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集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 555-558页

作者：张进平苏丽萍乔宾徐焕宾张瑞华储以微王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细... 详细信息

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系;用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响;应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达,且经过实时定量PCR分析发现,集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关;当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制;经共聚焦显微镜观察发现,集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在,且和CD3分子共定位,抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞,可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。

关键词：集聚蛋白淋巴细胞活化免疫突触 RT-PCR检测实时定量PCR 神经突触形成淋巴细胞增殖活化淋巴细胞蛋白抗体微镜观察

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粘蛋白1及其介导的肿瘤免疫

现代免疫学 2004年第1期24卷 74-76页

作者：夏明灿储以微复旦大学上海医学院免疫学系、上海基因免疫与疫苗研究中心，上海200032

粘蛋白 1(MUC1)是一种分布于腺上皮细胞的跨膜糖蛋白 ,在保护细胞免受外界不良因素的影响及介导细胞信号传导方面具有重要的生物学功能。MUC1也参与了多种疾病的发生 ,由于MUC1在肿瘤细胞表面表达量升高 ,同时肿瘤细胞表面MUC1的糖基化... 详细信息

粘蛋白 1(MUC1)是一种分布于腺上皮细胞的跨膜糖蛋白 ,在保护细胞免受外界不良因素的影响及介导细胞信号传导方面具有重要的生物学功能。MUC1也参与了多种疾病的发生 ,由于MUC1在肿瘤细胞表面表达量升高 ,同时肿瘤细胞表面MUC1的糖基化与正常细胞存在差异 ,因此它在肿瘤疾病的发生、发展及肿瘤治疗中发挥了重要作用 ,受到了广泛的重视。

关键词：粘蛋白1 介导肿瘤免疫治疗

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淋巴细胞的活化和抗核抗体的生成

上海免疫学杂志 2002年第5期22卷 289-292页

作者：吴厚生储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

抗核抗体 (ANA )是系统性风湿性疾病的标志性抗体。然而 ,有关ANA产生的启动原目前尚不完全清楚。我们自 90年代初开始了ANA启动原的研究 ,获得了一系列研究结果 ,从而提出以下ANA生成的启动原的新观点 :(1 )自身核抗原的改变是驱动ANA... 详细信息

抗核抗体 (ANA )是系统性风湿性疾病的标志性抗体。然而 ,有关ANA产生的启动原目前尚不完全清楚。我们自 90年代初开始了ANA启动原的研究 ,获得了一系列研究结果 ,从而提出以下ANA生成的启动原的新观点 :(1 )自身核抗原的改变是驱动ANA生成的启动原 ;(2 )活化淋巴细胞的核抗原发生量与性质的改变 ,是引起ANA生成的最主要原因 ;(3 )系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血B和T淋巴细胞已被活化 ;(4)在一定条件下活化淋巴细胞才能诱导ANA生成 ;(5 )ANA生成是有规律的 ,先出现少数ANA ,后陆续出现众多ANA ,即表位扩展 ;(6 )SLE反应 (自身免疫性 )在一定条件下可发展成SLE样病 (自身免疫病 )。

关键词：抗核抗体活化淋巴细胞表位扩展 ANA 自身免疫疾病

超抗原SEA对CD4^+T细胞TCR V_β链的取用格局

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上海免疫学杂志 2002年第5期22卷 316-318,321页

作者：张瑞华储以微王缨刘瑞梓熊思东复旦大学上海医学院免疫学系上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

用超抗原葡萄球菌肠毒素A (SEA )在体内或体外刺激C57BL/ 6小鼠 2种不同的TCRVβ链T细胞亚群 (Vβ3+ CD4+ 、Vβ1 1 + CD4+ T细胞 ) ,观察二者对超抗原的免疫应答。结果显示 :体内初次刺激后 ,2种T细胞亚群在刺激后第 2天都发生增殖 ,... 详细信息

用超抗原葡萄球菌肠毒素A (SEA )在体内或体外刺激C57BL/ 6小鼠 2种不同的TCRVβ链T细胞亚群 (Vβ3+ CD4+ 、Vβ1 1 + CD4+ T细胞 ) ,观察二者对超抗原的免疫应答。结果显示 :体内初次刺激后 ,2种T细胞亚群在刺激后第 2天都发生增殖 ,随后均逐渐下降至对照水平。但第 2次用同样剂量刺激后 ,Vβ3+ CD4+ T细胞群对SEA的再次刺激表现出增殖 ,而Vβ1 1 + CD4+ T细胞群对SEA再次刺激则表现出免疫无能。体外初次、再次刺激也分别获得与体内实验相同的结果。表明超抗原SEA可选择性地取用Vβ3+ CD4+ T细胞群并对其发生增殖 ,即超抗原SEA对CD4+ T细胞TCRVβ链的取用格局各有不同。

关键词：超抗原 TCR Vβ链取用格局葡萄球菌肠毒素A 免疫应答

电转染技术结合初免后加强免疫策略增强结核杆菌核酸疫苗免疫原性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 127-131页

作者：宋丹张颖黄嘉璐王晓一何为刘庆良张洪勇熊思东李忠明上海海规生物科技有限公司上200436 复旦大学医学院免疫学系上海市基因免疫和疫苗研究中心

目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗... 详细信息

目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗，同时于注射部位施加方型波电脉冲促进质粒DNA体内转染；进行3次初免，再用相应蛋白质抗原或卡介苗加强免疫。结果肌肉注射10μg核酸疫苗加电转染能诱导出与不用电转染接种100μg核酸疫苗相似或更强的抗体免疫应答。初免后采用相应蛋白加强后小鼠产生的免疫应答偏向于TH2型，血清特异性抗体的几何平均滴度比加强前提高5—76倍。而用卡介苗加强免疫，产生的免疫应答偏向TH1型。结论采用电转染技术结合蛋白质或卡介苗加强免疫策略，能显著增强结核杆菌核酸疫苗在动物体内的免疫原性。

关键词：结核病疫苗体内电转染 DNA初免和加强免疫策略免疫原性

ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用

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复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 505-508页

作者：乔滨徐薇陈刚张凤杨秀利熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因与疫苗研究中心上海200032

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细... 详细信息

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6(IL6)、白细胞介素12(IL12)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的分泌情况。结果ALDDNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)II类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL6、IL12和TNFα。结论ALDDNA对RAW264.7细胞具有免疫刺激作用。

关键词：活化淋巴细胞来源的DNA 巨噬细胞免疫刺激

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新生儿免疫的新认识:是耐受还是免疫?

上海免疫学杂志 2001年第5期21卷 315-316页

作者：吕顺吴远非熊思东上海基因免疫与疫苗研究中心复旦大学医学院免疫学教研室

随着对树突状细胞 (DC ) ,新生鼠保护性CTL的诱导 ,新生鼠Th1和Th2免疫应答诱导等的深入研究 ,引发了对新生儿免疫的重新认识。本文综述了对新生儿免疫耐受的研究以及树突状细胞、抗原剂量、免疫方式。

关键词：新生儿耐受免疫新生儿免疫 DC 抗原细胞因子

α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用

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中国免疫学杂志 2005年第1期21卷 8-12页

作者：张瑞华张进平何叶成苏丽萍熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的 :研究α DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法 :摘取 15日龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α DG的表达水平 ;于胸腺小叶上滴加α DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞... 详细信息

目的 :研究α DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法 :摘取 15日龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α DG的表达水平 ;于胸腺小叶上滴加α DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞表面CD4、CD8等的表达。结果 :15～ 19天胸腺CD4 -CD8-、CD4 + CD8+ 、CD4 -CD8+ 、CD4 + CD8-等细胞上均有不同水平的α DG表达 ;α DG抗体的干扰使胸腺T细胞发育明显受阻 ,表现为 :双阴性细胞比例极显著的增高从对照组的 2 6 5 3%到干扰组的 71 6 0 %、双阳性细胞和CD8单阳性细胞比例显著下降 ,从 39 81%、2 0 6 6 %分别下降到 7 5 0 %、6 85 %、CD4单阳性细胞比例无明显变化 ;同时胸腺细胞数目明显减少 ;随胸腺发育时间的延长和α DG抗体的持续存在 ,上述现象明显加剧。结论 :α DG广泛表达在胸腺细胞上 ,并参与胸腺T细胞的发育和分化。

关键词：器官培养胸腺分化发育 T细胞成熟

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集聚蛋白在免疫细胞中的表达及其意义

现代免疫学 2005年第2期25卷 102-107页

作者：张进平苏丽萍乔滨徐焕宾张瑞华储以微王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

为研究在神经突触中发挥重要作用的突触调节蛋白集聚蛋白是否在免疫细胞中表达并影响淋巴细胞的活化。首先通过RT-PCR、荧光免疫组织化学和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察集聚蛋白在各种免疫器官、细胞中的表达;通过实时定量PCR检测... 详细信息

为研究在神经突触中发挥重要作用的突触调节蛋白集聚蛋白是否在免疫细胞中表达并影响淋巴细胞的活化。首先通过RT-PCR、荧光免疫组织化学和FACS分别从mRNA水平和蛋白水平观察集聚蛋白在各种免疫器官、细胞中的表达;通过实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达与淋巴细胞活化的关系;并构建针对集聚蛋白的反义质粒,从而进一步研究下调集聚蛋白的表达对淋巴细胞活化的影响。结果发现集聚蛋白广泛表达于脾脏、胸腺、淋巴结等多种免疫器官中并在T细胞、B细胞、imDC、mDC及巨噬细胞中均有表达,其表达含量与淋巴细胞的活化状态密切相关,且其表达被下调后淋巴细胞的活化显著被抑制。因而组成性表达于各种免疫细胞中的集聚蛋白可被诱导性上调,并参与了淋巴细胞的活化。

关键词：集聚蛋白反义cDNA 淋巴细胞的活化