磷酸化.兴奋性神经传递系统的激活在冷水应激诱导的海马tau蛋白的磷酸化中发挥作用.

关键词：冷水应激 Tau蛋白磷酸化兴奋性氨基酸神经递质 HPLC

脑缺血后PUNT的表达及其与DNA合成标记物的关系

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复旦学报（医学版） 2003年第3期30卷 215-218,i002页

作者：毛力真刘鹏翀张玲妹复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

目的研究脑缺血后DNA的损伤及其与DNA合成的标记物——溴代尿嘧啶脱氧核苷(bromodeo—xyuridine,BrdU)掺入的关系。方法采用 PUNT(in situ DNA polymerase I-mediated DIG-dUTP nick-transla-tion)染色方法检测DNA的单链断裂(single strand break,SSB),用免疫荧光双标法观察BrdU的掺入与DNA损伤的关系。结果(1)PUNT染色阳性细胞表达的时程变化显示,缺血缺氧(hypoxic-ischemia,H-I)后0.5h,缺血侧纹状体就可检测到PUNT染色阳性细胞的表达。除H-I后3 h阳性细胞数出现一个小高峰外,H-I后1到12h,阳性细胞数处于较低水平。从H-I后24 h起,阳性细胞数显著上升,到2d时达最高峰。H-I后4和6 d,阳性细胞数仍然维持在较高的水平。(2)H-I后2到6d,BrdU与PUNT染色阳性细胞共表达。结论 H-I后早期出现DNA的损伤,BrdU的掺入与DNA的损伤有关。

关键词：阳性细胞共表达脑缺血 DNA合成标记物掺入损伤尿嘧啶核苷水平

缺血再灌注后脑组织中TRPC4 mRNA水平的变化

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复旦学报（医学版） 2004年第3期31卷 280-283页

作者：高艳琴高慧陆世铎汪杨孙凤艳复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

目的　在建立的大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血 (MCAO)模型上 ,观察脑组织不同部位瞬间受体电位通道蛋白 4 (TRPC4 ,TransientReceptorPotentialChannel 4 )mRNA表达的变化 ,以说明TRPC4可能参与缺血后再灌注引起的神经细胞损伤。方法　动... 详细信息

目的　在建立的大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血 (MCAO)模型上 ,观察脑组织不同部位瞬间受体电位通道蛋白 4 (TRPC4 ,TransientReceptorPotentialChannel 4 )mRNA表达的变化 ,以说明TRPC4可能参与缺血后再灌注引起的神经细胞损伤。方法　动物分为缺血后再灌注 6h、12h、1d、3d及假手术对照组 ,断头取脑后分别提取纹状体、海马及皮层各部位的总RNA ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)一步法 ,并以 β actin为内参 ,检测TRPC4mRNA的表达。结果　结果显示 ,TRPC4mRNA在纹状体、海马中有强表达 ,而在皮层中有弱表达。缺血组同侧纹状体TRPC4mRNA表达与对照组相比显著增加 (P <0 .0 0 5 ) ,其中 12h组同侧达到最高 ;在海马区 ,结果与纹状体完全相似 (P <0 .0 0 0 1)。结论　TRPC4为Ca2 + 通道蛋白 ,在脑缺血时 ,TRPC4mRNA随之出现变化。

关键词：缺血再灌注脑组织 TRPC4 mRNA RT—PCR

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成年鼠缺血性脑损伤诱导nestin的表达

生理学报 2002年第4期54卷 294-299页

作者：刘鹏翀陆世铎黄娅林孙凤艳复旦大学上海医学院医学神经生物国家重点实验室上海200032

应用免疫组化和免疫荧光双标技术结合激光共聚焦扫描显微镜,观察缺血性脑损伤后脑内nestin的表达及其细胞类型。实验观察结果为,再灌后1天,在缺血中心区可见nestin阳性突起;再灌后3天和1周时,除缺血中心区外,周边Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区均有nesti... 详细信息

应用免疫组化和免疫荧光双标技术结合激光共聚焦扫描显微镜,观察缺血性脑损伤后脑内nestin的表达及其细胞类型。实验观察结果为,再灌后1天,在缺血中心区可见nestin阳性突起;再灌后3天和1周时,除缺血中心区外,周边Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区均有nestin大量表达;而2周时仅限于周边Ⅰ区大量表达。激光共聚焦扫描显微镜观察到,再灌后3天,周边Ⅰ区 nestin阳性突起主要与GFAP共存;2周时,nestin阳性突起变粗、变长,并与NSE的共存明显增多。上述研究结果提示,脑缺血可诱导大鼠脑缺血区域表达nestin,该表达可能与神经细胞的修复有关。

关键词：成年鼠缺血性脑损伤诱导 nestin 表达脑缺血荧光双标激光共聚焦扫描显微镜巢蛋白

Glutamate enhances the surface distribution and release of Munc18 in cerebral cortical neurons

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Neuroscience Bulletin 2010年第4期26卷 273-281页

作者：万萍张彦平闫洁许玉霞王洪权杨茹朱粹青复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院医学神经生物学系上海200032

Objective Munc18 is considered as an intracellular protein that plays an important role in exocytosis of *** studies have demonstrated the presence of autoantibodies against Munc18 in a subgroup of Rasmussen’s encephalitis ***,the machinery of Munc18 autoimmunity is still *** present study was aimed to investigate Munc18 release from primary cultured neurons,Munc18 distribution on the outer plasma membrane of neurons,and the neurotoxicity of Munc18 *** The cerebral cortical neurons from embryonic day 17 SpragueDawley rats were prepared and cultured in neurobasal *** proteins in culture medium were precipitated with 10% trichloroacetic acid,and analyzed by *** proteins on neuronal surface were biotinylated with EZ-Link-sulfoNHS-LC-Biotin,and collected with avidin-conjugated agarose beads followed by immunoblotting *** cell surface immunofluorescent staining,the living neurons were labeled with anti-Munc18 antibody at 4 °*** injury was assessed by lactate dehydrogenase（LDH） *** Munc18 was detected in culture medium by immunoblotting *** treatment with 50 μmol/L glutamate for 1 h,Munc18 content in medium was ***,β-actin and syntaxin1 were not detected in culture medium,and LDH release was not significantly ***,glutamate enhanced Munc18 distribution on outer plasma *** neuron staining also demonstrated the localization of Munc18 on neuronal surface after glutamate treatment,especially at contacting regions between ***-induced increase of surface Munc18 distribution was suppressed by NMDA receptor antagonist MK801,but not by AMPA receptor antagonist ***,compared with c-Fos antibody,Munc18 antibody could induce neuronal injury,when culture medium contained the components of *** A portion of Munc18 can be released from neurons or distributed on neuronal surface,which can be enha

关键词： Munc18 neuron release cell surface glutamate

杏仁核注射Aβ_(25-35)后大鼠脑内细胞周期蛋白、tau蛋白和Bax蛋白的异常表达

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生理学报 2003年第2期55卷 142-146页

作者：洪道俊裴爱琳孙凤艳朱粹青复旦大学上海医学院医学神经生物国家重点实验室上海200032

近年来研究发现 ,阿尔茨海默病 (Alzheimer′sdisease ,AD)病人脑内神经元细胞周期相关蛋白的异常表达与AD相关病理改变存在关联。为探讨 β 淀粉样蛋白 ( β amyloid ,Aβ)的毒性作用能否导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白 ,以及... 详细信息

近年来研究发现 ,阿尔茨海默病 (Alzheimer′sdisease ,AD)病人脑内神经元细胞周期相关蛋白的异常表达与AD相关病理改变存在关联。为探讨 β 淀粉样蛋白 ( β amyloid ,Aβ)的毒性作用能否导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白 ,以及细胞周期相关蛋白表达与神经损伤之间的关系 ,我们运用免疫组化、积分光密度分析等方法对Aβ2 5 35多肽片段单侧杏仁核注射的大鼠脑进行了研究。结果显示 ,Aβ2 5 35注射的大鼠脑内除了有与神经纤维缠结相关的磷酸化tau蛋白和凋亡相关蛋白Bax蛋白水平增加外 ,术后 7d细胞周期相关蛋白cyclinA和cyclinB1蛋白在神经元内异常表达 ,但术后 2 1d时cyclinA的表达有所降低 ,而cyclinB1在脑内神经元中已检测不到 ;免疫荧光双标结果显示Aβ2 5 35注射后 7d的大鼠脑内有较多的cyclinB1和Bax、cyclinB1和磷酸化tau蛋白共存的神经元 ,而Bax与磷酸化tau蛋白阳性信号很少共存在同一细胞上。以上结果提示 ,Aβ可导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白 ,这些神经元可能会通过与Bax相关的凋亡途径死亡。

关键词：脑 β-淀粉样蛋白 cyclin A cyclin B1 tau蛋白阿尔茨海默病

电突触电流在单个吸气性气管运动神经元中的选择性显示(英文)

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生理学报 2007年第6期59卷 770-776页

作者：陈咏华侯丽丽王继江复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

在呼吸相关神经元或其它任何类型的神经元中,与生理性自发活动相对应的电突触电流(gap junction currents,GJCs)尚未在单个神经元中被记录到,因此电突触如何参与呼吸相关的或其它类型的生理性活动,目前所知甚少。在本研究中,我们假设GJC... 详细信息

在呼吸相关神经元或其它任何类型的神经元中,与生理性自发活动相对应的电突触电流(gap junction currents,GJCs)尚未在单个神经元中被记录到,因此电突触如何参与呼吸相关的或其它类型的生理性活动,目前所知甚少。在本研究中,我们假设GJCs可在电压钳记录条件下通过消除跨膜电化学梯度在单个神经元实现选择性记录,并在单个吸气性气管迷走神经节前神经元(inspiratory tracheal preganglionic vagal motor neurons,I-TPVMs)进行验证。结果显示,用这种方法在所有I-TPVMs中均记录到GJCs,且这些神经元的GJCs可被节律性中枢吸气活动所激活。此法可用于快速探测具自发活动的神经元网络中的GJCs。

关键词：电突触呼吸运动神经元膜片钳技术

岗田酸诱导大鼠脑神经细胞表达谷氨酸转运体EAAT1

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生理学报 2002年第4期54卷 287-293页

作者：魏建设张玲妹黄娅琳朱粹青孙凤艳复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

为研究tau蛋白高度磷酸化与谷氨酸转运体功能之间的关系,实验采用免疫组织化学、荧光双标记技术及大鼠额叶皮质定位注射的方法,观察了蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸（okadaic acid,OA）所致神经细胞退化对谷氨酸转运体亚型EAAT1表达的影响。... 详细信息

为研究tau蛋白高度磷酸化与谷氨酸转运体功能之间的关系,实验采用免疫组织化学、荧光双标记技术及大鼠额叶皮质定位注射的方法,观察了蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸（okadaic acid,OA）所致神经细胞退化对谷氨酸转运体亚型EAAT1表达的影响。结果如下:（1）在OA注射中心区神经元早期出现胞体固缩、肿胀、核移位,在注射3d时细胞破碎,发生坏死,并有大量炎性细胞浸润等病理现象;边周区细胞呈AT8（微管相关蛋白tau磷酸化指标）免疫阳性反应;（2）OA首先诱导神经细胞突起远端tau蛋白磷酸化,并逐渐向胞体发展,形成营养不良的神经细胞突起和神经纤维缠结样病理改变;（3）AT8免疫阳性反应脑区的神经细胞高表达谷氨酸转运体EAAT1,在12h阳性表达细胞数显著增多（P神经元。结果提示,OA致微管相关蛋白tau高度磷酸化时可诱导该区星形胶质细胞和神经元高表达谷氨酸转运体EAAT1。EAAT1高表达的病理生理意义有待进一步的阐明。

关键词：岗田酸诱导大鼠脑神经细胞表达谷氨酸转运体 EAAT1 tau蛋白磷酸化神经纤维缠结

MDM2在啮齿动物脑神经元轴突起始段的分布和表达模式

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生理学报 2014年第2期66卷 107-117页

作者：赵红王丹丹许玉霞朱粹青复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海200032

本文旨在研究鼠双微体基因2(murine double minute 2,MDM2)在啮齿动物脑内的分布及表达模式。应用免疫组化、免疫荧光双标及免疫印迹等技术检测MDM2蛋白在出生后不同阶段昆明小鼠大脑皮层和海马内的表达,及其在成年SD大鼠脑内和原代培... 详细信息

本文旨在研究鼠双微体基因2(murine double minute 2,MDM2)在啮齿动物脑内的分布及表达模式。应用免疫组化、免疫荧光双标及免疫印迹等技术检测MDM2蛋白在出生后不同阶段昆明小鼠大脑皮层和海马内的表达,及其在成年SD大鼠脑内和原代培养神经元中的分布,观察MDM2与神经元轴突起始段(axon initial segment,AIS)标志蛋白在分布上的相关性。进而采用MDM2抑制剂Nutlin-3在SD大鼠海马内注射,检测MDM2的分布及Nav1.6分布变化。结果显示,昆明小鼠出生后不同时程MDM2在皮层和海马的表达呈现不同的变化模式,但都显示随发育的进展,MDM2逐渐向AIS富集,这一现象在出生7天后逐渐显著。在成年SD大鼠不同脑区的神经元和原代培养神经元中也观察到MDM2富集于AIS的现象,并且其与AIS标志蛋白AnkG、Nav1.6共定位。脑内注射Nutlin-3不仅抑制MDM2在海马神经元AIS的分布,还导致Nav1.6在AIS的分布减少,并且树突标志物MAP2在神经元中的极性分布也发生改变。结果提示MDM2蛋白可在正常成年啮齿类动物脑神经元AIS富集表达,对维持AIS特性和神经元极性起调节作用。

关键词： MDM2 神经元轴突起始段神经元发育 Nutlin-3