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葡萄糖类似物甲基葡萄糖对表皮葡萄球菌生物被膜形成的影响及调节机制的研究

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微生物学报 2005年第6期45卷 930-936页

作者：靳嘉巍查锡良李华林瞿涤复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系卫生部糖复合物重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA的合成,PIA合成与细菌糖代谢相关。通过研究葡萄糖类似物甲基葡萄糖(MethylDglucoside,MG)对生物被膜的形成及相关基... 详细信息

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA的合成,PIA合成与细菌糖代谢相关。通过研究葡萄糖类似物甲基葡萄糖(MethylDglucoside,MG)对生物被膜的形成及相关基因表达的影响,考察生物被膜形成的调控机制并寻找抑制生物被膜形成的方法。甲基葡萄糖能抑制97337株生物被膜的形成,而且不同浓度的甲基葡萄糖对生物膜作用不同。甲基葡萄糖对97337株生物被膜形成的早期的粘附有较强的抑制作用;不同浓度的甲基葡萄糖处理后对ica和AtlE基因的mRNA表达水平影响不大,但能诱导agr基因的表达,这与甲基葡萄糖处理不同时间后的结果一致;而且甲基葡萄糖处理后97337的表面相关蛋白的组成明显改变。甲基葡萄糖对生物膜的抑制并不直接由于它对生长的抑制,它对细菌生长和生物被膜形成的抑制与其在细菌糖代谢中的竞争性相关;甲基葡萄糖能通过调控agr基因的表达改变细菌表面从而抑制97337的早期粘附和生物被膜的形成,但没有通过调控icaADBC、icaR的表达抑制生物膜的形成,可能与其对合成PIA相关糖基转移酶的竞争性抑制相关。

关键词：表皮葡萄球菌生物被膜多聚β-1 6-2脱氧-2-氨基-D-吡喃葡萄糖(PIA) 2-脱氧葡萄糖甲基葡萄糖 ica AtlE

糖类模式识别分子纤维胶凝蛋白与补体凝集素活化途径

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生命的化学 2003年第5期23卷 358-361页

作者：乔滨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

纤维胶凝蛋白(ficolin)是一组存在于人、猪、小鼠和海鞘等动物体内,含有胶原样结构域和纤维蛋白原样结构域的糖蛋白。它们的分子结构相似,多形成寡聚体,其基因结构和氨基酸序列有一定的同源性。Ficolin与MBL的功能相似,识别并特异结合... 详细信息

纤维胶凝蛋白(ficolin)是一组存在于人、猪、小鼠和海鞘等动物体内,含有胶原样结构域和纤维蛋白原样结构域的糖蛋白。它们的分子结构相似,多形成寡聚体,其基因结构和氨基酸序列有一定的同源性。Ficolin与MBL的功能相似,识别并特异结合某些糖类,所以它们可能是一种重要的糖类模式识别分子。血清中的ficolin结合病原体表面的糖类配体后,通过调理吞噬作用及凝集素途径激活补体,是天然免疫中的效应分子。本文主要介绍了纤维胶凝蛋白(ficolin)的分子结构、生物学特性及其补体活化的凝集素途径。

关键词： Ficolin 补体凝集素途径

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CCL27的不同剪切机制及其功能差异

生命科学 2005年第4期17卷 308-310页

作者：邵先安熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10。由于mRNA剪切的不同,CCL27形成两种不同的分子,即经典CCL27和其变异体PESKY,前者含分泌肽,对活化CD4+T细胞有趋化作用,是皮肤炎症反应中扮演主要角色的趋化因子;后者含有核内定位序列,调控细胞... 详细信息

CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10。由于mRNA剪切的不同,CCL27形成两种不同的分子,即经典CCL27和其变异体PESKY,前者含分泌肽,对活化CD4+T细胞有趋化作用,是皮肤炎症反应中扮演主要角色的趋化因子;后者含有核内定位序列,调控细胞骨架结构的重排,这一特性为该趋化因子所独有,可能预示着趋化因子家族的新功能。

关键词： CCL27 PESKY 剪切机制功能

血清诱导95D细胞中Nm23H1从细胞质转位至细胞膜板状伪足

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复旦学报（医学版） 2005年第3期32卷 255-258页

作者：谭理李平孙兴会李春阳童畅樊静朱运松复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系分子医学教育部重点实验室上海200032

目的　探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法　以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果　血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细... 详细信息

目的　探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法　以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果　血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细胞免疫荧光实验发现Nm2 3H1主要分布于细胞质,但在血清诱导形成的细胞板状伪足部位出现显著的Nm2 3H1分布。亚细胞组分分离及免疫印迹的实验结果也证实Nm2 3H1在血清刺激下可以转位到细胞膜,并且这种诱导作用是迅速的,在30min左右达到高峰,8h后降至仍然略高于血清诱导前的水平。结论　Nm2 3H1这种特殊的定位可能涉及细胞的运动,为进一步研究Nm2 3H1的功能与作用机制提供了基础。

关键词： Nm23H1 血清诱导细胞膜细胞质 D细胞伪足转位转移抑制因子人肺巨细胞癌细胞形态变化免疫荧光实验功能关系血清饥饿分布变化细胞形成诱导形成免疫印迹组分分离诱导作用作用机制细胞内 24h 细胞板亚细胞

CpG ODN对非小细胞肺癌患者化疗后免疫功能的影响

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复旦学报（医学版） 2011年第2期38卷 147-151页

作者：郑惠如金美玲任涛张镭储以微复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032 同济大学附属东方医院呼吸科上海200120 复旦大学上海医学院免疫学系-分子医学国家教育部重点实验室上海200032

目的测定非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)经胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸(cytosine-phosphorothioateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN)刺激后,CD4+CD25highTreg细胞及IFN-γI、L-12的变化,评价不同时间点CpG ODN的干预效果。方法选取NSCLC患者20例,分别抽取患者化疗前(d0)、化疗后第3天(d3)及第7天(d7)外周血3 mL,分离PBMC。每份PBMC均分为实验组及对照组,实验组给予CpG ODN 2006刺激,对照组不做干预。经培养48 h后收集细胞以流式细胞仪检测CD4+CD25highTreg细胞百分比,并取上清液检测INF-γ和IL-12(pg/mL)。结果实验组CD4+CD25highTreg细胞百分比在d0、d3、d7分别为(2.22±0.66)%,(2.09±0.44)%和(2.08±0.48)%,较对照组均有明显下降(P实验组IFN-γ在d0、d3、d7分别为(40.64±5.90)、(40.57±5.80)和(45.30±4.78)pg/mL,d0和d7时较对照组显著增加(P0.05)。实验组IL-12在d0、d3、d7分别为(41.02±6.65)、(39.41±7.41)和(45.75±12.46)pg/mL,d0和d3时较对照组明显增加(P0.05)。动态观察对照组,d3时CD4+CD25highTreg细胞比例下降至最低点,而后逐渐回升;实验组在d7时CD4+CD25highTreg细胞比例仍持续下降;实验组的IFN-γ值呈现升高趋势,d7和d0、d3相比明显升高(P实验组IL-12值在化疗前后无明显变化,即化疗前d0与化疗后d3、d7比较,以及d3与d7比较,差异均不明显(P值均>0.05)。肺癌患者化疗次数及外周血淋巴细胞的数目与CpG ODN对CD4+CD25highTreg细胞比例及IFN-γI、L-12的分泌作用无显著相关性(P>0.05)。结论 CpG ODN能有效下调CD4+CD25highTreg细胞,刺激INF-γ的分泌,优化肺癌患者抗肿瘤的免疫微环境,有利于机体的抗肿瘤免疫;肺癌患者即使化疗后外周血淋巴细胞的数目明显减少,CpG ODN仍能下调CD4+CD25highTreg细胞和刺激INF-r的分泌,发挥抗肿瘤作用。

关键词：非小细胞肺癌化疗 CpGODN 调节性T细胞白介素-12 γ干扰素

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

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复旦学报（医学版） 2006年第1期33卷 92-96页

作者：蔡旭彭卓醇孔德升郭泓珅白浩宋后燕马端复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室上海200032

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤... 详细信息

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。

关键词：重组可溶性组织因子免疫单克隆抗体

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超临界流体制备BSA包衣微丸及释药特性

复旦学报（医学版） 2008年第3期35卷 380-383页

作者：肖菊香马晓文莫炜宋后燕复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室上海200032

目的采用自行设计的CO2超临界流体(supercritical carbon dioxide,ScCO2)包衣设备研究肠溶包衣参数,为开发蛋白质及多肽的口服制剂提供工艺基础。方法以载牛血清白蛋白(bovine serumalbumin,BSA)颗粒为微丸核心,以EUDRAGIT L100-55作为p... 详细信息

目的采用自行设计的CO2超临界流体(supercritical carbon dioxide,ScCO2)包衣设备研究肠溶包衣参数,为开发蛋白质及多肽的口服制剂提供工艺基础。方法以载牛血清白蛋白(bovine serumalbumin,BSA)颗粒为微丸核心,以EUDRAGIT L100-55作为pH敏感的肠溶包衣材料,采用正交表研究压力、温度、增塑剂和包衣持续时间等不同的工艺参数组合,并考察肠溶包衣微丸的形态学和体外释放特性,以选择最优的二氧化碳超临界流体包衣工艺。结果压力为20MPa、温度为35℃、使用40%增塑剂的条件下包衣30min,所得BSA微丸在模拟胃液中释放量小于5%,在模拟肠液中迅速释放,符合肠溶包衣的要求。结论得到了通过ScCO2制备肠溶微丸的最优参数组合,为二氧化碳超临界流体包衣的进一步研究提供了基础。

关键词：二氧化碳超临界蛋白质肠溶包衣

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人脂联素球状结构域的表达、纯化和功能鉴定

复旦学报（医学版） 2006年第1期33卷 97-100页

作者：刘宏磊李希宋后燕汤其群复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室上海200032

目的表达和纯化人脂联素(adiponectin,APN)球状结构域并观察其生物学活性。方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globular domain of adiponectin,gAPN)的cDNA,并克隆于pET28a(+)原核表达载体中。将重组表达质粒pET28a(+)-gAPN转化大... 详细信息

目的表达和纯化人脂联素(adiponectin,APN)球状结构域并观察其生物学活性。方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globular domain of adiponectin,gAPN)的cDNA,并克隆于pET28a(+)原核表达载体中。将重组表达质粒pET28a(+)-gAPN转化大肠埃希菌BL21(DE3),37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存。然后,用链佐星(streptozocin,STZ)诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性。结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性。表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平。结论在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白。

关键词：脂联素重组蛋白表达与纯化高血糖模型

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SARS病毒:非典型肺炎相关病毒

生命的化学 2003年第3期23卷 165-166页

作者：童德妍汪晓华王缨储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫和疫苗研究中心上海200032

SARS是目前在世界范围内流行的严重呼吸系统疾病。SARS病毒是有包膜的正链RNA病毒 ,属冠状病毒科 ,为新近分离鉴定的该疾病相关病原体。初步预测该病毒的复制周期与其他冠状病毒类似 ,但其细胞膜受体结合蛋白S的S1区、M跨膜糖蛋白等部... 详细信息

SARS是目前在世界范围内流行的严重呼吸系统疾病。SARS病毒是有包膜的正链RNA病毒 ,属冠状病毒科 ,为新近分离鉴定的该疾病相关病原体。初步预测该病毒的复制周期与其他冠状病毒类似 ,但其细胞膜受体结合蛋白S的S1区、M跨膜糖蛋白等部分则存在较大的变异 ,可能是该病毒发生宿主改变的原因之一。此外 ,对SARS病毒的检测、临床诊断等方面也取得了一定的进展。

关键词： SARS病毒冠状病毒分离鉴定变异非典型肺炎