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整合NDV-F基因的重组MDV载体疫苗的构建

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 52-58页

作者：龚乐乐刘盼王乐乐王芮高美洁赵旭阳王新卫杜永坤庄国庆孙爱军河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心河南郑州450046

为了预防马立克氏病毒(Marek’s disease virus,MDV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)混合感染给养禽业造成的危害,本研究以细菌人工染色体(BAC)为基因编辑平台,利用Red同源重组技术,将NDV的F基因整合到MDV双基因缺失毒株Md5 ... 详细信息

为了预防马立克氏病毒(Marek’s disease virus,MDV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)混合感染给养禽业造成的危害,本研究以细菌人工染色体(BAC)为基因编辑平台,利用Red同源重组技术,将NDV的F基因整合到MDV双基因缺失毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9基因组中,诱导Ⅰ-SceⅠ酶表达,将筛选标记卡那霉素抗性基因敲除,构建重组活载体疫苗候选毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9-F。PCR以及限制性片段多态性(RFLP)分析结果显示F基因成功整合到MDV基因组且重组质粒基因组完整;将鉴定正确的重组质粒转染鸡胚成纤维细胞,1周后出现明显的细胞病变,且噬斑大小与亲本毒无明显差异;体外生长曲线结果显示,F基因的插入不影响病毒的体外复制能力。结果表明,本研究正确构建了表达NDV保护性抗原F基因的重组MDV,为研制ND重组MDV活载体疫苗奠定了基础,对NDV和MDV混合感染的防控具有重要意义。

关键词：细菌人工染色体马立克氏病病毒新城疫病毒活载体疫苗

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夏季北黄海贝类养殖区环境因子、长牡蛎糖原和免疫指标变化的调查

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水产学报 2024年第4期48卷 167-178页

作者：高磊孔宁刘冉阳赵俊彦邢镇张子杨赵宝李庆嵩付强王文彪李磊王玲玲宋林生大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室辽宁省海洋动物免疫学重点实验室大连玉洋集团股份有限公司

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎机体响应特征，实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示，7月海区表层水温分别为25.3和24.9°C，盐度分别为26.41和27.87；表层海水中硅藻丰度分别为3.6... 详细信息

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎机体响应特征，实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示，7月海区表层水温分别为25.3和24.9°C，盐度分别为26.41和27.87；表层海水中硅藻丰度分别为3.6×10～3和3×10～3个/L，低于往年平均水平，甲藻多样性增加，表层海水中细菌的总丰度分别为2.10×10～9和2.77×1010个/L，弧菌丰度分别为3.37×10～8和5.40×10～8个/L；长牡蛎肝胰腺糖原含量分别为40.96和31.58 mg/g、闭壳肌糖原含量分别为6.63和8.91 mg/g；鳃丙二醛（MDA）含量分别为13.74和8.69 nmol/mg prot、鳃总抗氧化能力（T-AOC）分别为0.46和0.77 U/mg prot；海区养殖长牡蛎血淋巴细胞中Cg IL17-5和Cg TNF-1的mRNA表达量在第一次调查时相对室内暂养长牡蛎均剧烈升高；血淋巴细胞中Cg Caspase3的mRNA表达量升高但差异不显著。研究表明，2021年北黄海贝类养殖区在经历6—7月夏季高温降雨期后出现水温升高和盐度降低现象，硅藻丰度较往年平均水平下降而甲藻多样性增加，细菌总丰度较入夏前水平降低而弧菌丰度显著升高。与室内暂养对照组长牡蛎相比，海区养殖长牡蛎的糖原含量下降，并发生轻度氧化应激。研究结果有助于进一步理解夏季养殖环境的变化规律和长牡蛎机体响应特征，为预防夏季大规模死亡发生提供理论依据和参考。

关键词：长牡蛎高温降雨糖原免疫北黄海

H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化

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河南农业科学 2024年第3期53卷 125-132页

作者：屈小天王雅楠许倩茹李雪洋张申立张二芹张改平河南农业大学生命科学学院河南郑州450046 吉林大学动物医学院吉林长春130062 河南农业大学动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心河南郑州450046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 详细信息

为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒 HA蛋白水稻胚乳表达蛋白质纯化

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益生菌调控动物肠道健康的机制研究进展

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第4期50卷 506-516页

作者：郝壮丁雪东汪晶南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏南京210095

益生菌是一类有益于宿主健康的微生物,具有提高动物生长性能、改善肠道健康等作用。在畜牧业全面禁止使用促生长类抗生素的形势下,益生菌类饲料添加剂能够作为抗生素的替代品,保障动物的健康养殖。本文从动物肠道营养物质消化吸收、微... 详细信息

益生菌是一类有益于宿主健康的微生物,具有提高动物生长性能、改善肠道健康等作用。在畜牧业全面禁止使用促生长类抗生素的形势下,益生菌类饲料添加剂能够作为抗生素的替代品,保障动物的健康养殖。本文从动物肠道营养物质消化吸收、微生物屏障、化学屏障、物理屏障和免疫屏障等方面出发,阐明了益生菌调控动物肠道健康的可能机制,以期为益生菌的科学应用提供依据。

关键词：益生菌生长性能肠道健康肠道屏障

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益生菌调控动物肠道健康的机制研究进展

浙江大学学报(农业与生命科学版) 2024年

作者：郝壮丁雪东汪晶南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心

益生菌是一类有益于宿主健康的微生物，具有提高动物生长性能、改善肠道健康等作用。在畜牧业全面禁止使用促生长类抗生素的形势下，益生菌类饲料添加剂能够作为抗生素的替代品，保障动物的健康养殖。本文从动物肠道营养物质消化吸收、... 详细信息

益生菌是一类有益于宿主健康的微生物，具有提高动物生长性能、改善肠道健康等作用。在畜牧业全面禁止使用促生长类抗生素的形势下，益生菌类饲料添加剂能够作为抗生素的替代品，保障动物的健康养殖。本文从动物肠道营养物质消化吸收、微生物屏障、化学屏障、物理屏障和免疫屏障几方面出发，阐明益生菌调控动物肠道健康的机制，以期为益生菌的科学应用提供依据。

关键词：益生菌生长性能肠道健康肠道屏障

橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：刘瑞雪丁雪东党苗苗汪晶朱伟云南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心

[目的]试验旨在研究橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响。[方法]选用1日龄爱拔益加肉鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复8只。5组试验鸡分别饲喂基础饲粮（Con group，对照组）以及在基础... 详细信息

[目的]试验旨在研究橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响。[方法]选用1日龄爱拔益加肉鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复8只。5组试验鸡分别饲喂基础饲粮（Con group，对照组）以及在基础饲粮中添加40 mg·kg-1橙皮苷（Hes group，橙皮苷组）、40 mg·kg-1百里香酚（Thy group，百里香酚组）、20 mg·kg-1迷迭香酸（RA group，迷迭香酸组）和40 mg·kg-1橙皮苷+40 mg·kg-1百里香酚+20 mg·kg-1迷迭香酸（HTR group，联合组），试验期42 d。[结果]与对照组相比，联合组肉仔鸡的法氏囊指数显著增加（P免疫球蛋白M的含量显著降低（P联合添加橙皮苷、百里香酚和迷迭香酸能够增加肉仔鸡法氏囊指数，降低血清中细胞因子的含量，提高机体和黏膜的免疫能力，增强肠道黏膜的抗氧化能力。

关键词：肉仔鸡橙皮苷百里香酚迷迭香酸抗氧化功能免疫功能

橙皮苷对白羽肉鸡生长性能、肉品质及抗氧化功能的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：党苗苗丁雪东刘瑞雪汪晶朱伟云南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心

[目的] 本研究旨在探究橙皮苷对白羽肉鸡生长性能、屠宰性能、肉品质及抗氧化功能的影响。[方法]试验选取96羽1日龄爱拔益加公雏，随机分为2组，每组6个重复，每个重复8羽，进行为期42 d的饲喂试验。对照组饲喂基础日粮，橙皮苷组在基... 详细信息

[目的] 本研究旨在探究橙皮苷对白羽肉鸡生长性能、屠宰性能、肉品质及抗氧化功能的影响。[方法]试验选取96羽1日龄爱拔益加公雏，随机分为2组，每组6个重复，每个重复8羽，进行为期42 d的饲喂试验。对照组饲喂基础日粮，橙皮苷组在基础日粮中添加40 mg·kg-1橙皮苷。[结果] 与对照组相比，橙皮苷显著提高了白羽肉鸡21和42日龄体重、22～42 d与1～42 d的平均日采食量和平均日增重，显著降低料重比（P<0.05）；橙皮苷显著提高白羽肉鸡的屠宰率、全净膛率和胸肌率，显著降低白羽肉鸡的腹脂率（P<0.05）。与对照组相比，橙皮苷缓解了胸肌宰后24 h pH的下降，显著降低胸肌亮度值（L *）、宰后24 h滴水损失（P<0.05）、蒸煮损失及剪切力（P<0.01）；橙皮苷显著降低了胸肌肌纤维面积和纤维直径（P<0.05），显著增加了肌纤维密度（P<0.01）。与对照组相比，橙皮苷组鸡胸肌总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性显著增高（P<0.05），丙二醛（MDA）的含量显著降低（P<0.05），胸肌组织中的血红素加氧酶1基因（HO-1）mRNA相对表达量显著上调（P<0.05）。[结论] 综上，日粮中添加橙皮苷能提高肉鸡生长性能、屠宰性能和抗氧化能力，改善肉鸡胸肌肉品质。

关键词：橙皮苷生长性能屠宰性能肉品质抗氧化功能

白藜芦醇对沙门氏菌诱导型IPEC-J2细胞损伤的缓解作用

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河南农业大学学报 2024年

作者：赵峥余秋颖杨聪燕李珊珊陈琳琳王娜河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心郑州市营养与健康食品重点实验室河南农业大学食品科学技术学院河南农业大学动物医学院龙湖现代免疫实验室

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol，RES)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)诱导猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cells， IPEC-J2)损伤的缓解作用，为促进动物健康养殖提供新思路。【方法】用鼠伤寒沙门氏菌建立... 详细信息

【目的】研究白藜芦醇(resveratrol，RES)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)诱导猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cells， IPEC-J2)损伤的缓解作用，为促进动物健康养殖提供新思路。【方法】用鼠伤寒沙门氏菌建立IPEC-J2损伤模型，测定细胞上清中一氧化氮(NO)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-4(IL-4)分泌量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)水平、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)活力、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)氧化应激相关指标含量，分析RES对IPEC-J2损伤模型的缓解作用。【结果】RES预处理IPEC-J2细胞的最佳质量浓度为7.8 mg·L-1，能有效缓解鼠伤寒沙门氏菌诱导IPEC-J2细胞产生的炎症损伤，显著降低促炎因子(TNF-α和IL-6)的含量，提高抑炎因子(IL-4)的表达，从而有效减缓肠道炎症反应。同时，RES可显著提高T-SOD和GSH还原酶的活力，显著降低MDA的表达水平，缓解鼠伤寒沙门氏菌诱发的氧化损伤，达到维持机体肠道氧化还原平衡的稳态。【结论】RES对IPEC-J2损伤具有保护作用，可用于预防鼠伤寒沙门氏菌感染。

关键词：白藜芦醇鼠伤寒沙门氏菌 IPEC-J2细胞炎症反应氧化应激

猪圆环病毒2型灭活疫苗的植物源免疫增强剂筛选

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河南农业大学学报 2024年

作者：李军伟余秋颖张艳芝王运珂任红涛王娜河南农业大学食品科学技术学院郑州市营养与健康食品重点实验室龙湖现代免疫实验室河南农业大学动物免疫学国际联合研究中心河南农业大学动物医学院

【目的】筛选安全、高效的抗猪圆环病毒2型病毒疫苗免疫增强剂，改善现有佐剂存在的免疫效力及安全性。【方法】以昆明小鼠为研究对象，选取萜类（青蒿素、紫杉醇、穿心莲内酯、熊果酸）、生物碱类（黄连素、石蒜碱、千金藤素、氧化苦... 详细信息

【目的】筛选安全、高效的抗猪圆环病毒2型病毒疫苗免疫增强剂，改善现有佐剂存在的免疫效力及安全性。【方法】以昆明小鼠为研究对象，选取萜类（青蒿素、紫杉醇、穿心莲内酯、熊果酸）、生物碱类（黄连素、石蒜碱、千金藤素、氧化苦参碱）、酚酸类（咖啡酸、绿原酸、没食子酸、香豆酸）和黄酮类（山柰酚、槲皮素、木犀草素、原花青素）共16种植物源活性物质，通过测定小鼠体质量比例、IgG抗体水平、脏器指数、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC），开展靶向猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫增强剂的筛选，并对其抗氧化活性进行初步评价。【结果】1）小鼠灌胃植物源活性物质后，体质量呈增加趋势。2）各组抗体水平呈现先上升后下降的趋势。与疫苗组相比，黄连素、石蒜碱、千金藤素、槲皮素、木犀草素和原花青素组可极显著性提高机体的抗体水平，其中以原花青素组效果最佳，比疫苗组抗体水平提高了53.59%。3）槲皮素组小鼠心脏、肝脏和肾脏指数呈显著性升高，黄连素、石蒜碱、原花青素组无显著差异；其中，槲皮素、原花青素组小鼠脾脏和胸腺指数呈极显著性提高，脾脏指数提高了49.50%和53.23%，胸腺指数提高了121.82%和103.64%，提示其可能在促进免疫器官的发育、分化和成熟，提高机体的免疫功能方面发挥重要作用。4）木犀草素、槲皮素和原花青素组T-SOD活性呈极显著性升高，MDA含量呈极显著性降低，千金藤素、石蒜碱、槲皮素、木犀草素、黄连素和原花青素组T-AOC含量呈极显著性升高。以原花青素对机体的抗氧化效果较好，T-SOD活力和T-AOC分别提高了9.60%和48.57%，MDA含量降低了26.82%。【结论】原花青素对小鼠的免疫增强效果最佳，可作为靶向猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂研究的候选者。

关键词：植物源活性物质猪圆环病毒2型疫苗免疫增强剂