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导读与评议(2015年第5期)

微生物与感染 2015年第5期10卷 263-263页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿对治愈艾滋病（acquiredimmu-nodeficiencysyndrome，AIDS）的分析与预测进行了全面综述。鉴于人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）感染者体内HIV潜伏库细胞是造成病毒反弹的主要因素，近年来围绕该潜伏... 详细信息

本期特约专稿对治愈艾滋病（acquiredimmu-nodeficiencysyndrome，AIDS）的分析与预测进行了全面综述。鉴于人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）感染者体内HIV潜伏库细胞是造成病毒反弹的主要因素，近年来围绕该潜伏库发展出多种AIDS治愈的概念和策略。

关键词：人类免疫缺陷病毒导读 AIDS 艾滋病 HIV 治愈细胞

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不同劳动者类型脂代谢相关表型的差异分析

现代生物医学进展 2012年第16期12卷 3098-3101页

作者：林烂芳胡斌李淑元吕明杨亚军袁子宇王笑峰复旦大学生命科学学院现代人类学教育部重点实验室上海200433 山东大学公共卫生学院山东济南250000 山东大学齐鲁医院临床流行病学研究室山东济南250000 复旦大学泰州健康科学研究院江苏泰州225300

目的:比较体力劳动者与脑力劳动者在脂代谢相关表型方面是否有差异。方法:随机抽取泰州市30-75岁个体127例(体力劳动者63例,脑力劳动者64例),进行体力活动日记、身高、体重、腰围、臀围、收缩压、舒张压体格指标测量。取静脉血测量血清... 详细信息

目的:比较体力劳动者与脑力劳动者在脂代谢相关表型方面是否有差异。方法:随机抽取泰州市30-75岁个体127例(体力劳动者63例,脑力劳动者64例),进行体力活动日记、身高、体重、腰围、臀围、收缩压、舒张压体格指标测量。取静脉血测量血清空腹血糖(Glu)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG);使用酶联免疫吸附法测量血清中脂代谢生物标志物低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白A5(Apo A5)、载脂蛋白B100(Apo B100)、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTTP)。采用T检验和卡方检验统计方法比较体力劳动者与脑力劳动者脂代谢相关表型是否有统计学差异。结果:脑力劳动者组的体力活动能量消耗显著低于体力劳动者组(P分子水平都显著低于体力劳动者组(P<0.05)。结论:不同劳动类型影响脂代谢相关表型水平的高低。

关键词：体力劳动者脑力劳动者脂代谢相关表型

磷酸化AKT在卵巢癌中表达的临床意义及其与新癌基因REDD1表达的相关性研究

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安徽医科大学学报 2014年第12期49卷 1766-1770页

作者：孙丽丽朱慧敏庞丽娟梁伟华卢立霞杜金泽杜春芳贾薇常彬石河子大学医学院病理学系石河子832000 漯河医学高等专科学校第三附属医院妇产科漯河462000 石河子大学第一附属医院妇产科石河子832000 复旦大学附属肿瘤医院病理科上海200032

目的研究磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)在卵巢癌中的表达与卵巢癌患者的临床病理因子以及生存预后之间的关系,并分析p-AKT表达与发育及DNA损伤反应调节基因1(REDD1)表达的相关性。方法收集卵巢癌组织标本95例,交界性肿瘤23例,正常卵巢表面上... 详细信息

目的研究磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)在卵巢癌中的表达与卵巢癌患者的临床病理因子以及生存预后之间的关系,并分析p-AKT表达与发育及DNA损伤反应调节基因1(REDD1)表达的相关性。方法收集卵巢癌组织标本95例,交界性肿瘤23例,正常卵巢表面上皮和输卵管组织18例。采用免疫组织化学En Vision两步法检测p-AKT和REDD1的表达,分析p-AKT表达与患者临床病理因子(分期、分级、化疗反应、无瘤生存期和总体生存期等)的关系,并分析p-AKT和REDD1表达的相关性。结果 1卵巢癌组织中p-AKT表达率为55.8%(53/95),均高于卵巢正常上皮组织(16.7%)和卵巢交界性肿瘤组织(13.0%)(P0.05)。3 p-AKT在化疗无效组患者中的表达高于有效组(P<0.05)。4 pAKT蛋白高表达患者的总体生存期和无瘤生存期低于低表达者(P<0.05)。5卵巢癌中p-AKT的表达和REDD1的表达呈正相关性(C=0.626,P<0.05)。结论 p-AKT是影响卵巢癌患者化疗反应以及预后的一个重要因素;AKT可能被持续性高表达的REDD1激活,从而促进细胞增殖,参与卵巢癌的病理发生。

关键词：卵巢癌蛋白激酶B 发育及DNA损伤反应调节基因1 免疫组织化学

乙型肝炎病毒相关性慢性肝病中雄激素受体的表达及多态性研究

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乙型肝炎病毒相关性慢性肝病中雄激素受体的表达及多态性研究

作者：张俭省复旦大学

学位级别：硕士

据统计,在全世界的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中,我国约占一半。对慢性乙型肝炎的基础研究和临床诊疗一直是我国重点。由于慢性乙型肝炎病毒感染引起的相关肝脏病变,特别是肝细胞癌（HCC）在临床上表现出明显的男性发病倾向,雄激素... 详细信息

据统计,在全世界的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中,我国约占一半。对慢性乙型肝炎的基础研究和临床诊疗一直是我国重点。由于慢性乙型肝炎病毒感染引起的相关肝脏病变,特别是肝细胞癌（HCC）在临床上表现出明显的男性发病倾向,雄激素受体（AR）及其介导的信号通路的作用越来越引起人们的关注。HBV的某些因子与AR相互作用被认为是HBV相关HCC形成的一个重要机制。关于AR在正常肝组织和肝癌组织的表达目前还存在争议：早期对AR表达水平的研究多采用非直接的结合分析法,并非采用抗体直接检测,结果不够精准,而且不同的抗体其制备方法和质量也存在一定差异。更为重要的是,以往的研究多为小样本研究,对于HCC的病因或疾病背景也未加区分,HBV相关HCC中AR的表达还未见有较大病例数的文献报道。采用更为精确的定量方法,区分病因检测AR在HCC和肝脏中的表达成为必要。近年来陆续有研究表明,在体外HBx可通过影响蛋白小体的活性使AR的稳定性增加,从而提高细胞内AR蛋白的含量;对肝细胞系和HBx转基因鼠的研究表明,HBx蛋白可增强AR的转录活性,在与AR相关的致病与致癌过程中发挥了重要的作用。而在人体组织内,有关HBx蛋白和AR之间的关系目前还不明确。在结构上,AR基因第一外显子中含有两个三核苷酸重复序列,体外研究显示,CAG和GGC重复序列的长度和AR受体的表达及活性均密切相关。在对前列腺癌临床病例的研究中发现,CAG和GGC重复序列的长度与前列腺癌病人的发病风险、分级、进展和转移均有关。在对HCC的研究中也发现,CAG和GGC重复序列的长度与发病风险存在一定关系,但所见报道不多,其机制还不明确。目前,关于CAG和GGC重复序列在除HCC以外的其他HBV相关慢性肝病中的分布以及和肝脏病变之间的相关性还少有报道,CAG和GGC重复序列的多态性是否与慢性乙型肝炎患者的预后相关还不明确。本研究以HBV感染相关性慢性肝病（以慢性乙型肝炎和HBV相关HCC为主）为研究对象,通过对AR和HBx表达水平的研究,明确AR和HBx之间的相互关系,明确AR基因的多态性分布,以及和慢性乙型肝炎患者预后的关系。第一部分慢性乙型肝炎病毒感染的流行病学目的：明确慢性HBV感染和流行的特点,以及和HCC发生的关系。在明确HCC发病率在世界分布的同时,提出主要高危因素,明确本研究的目的和意义。方法：对近十年内有关HBV感染和HCC的流行病学、病因学和发病机制的文献进行归纳总结。结果：HBV在全球范围内感染率很高,尤其亚洲、非洲、南部欧洲和拉丁美洲是HBV感染的高发区和流行区,全世界慢性HBV感染的病例中有一半在中国。HBV感染与HCC的发生密切相关,特别是在HBV感染后发生肝硬化的病人,HCC的发生率可比正常人群高1000倍。HBV感染最严重的转归之一就是发生HCC,中国的HCC绝大多为HBV相关型,HCC病人的HBV标志物阳性率更高达90%左右。结论：临床上HBV相关慢性肝病表现出明显的性别差异,总体来说男性患者所占比率明显高于女性,男性更是HBV相关HCC发生中的一个重要独立风险因子。雄激素受体（AR）与HBV的某些因子相互作用可能在HBV相关HCC形成中发挥了重要作用,而HBx蛋白与AR的关系目前还未见有报道。在结构上AR基因第一外显子含有两个三核苷酸重复序列,关于CAG和GGC重复序列在除HCC以外的其他HBV相关慢性肝病中的分布以及和肝脏病变之间的相关性还少有报道,CAG和GGC重复序列的多态性是否与慢性乙型肝炎患者的预后相关还不明确。第二部分雄激素受体在乙型肝炎病毒相关性慢性肝病中的表达目的：以83例HBV相关HCC和189例慢性乙型肝炎肝穿刺标本作为研究对象,通过对AR蛋白水平和mRNA水平的检测,明确AR在HBV相关性慢性肝病中的表达,以及和HCC患者及慢性乙型肝炎病人临床病理学指标的联系;并通过设立HBV阴性的对照组,探讨AR在HBV相关致病和致癌中的作用。方法：选取复旦大学附属中山医院肝肿瘤外科2007-2008年间83例HBV相关HCC部分肝切除新鲜标本作为研究对象、14例HBV阴性的HCC患者部分肝切除新鲜标本作为对照、13例肝血管瘤患者的瘤旁新鲜肝组织作为良性对照;同时选取复旦大学上海医学院病理学系存档的1988-2002年间189例慢性乙型肝炎肝穿刺活检病例作为研究对象、75例病理诊断为“无病理诊断性异常”的肝穿刺病例作为阴性对照。荧光定量real-time RT PCR检测AR和HBx在mRNA水平的表达;Western blot检测AR和HBx蛋白表达的定量;免疫组化染色En Vision二步法检测AR和HBx蛋白的组织内表达。结果：在mRNA水平,HBV相关HCC癌旁组织（P

关键词：雄激素受体乙型肝炎病毒肝细胞癌 X蛋白多态性

正常及早期糖尿病大鼠视网膜的蛋白组学初步研究

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正常及早期糖尿病大鼠视网膜的蛋白组学初步研究

作者：陈涵复旦大学

学位级别：硕士

糖尿病及其并发症的防治是关乎国计民生的重大课题,糖尿病眼部并发症占到糖尿病并发症的20%～24%,其中糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)是最主要的致盲原因。长久以来DR的血管病变机制一直是临床防治及基础研究的重点。然而... 详细信息

糖尿病及其并发症的防治是关乎国计民生的重大课题,糖尿病眼部并发症占到糖尿病并发症的20%～24%,其中糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)是最主要的致盲原因。长久以来DR的血管病变机制一直是临床防治及基础研究的重点。然而近十年来DR的发病机制研究已逐渐转向了对早期糖尿病视网膜神经退行性变原因的探讨。糖尿病作为一种多因素的全身性疾病,高糖代谢、超氧化物和糖基化终末产物(AGEs)等代谢毒性物质的积聚、缺血缺氧、氧化应激、炎症及免疫反应等等均可最终导致神经组织凋亡、胶质增生等病理改变。糖尿病发病伊始有哪些蛋白因子作为“扳机”触发了这些病理改变呢?随着病程的延长,又有哪些因子参与进来呢?它们之间有哪些联系呢?近年来迅速发展的蛋白质组学研究,具有观察由多基因事件引起的多蛋白质组分整体变化的独特优势,更接近生命现象的本质,能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化,对于探讨疾病机理、寻找疾病诊断的特异标志物和药物治疗的靶标来说,是一种有效的高通量的研究模式,可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物和关键分子,极大地丰富诊断标志物的选择组合,并有助于复杂致病机理的全面阐明,目前已被广泛用于研究各种疾病的发生、发展规律,并取得了很多重大的成就。本硕士研究生论文工作是复旦大学眼耳鼻喉科医院玻璃体视网膜疾病课题组与复旦大学上海医学院生物医学平台的合作项目。本研究工作的主要贡献为:采用STZ诱导的糖尿病大鼠模型,对成模早期(成模后1,2,4,6,8周内)5组时点及正常大鼠的神经视网膜进行了蛋白组学液相色谱串联质谱分析。研究初步建立了基本的正常大鼠视网膜的蛋白谱,以此作为研究早期糖尿病大鼠视网膜蛋白表达差异的基础线,我们对各时点比较后得到差异蛋白,筛选早期糖尿病视网膜神经病变相关因子,同时按早期糖尿病病程建立时间梯度曲线,从而为进一步纵向功能性研究打下基础。为临床糖尿病视网膜病变的早期防治提供了新思路。本论文由四部分组成。第一章前言首先概述了早期糖尿病视网膜病变机制的研究进展,提出早期糖尿病视网膜即可出现神经退行性变,其病变机制是由多因素、多通路控制的,故而需要引入蛋白组学为研究开拓思路,提供新线索。然后概述了蛋白质组学这一新兴学科发展现状和技术进展,包括双相凝胶电泳技术,生物质谱技术,色谱分离技术,蛋白质芯片技术等。然后概述了蛋白组学在糖尿病视网膜病变机制研究中的应用进展,提出本课题工作的研究方向。第二章所述工作为论证蛋白组学研究视网膜样本的可行性,以及选择恰当的蛋白组学研究方案,先用正常大鼠神经视网膜样品进行蛋白组学预试验。本实验中共从6只SD大鼠、12只眼的神经视网膜中提取到了蛋白3 mg,进行2-PADE电泳跑胶,考马斯亮蓝染色后得到了清晰的条带和蛋白点。故提示大鼠视网膜的蛋白组研究对蛋白样品量要求至少达到3mg以上,才能得到较清晰的结果。也就是实验设计中要求每组样品至少有6只以上大鼠的双眼视网膜方可达到蛋白组分析的定量要求。为了提高研究的敏感性及特异性,最终决定采用蛋白组学液相色谱串联质谱分析法(SCX-RPLC-MSMS)作为研究方法。第三章所述工作用高剂量(65mg/kg)STZ成功建立了Ⅰ型糖尿病大鼠模型,共有43只大鼠成模,造模成功率为74.1%。大鼠模型表现出典型Ⅰ型糖尿病症状。5组糖尿病大鼠自成模后血糖浓度保持在16.7mmol/L以上,并且较稳定。对照组血糖浓度无明显波动,基本在5.88±0.01mmol/L左右。糖尿病大鼠体重随着日龄的增加而减轻,对照组的体重随着日龄的增加而增加。本实验所用的模型为糖尿病模型造模成功后8周、6周、4周、2周及1周内的大鼠,为目前公认的早期糖尿病大鼠模型。第四章所述工作建立了正常大鼠神经视网膜全蛋白质表达谱并且以正常组为基线,对5组时点的早期糖尿病大鼠神经视网膜进行了液相色谱串联质谱分析。共获得207个差异蛋白的定性定量信息。这些差异蛋白中有11个仅存在于正常大鼠视网膜中,其余为正常及早期糖尿病大鼠视网膜所重叠共有,并且随病程的发展其表达在各时点有所不同。其中又有177个从发病后一周及两周后就出现了显著的表达变化,并且随病程的发展呈现不同的变化曲线。这些差异蛋白涉及多种蛋白功能,如细胞结构、信号转导、代谢调控、应激反应、神经元功能、视觉功能等等。由于蛋白数量庞大,蛋白的分类及功能论证工作尚未完成,故而无法对所有差异蛋白进行全面阐述。本文仅着重探讨了以下几种具有重要意义的蛋白:高移动族核小体结合域家族的Hmgn1、酪氨酸3单加氧酶(Ywhag 14-3-3 protein)、神经元蛋白激酶酪氨酸底物(Pacsin1,Protein kinase C and caseinkinase sub

关键词：糖尿病视网膜病变蛋白质组学液相色谱双相凝胶电泳质谱全蛋白质谱差异表达谱

卡介菌多糖核酸免疫治疗结核病小鼠的实验研究

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世界感染杂志 2005年第6期5卷 529-529页

作者：任涛蔡映云金美玲李传友袁正宏田苗赵冰复旦大学附属中山医院呼吸病研究所上海200032 复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部卫生部重点实验室上海200032 北京市结核病胸部肿瘤研究北京101149

从CaN信号通路探讨川芎嗪对Ang Ⅱ诱导的大鼠VSMCs增殖的抑制作用及机制

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上海中医药杂志 2006年第5期40卷 46-49页

作者：李映红吴正治郑红花罗德生吴伟康咸宁学院医学院生物化学与分子生物学系湖北咸宁437100 广东省深圳市中西医结合临床研究所广东深圳518035 中山大学基础医学院广东广州510080

目的从钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及机制。方法以AngⅡ诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立细胞增殖模型,实验分为空白组、AngⅡ组、AngⅡ+川芎嗪... 详细信息

目的从钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及机制。方法以AngⅡ诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立细胞增殖模型,实验分为空白组、AngⅡ组、AngⅡ+川芎嗪(低、中、高)剂量组。采用定磷法分别测定各组细胞CaM和CaN活性,MTT法检测细胞增殖活度的变化,免疫组化定量技术观察细胞内c-myc、PCNA的表达水平。结果AngⅡ组VSMCs细胞增殖活度(吸光度值)、胞内CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达量(光密度值)显著高于空白组(P<0.01);同时加入不同剂量(低、中、高剂量)川芎嗪温育,各组CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论川芎嗪可通过降低细胞内CaM、CaN活性,下调胞内c-myc、PCNA表达水平,从而显著抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。

关键词：川芎嗪药理学血管平滑肌细胞钙调神经磷酸酶增殖

phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较

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生殖医学杂志 2004年第4期13卷 205-212页

作者：王秀丽李大金袁敏敏朱影复旦大学附属妇产科研究所上海200011

目的　比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。　方法　利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化... 详细信息

目的　比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。　方法　利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1 6His hCGβ C3d3;脂质体法介导phCMV1 6His hCGβ C3d3和pcDNA3 hCGβ C3d3转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg/ml)筛选抗性克隆 ,G4 18(30 0 μg/ml)维持培养、扩增 ,待阳性克隆 95 % 汇片时换用无血清培养基培养。放射免疫法检测hCGβ表达量 ,Westernblot鉴定表达产物 ,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合。反复冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,比较表达效率的变化。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。　结果　酶切鉴定及测序证实 phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确 ,并成功地在CHO细胞中获得了 6His hCGβ C3d3融合蛋白的表达。无血清培液中 2 4、4 8、72h融合蛋白的表达量分别为 4 96、5 2 7、6 33mIU/ml/ 1× 10 6细胞 (以hCGβ含量计算 ) ,phCMV1比 pcDNA3载体的表达效率高 1.4倍。 3次冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,表达效率无明显变化。表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ C3d3?

关键词： phCMV1 pcDNA3 人绒毛膜促性腺激素β C3d3 蛋白表达

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导读与评议(2017年第3期)

微生物与感染 2017年第3期12卷 131-131页

作者：瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目前,人体微生物组已成为生物医学研究的热点,有关成果将改变以往人们对微生物的认识。本刊特邀请有关专家撰写了人体微生物组方面的文章。郭晓奎教授在《人体微生物群与微生物组》一文中,对微生物群和微生物组的概念进行了解释,阐述了... 详细信息

目前,人体微生物组已成为生物医学研究的热点,有关成果将改变以往人们对微生物的认识。本刊特邀请有关专家撰写了人体微生物组方面的文章。郭晓奎教授在《人体微生物群与微生物组》一文中,对微生物群和微生物组的概念进行了解释,阐述了人体微生物群与机体的相互作用模式,概括了微生物群与人体有关疾病的关系,提出了人体微生物组研究中亟待解决的问题：基础研究技术的发展、相关数据的规范化和挖掘、微生物群与宿主如何相互作用、人体微生物群致病机制、以微生物群为靶标的疾病诊断技术和产品及干预技术和产品的研发、相关诊断和干预技术或产品的规范管理.

关键词：相互作用模式微生物群诊断技术导读生物医学基础研究致病机制产品