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趋化因子IP10抑制乳腺癌细胞4T1播散转移的研究

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中华医学杂志 2006年第3期86卷 176-181页

作者：杨秀利储以微徐林李宝华熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室 200032

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移... 详细信息

目的观察增强IP10在肿瘤局部的表达对乳腺癌细胞4T1远端播散转移的作用。方法用电转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株IP10-4T1。将BALB/c小鼠分为IP10-4T1细胞组、4T1细胞组和转染pcDNA3的4T1细胞组(pcDNA3-4T1)。利用实验性肺转移模型和体外杀伤实验研究接种IP10-4T1对4T1细胞播散转移的影响。结果IP10-4T1细胞中IP10mRNA转录水平相对含量为0.92±0.12与未转染的4T1细胞(0.35±0.12)和pcDNA3-4T1细胞(0.29±0.08)比较差异有统计学意义(P实验性肺转移结果显示,IP10-4T1组小鼠肺重为0.27g±0.02g,与4T1细胞组(0.48g±0.08g)和pcDNA3-4T1组(0.43g±0.16g)比较明显减轻(P=0.021);其肺表面形成的转移结节数较对照组少;IP10-4T1组肺组织中形成的4T1细胞克隆数为2.6±1.7,明显低于4T1组(34.0±6.3)和pcDNA3-4T1组(33.0±2.3,P免疫应答水平,通过肿瘤特异性的杀伤作用,抑制肿瘤细胞在体内播散转移。

关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞培养

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BALB/c小鼠胸腺细胞发育模型的建立

复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 571-575页

作者：邵先安张瑞华蒋正刚孙志平储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的建立胸腺细胞体外研究模型,为T细胞早期发育及相关实验提供有效技术平台。方法无菌摘取14.5天龄胚鼠胸腺,胸腺器官体外培养,FACS检测不同培养时间点细胞存活状况和表型变化,计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果胸腺体外培养显示:经... 详细信息

目的建立胸腺细胞体外研究模型,为T细胞早期发育及相关实验提供有效技术平台。方法无菌摘取14.5天龄胚鼠胸腺,胸腺器官体外培养,FACS检测不同培养时间点细胞存活状况和表型变化,计数每个胸腺小叶的细胞数变化。结果胸腺体外培养显示:经过6d的培养,胸腺细胞存活率均在88.0%以上,由双阴性发育至双阳性细胞,CD4+CD8+双阳性细胞由培养第0天的0上升到第6天的89.07%;细胞数量随胸腺发育(培养时间的增加)而增多,每个胸腺小叶胸腺细胞数量也由培养0d的0.75×104个上升到第6天的1.38×106个。而体内数据显示:胸腺细胞由胚龄14.5d的双阴性阶段发育到新生鼠的双阳性阶段,每个胸腺小叶细胞数量由14.5d的0.75×104个上升到新生鼠的2.56×106个,同时间段CD4+CD8+双阳性细胞比例由0上升到91.22%。体内、外胸腺细胞表型、数量变化趋势一致。结论体外培养状态下胸腺细胞数量和表型变化与体内自然变化趋势一致,在体外培养可以模拟体内胸腺细胞由双阴性到双阳性的发育过程,这将为T细胞发育的研究提供简易、有效的技术平台。

关键词：胸腺细胞双阳性双阴性模型

HIPK2在IL-2撤除诱导T细胞凋亡中的作用

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复旦学报（医学版） 2005年第6期32卷 631-635页

作者：邓富刚王缨熊思东储以微任学芳陈晓菁杨秀利复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究同源结构域相关的蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinase2,HIPK2)在白介素2(interleukin2,IL-2)撤除诱导的T细胞凋亡中的表达及其作用。方法IL-2依赖性的T细胞株(CTLL-2),撤除IL-2后可诱导凋亡。运用PI染色和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,实时定量RT-PCR检测HIPK2及其他细胞凋亡相关基因的表达。通过反义技术下调HIPK2的表达,观察HIPK2在IL-2撤除诱导的T细胞凋亡中的作用。结果随IL-2撤除时间延长,CTLL-2细胞凋亡率增加,细胞基因组DNA发生了明显片段化。参与死亡受体凋亡途径的基因FasL和Fas表达没有明显改变(P>0.05),Bcl-2家族中促凋亡基因Bi m表达明显上调(P基因Bcl-xL表达明显下调(P基因Bi m的表达被显著下调(P基因Bcl-xL明显上调(P基因Bi m和下调抗凋亡基因Bcl-xL的表达相关。

关键词：同源结构域相关的蛋白激酶2 白细胞介素2撤除凋亡

α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用

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中国免疫学杂志 2005年第1期21卷 8-12页

作者：张瑞华张进平何叶成苏丽萍熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的 :研究α DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法 :摘取 15日龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α DG的表达水平 ;于胸腺小叶上滴加α DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞... 详细信息

目的 :研究α DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法 :摘取 15日龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α DG的表达水平 ;于胸腺小叶上滴加α DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞表面CD4、CD8等的表达。结果 :15～ 19天胸腺CD4 -CD8-、CD4 + CD8+ 、CD4 -CD8+ 、CD4 + CD8-等细胞上均有不同水平的α DG表达 ;α DG抗体的干扰使胸腺T细胞发育明显受阻 ,表现为 :双阴性细胞比例极显著的增高从对照组的 2 6 5 3%到干扰组的 71 6 0 %、双阳性细胞和CD8单阳性细胞比例显著下降 ,从 39 81%、2 0 6 6 %分别下降到 7 5 0 %、6 85 %、CD4单阳性细胞比例无明显变化 ;同时胸腺细胞数目明显减少 ;随胸腺发育时间的延长和α DG抗体的持续存在 ,上述现象明显加剧。结论 :α DG广泛表达在胸腺细胞上 ,并参与胸腺T细胞的发育和分化。

关键词：器官培养胸腺分化发育 T细胞成熟

人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定

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复旦学报（医学版） 2003年第5期30卷 409-413,F002页

作者：杨健王跃祥官孝群马春姑陶贤梅宋后燕复旦大学上海医学院细胞与遗传学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片... 详细信息

目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果　构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论　应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。

关键词：乳腺癌基因治疗重组新生血管生成抑制因子K5 基因表达真核表达载体构建活性鉴定

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集聚蛋白在免疫细胞中的表达及其意义

现代免疫学 2005年第2期25卷 102-107页

作者：张进平苏丽萍乔滨徐焕宾张瑞华储以微王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

为研究在神经突触中发挥重要作用的突触调节蛋白集聚蛋白是否在免疫细胞中表达并影响淋巴细胞的活化。首先通过RT-PCR、荧光免疫组织化学和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察集聚蛋白在各种免疫器官、细胞中的表达;通过实时定量PCR检测... 详细信息

为研究在神经突触中发挥重要作用的突触调节蛋白集聚蛋白是否在免疫细胞中表达并影响淋巴细胞的活化。首先通过RT-PCR、荧光免疫组织化学和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察集聚蛋白在各种免疫器官、细胞中的表达;通过实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达与淋巴细胞活化的关系;并构建针对集聚蛋白的反义质粒,从而进一步研究下调集聚蛋白的表达对淋巴细胞活化的影响。结果发现集聚蛋白广泛表达于脾脏、胸腺、淋巴结等多种免疫器官中并在T细胞、B细胞、imDC、mDC及巨噬细胞中均有表达,其表达含量与淋巴细胞的活化状态密切相关,且其表达被下调后淋巴细胞的活化显著被抑制。因而组成性表达于各种免疫细胞中的集聚蛋白可被诱导性上调,并参与了淋巴细胞的活化。

关键词：集聚蛋白反义cDNA 淋巴细胞的活化

CXCL16在小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 282-285页

作者：徐焕宾龚燕萍蒋正刚刘瑞梓熊思东复旦大学上海医学院免疫系教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型,通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化,根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析,比较CXCL16... 详细信息

目的研究CXCL16的表达对小鼠免疫性肝损伤中的作用及意义。方法建立卡介苗和内毒素诱导的小鼠肝损伤模型,通过实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学分析CXCL16在肝组织中的表达变化,根据肝脏病理变化和免疫组织化学结果分析,比较CXCL16的表达水平和肝脏损伤程度的关系。从模型中各个时间点的肝损伤组织中分离浸润单核细胞,计算浸润的细胞数量变化,并进一步分析其中主要的CD4和CD8T淋巴细胞亚群的数量变化,研究CXCL16在肝脏炎症和损伤中的作用和意义。结果成功复制了小鼠免疫性肝损伤模型,发现在肝脏炎症和损伤中CXCL16表达水平显著上调,CXCL16的表达水平与肝脏损伤程度密切相关,肝脏组织浸润的单核细胞数量明显增加,淋巴细胞尤其是CD4+、CD8+T淋巴细胞数量也有明显的增加。结论小鼠肝脏损伤过程中CXCL16表达水平的增加与肝损伤程度密切相关,CXCL16趋化淋巴细胞浸润可能是导致肝脏损伤的重要机制之一。

关键词： CXCL16 小鼠免疫性肝损伤趋化因子类淋巴细胞

真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果

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中国免疫学杂志 2007年第1期23卷 6-10,15页

作者：袁志刚张进平王缨储以微徐薇熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海200032

目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核... 详细信息

目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P免疫应答。

关键词：真核化的原核表达系统基因免疫 HBV

糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义(英文)

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生理学报 2003年第5期55卷 525-529页

作者：刘全胜 Marit Nilsen-Hamilton 熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032 Biochemistry Biophysics and Molecular Biology Iowa State University Ames IA 5001 I USA

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的^(35)S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表... 详细信息

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的^(35)S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24/24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同调控作用。结果显示:(1)在Balb/c 3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24/24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;(2)在Balb/c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24/24p3;(3)在Balb/c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24/24p3有协同诱导效应,而在 BNL细胞中 dexamethasone与 TNF-α对 SIP24/24p3的诱导表现为相加效应;(4)在 Balb/c 3T3和BNL细胞中 dexamethasone与IL-6/TNF-α对SIP24/24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24/24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24/24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24/24p3能同时被炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重?

关键词：应急时相反应蛋白SIP24/24p3 ^35S代谢标记糖皮质激素白介素6 肿瘤坏死因子α