检索结果-南通市图书馆

阴离子交换层析结合低温乙醇法制备静脉注射人免疫球蛋白及关键质量分析

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中国新药杂志 2023年第19期32卷 1987-1992页

作者：周雁翔朱晨王上詹骞刘俊彭焱龚钦纪德铭邱璟王霖慧郭佳茹胡勇李策生国药集团武汉血液制品有限公司武汉430207

目的:层析结合低温乙醇法制备静脉注射人免疫球蛋白(IVIG),检测制备过程中杂质去除效果及层析对制品质量的影响。方法:本实验系用健康人血浆,采用低温乙醇蛋白分离法分离纯化得到的组分II(以下简称FII)沉淀作为原料,经过一步阴离子交换... 详细信息

目的:层析结合低温乙醇法制备静脉注射人免疫球蛋白(IVIG),检测制备过程中杂质去除效果及层析对制品质量的影响。方法:本实验系用健康人血浆,采用低温乙醇蛋白分离法分离纯化得到的组分II(以下简称FII)沉淀作为原料,经过一步阴离子交换层析制备IVIG(pH 4),检测IVIG制品分子量大小分布、免疫球蛋白(Ig)A含量、IgG含量及IgG亚型分布、蛋白质二级结构,采用孔径为20 nm的纳滤膜过滤,对比分析低温乙醇蛋白分离法及联合阴离子交换纯化工艺制备的IVIG(pH4)制品的IgA,IgM去除效果及纳米膜的通量。结果:FII沉淀经5倍注射用水溶解,搅拌2 h后的IgG溶出率较高,阴离子交换层析结合低温乙醇法制备的IVIG(pH 4)制品中IgA含量控制在100μg·mL^(-1)以内,提高了纳米膜(20 nm)病毒灭活的通量,与市售产品IgG亚型分布、二级结构一致,分子大小分布符合《中华人民共和国药典》规定。结论:阴离子交换层析可以降低产品中IgA,IgM等杂质的残留量,提高了纳米膜(20 nm)的通透性,且对IVIG制品关键质量无显著影响。

关键词：免疫球蛋白A 静脉注射人免疫球蛋白阴离子交换层析分子量大小分布

原料血浆中HBV/HCV/HIV-1核酸检测方法的建立及验证

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中国新药杂志 2022年第21期31卷 2128-2135页

作者：邓琨张林林喻剑虹杨玲陈鄂湘童剑啸程郁菁刘莹彭干郑宵蓓李璞赵传波彭丹张金王月国药集团武汉血液制品有限公司武汉430207

目的:建立原料血浆中乙型肝炎病毒(HBV)/丙型肝炎病毒(HCV)/人类免疫缺陷病毒(HIV-1)核酸检测方法,并进行系统性验证。方法:分别从灵敏度、精密度、线性、特异性及抗干扰因素等方面,对核酸检测系统进行系统性验证,并筛查1 140 601份原... 详细信息

目的:建立原料血浆中乙型肝炎病毒(HBV)/丙型肝炎病毒(HCV)/人类免疫缺陷病毒(HIV-1)核酸检测方法,并进行系统性验证。方法:分别从灵敏度、精密度、线性、特异性及抗干扰因素等方面,对核酸检测系统进行系统性验证,并筛查1 140 601份原料血浆。结果:分析灵敏度验证盘中HBV(3 IU·mL^(-1))样本、HCV(20 IU·mL^(-1))样本及HIV-1(40 IU·mL^(-1))样本各20份进行单人份检测,样本检出率为100%,高于95%。重复性:实验员A重复检测HBV(3 IU·mL^(-1))样本、HCV(20 IU·mL^(-1))样本及HIV-1(40 IU·mL^(-1))样本各20次,CT值CV分别为2.08%,1.82%,4.70%,均≤5%,实验员B重复检测样本各20次,各项目CT值CV分别为1.33%,2.08%,4.70%,均≤5%;中间精密度:2名实验员各项目CT值CV分别为2.80%,2.26%,3.80%,均≤10%。线性验证:HBV/HCV/HIV-1企业工作参考品10~5, 10~4, 10~3, 10~2浓度水平扩增线性梯度明显,重复性好。特异性验证:将系统性能验证盘作为供试品进行检测,检测结果应与系统性能验证盘预期结果一致。干扰因素验证:当样本中分别含0.19%~1.52%的枸橼酸钠、48~431 mg·dL的溶血血红蛋白及141~1 269福尔马肼浊度的乳糜均对检测无影响。1 140 601份原料血浆中有175份反应性样本,NAT反应性样本:HIV-1样本3份,HCV样本11份,HBV样本132份;ELISA反应性样本:HIV样本0份,HCV样本15份,HBV样本14份。男性样本(100份)高于女性样本(75份)。血型占比O型(37.71%)>A型(29.71%)>B型(21.14%)>AB型(11.43%)。45~55岁年龄段占比最高达64.57%,18~30岁年龄段占比最少仅为4.57%。结论:该方法稳定准确、精密度高、特异性强、抗干扰能力强,适用于原料血浆中HBV/HCV/HIV-1核酸检测。核酸检测与血清学检测有机结合可有效降低输血感染风险,必要的献血浆者追踪随访和更进一步的实验室确证分析有助于血清学检测和核酸检测不一致结果的解释和分析。

关键词：核酸检测原料血浆人类免疫缺陷病毒丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒

亚甲蓝残留检测验证及在抗新型冠状病毒灭活血浆制备中的应用

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中国新药杂志 2020年第21期29卷 2511-2514页

作者：龚钦喻剑虹邱璟罗晶王月梁小龙侯勇熊伟李策生国药集团武汉血液制品有限公司武汉430207

目的:建立抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)灭活血浆亚甲蓝残留量的检测方法并用此法检测不同装量的灭活血浆中亚甲蓝残留量。方法:通过固相萃取小柱吸附血浆中亚甲蓝,使用UV-2550紫外分光光度计在654 nm处测定吸光度。测定标准对照血浆与病... 详细信息

目的:建立抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)灭活血浆亚甲蓝残留量的检测方法并用此法检测不同装量的灭活血浆中亚甲蓝残留量。方法:通过固相萃取小柱吸附血浆中亚甲蓝,使用UV-2550紫外分光光度计在654 nm处测定吸光度。测定标准对照血浆与病毒灭活血浆经固相萃取所得洗脱液的吸光度,依据两者的比值得出供试品的亚甲蓝残留量。验证该方法的线性范围、精密度、准确度、定量限等指标。对50,75,100 m L 3种分装规格使用本方法检测其亚甲蓝残留量,每种规格各11批。结果:建立了亚甲蓝残留检测方法,样品的检测浓度范围为0.01~0.05μmol·L-1。各项验证指标为线性(R值)=0.994 4,精密度7%,准确度在102%~110%,定量限为0.013μmol·L-1,定量检测实验CV 国药典》2015版规定。各种规格血浆经灭活后,亚甲蓝残留均能在本方法的检测范围内,残留量均远低于标准(≤0.30μmol·L-1)。结论:通过验证得出此方法可用于以上不同规格的抗SARS-CoV-2病毒灭活血浆亚甲蓝残留量检测。

关键词：新型冠状病毒灭活血浆固相萃取亚甲蓝

柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量

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中国生物制品学杂志 2019年第12期32卷 1402-1406,1410页

作者：王月喻剑虹刘莹罗晶郑宵蓓张雪龚钦国药集团武汉血液制品有限公司

目的建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过... 详细信息

目的建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3.9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为248 nm。同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度。结果甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均>1.5,拖尾因子在0.95~1.40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均<2%;当甘氨酸浓度在12.5~62. 5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4.0~20.0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0.999 9和0.999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0.4%和0.5%,中间精密度RSD分别为1.3%和1.0%;两种氨基酸的回收率均在95%~105%范围内,RSD均≤2%。结论建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量。

关键词：人凝血因子Ⅷ 氨基酸含量柱前衍生化 HPLC 甘氨酸盐酸赖氨酸

人血浆中纤维蛋白溶酶原纯化工艺样品蛋白含量改良BCA检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2021年第5期34卷 595-601页

作者：胡勇纪德铭詹骞陈克金彭焱周雁翔岳胜兰李娟周志军国药集团武汉血液制品有限公司湖北武汉430207

目的建立检测人血浆中纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)改良PIerceTMBCA蛋白试剂盒方法(简称改良BCA法),并进行验证及初步应用。方法结合PierceTMBCA试剂盒的试管法与微孔板法检测人血浆中Pg;比较标准曲线拟合方式确定改良试剂盒的线性范... 详细信息

目的建立检测人血浆中纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)改良PIerceTMBCA蛋白试剂盒方法(简称改良BCA法),并进行验证及初步应用。方法结合PierceTMBCA试剂盒的试管法与微孔板法检测人血浆中Pg;比较标准曲线拟合方式确定改良试剂盒的线性范围;通过牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)国家标准品和PIerceTM BCA试剂盒附带的BSA标准品互相标定确定内控标准品;通过平行性试验分析BSA作为标准品检测Pg蛋白含量的可行性。验证方法的准确性、精密性及选择性。应用改良的BCA法检测Pg纯化过程的蛋白含量,并与凯氏定氮法和双缩脲法进行比较,同时检测201903003批Pg工艺纯化过程样品蛋白含量的相对纯度及比活性变化。结果改良BCA法选择二次函数拟合,PIerceTMBCA试验盒线性范围为62.5~2000μg/mL,试剂盒附带的BSA标准品(2000μg/mL)用BSA国家标准品标定结果为2090μg/mL,可作为内控标准品使用;Pg所在工艺组分浓度在250~2000μg/mL时,内控BSA曲线与Pg曲线的平行性最好。内控标准品的高(1500μg/mL)、中(750μg/mL)、低(150μg/mL)、检测下限(62.5μg/mL)及BSA国家标准品(2000μg/mL)的回收率在88.61%~103.78%之间,批内及批间CV均质量监控,也可用于原液、半成品的蛋白含量检测。

关键词：改良BCA法人纤维蛋白溶酶原蛋白含量平行性分析过程监控

血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用

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中国生物制品学杂志 2017年第10期30卷 1080-1085页

作者：周志军林连珍彭焱李陶敬李策生胡勇国药集团武汉血液制品有限公司血液制剂研究室湖北武汉430207

目的建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方... 详细信息

目的建立检测人血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。方法用配对的VWF抗体进行棋盘滴定来确定最佳捕获抗体和检测抗体浓度,建立检测人VWF抗原含量的双抗体夹心ELISA方法;用VWF国际标准品(NIBSC07/316)标定内控标准品(无FⅧ的VWF),确定VWF∶Ag的国际单位(Ag/ml)与质量单位(μg/ml)的关系;对建立的方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性验证;将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析。结果捕获抗体和检测抗体稀释度均为1∶200;VWF∶Ag的1 Ag/ml对应16μg/ml;标准曲线的线性范围为160~10 ng/ml,各浓度回收率在95.8%~103.2%之间,变异系数(CV)国药集团武汉血液制品有限公司FⅧ纯化工艺中PEG沉淀和离子交换层析去除了95%以上的VWF,工艺稳定性较好,成品具有与血浆接近的FⅧ∶Ag/VWF∶Ag比值。结论建立的人VWF抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行VWF的抗原含量检测可作为FⅧ纯化工艺内部质量控制的一个指标。

关键词：血管性血友病因子抗原含量酶联免疫吸附测定

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人C1酯酶抑制剂的研究进展

中国生物制品学杂志 2017年第11期30卷 1227-1232页

作者：汪菲菲李策生国药集团武汉血液制品有限公司血液制剂研究室湖北武汉430207

C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH),又称C1抑制物(C1 inhibitor),是目前已知的唯一一种既能通过经典途径,又能通过凝集素途径对补体系统进行调节的血浆蛋白酶抑制物,其在补体系统、激肽释放酶-激肽系统、纤溶系统和凝血系统... 详细信息

C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH),又称C1抑制物(C1 inhibitor),是目前已知的唯一一种既能通过经典途径,又能通过凝集素途径对补体系统进行调节的血浆蛋白酶抑制物,其在补体系统、激肽释放酶-激肽系统、纤溶系统和凝血系统中发挥重要的调节作用。目前有4种C1-INH浓缩制剂批准上市,均用于治疗或预防遗传性血管性水肿(hereditary angioedema,HAE)。本文就C1-INH的生化性质与生理功能、相关疾病与临床研究、C1-INH浓缩制剂的制备工艺及产品比较作一综述。

关键词： C1酯酶抑制剂 C1酯酶抑制剂浓缩制剂遗传性血管性水肿

人C1酯酶抑制剂活性动态显色检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2018年第7期31卷 751-757页

作者：汪菲菲岳胜兰周志军彭焱李娟张云骁李策生胡勇国药集团武汉血液制品有限公司血液制剂研究室湖北武汉430207

目的建立人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor or C1 inhibitor,C1-INH)活性的动态显色检测方法,并进行验证。方法采用棋盘法分析C1酯酶与发色底物C1E 5603[CH3OC-Lys(Cbo)-Gly-Arg-pNA·AcOH]反应后的A值变化率(ΔA/min),确定能使不同浓度酶饱和的最低底物浓度。将C1-INH浓缩制剂标准品与C1酯酶孵育,剩余的C1酯酶与底物C1E 5603作用产生A值,将ΔA/min与C1-INH活性进行拟合,绘制标准曲线。验证该方法的线性范围、选择性、特异性、准确度、精密度、稳定性,并进行样品添加试验。将验证后的该方法应用于C1-INH制备工艺过程样品的分析。结果确定C1酯酶的浓度为28μg/mL,底物浓度为2.4 mmol/L,反应结果监测4 min。C1-INH标准品在0.15~0.025 IU/m 范围内与ΔA/min呈良好的线性关系,R2≥0.99,校正标样回算浓度在标示值的90.2%~105.4%内;CM阳离子交换层析洗脱缓冲液、HIC疏水层析平衡缓冲液、人纤溶酶原(plasminogen,Plg)、人纤溶酶(plasmin,Plm)的响应值均低于定量下限响应的7.2%,并低于内标响应的2.7%;20 mmol/L以下的pH 5.0Na Ac及300 mmol/L以下的Na Cl对C1-INH活性检测无影响;检测定量上限、高、中、低、定量下限质控样品,批内准确度在90.0%~114.8%之间,批内CV在0.7%~13.7%之间,批间准确度在94.2%~108.3%之间,批间CV在1.2%~9.7%之间;C1酯酶与底物C1E 5603室温放置3 h不影响检测结果;样品添加试验回收率在94.5%~106.1%之间。CM阳离子交换层析洗脱液、DEAE阴离子交换层析洗脱液、HIC疏水层析流穿液中C1酯酶抑制剂的特异性活性逐渐升高,分别为0.79、1.84、2.61 IU/g。结论本方法具有良好的选择性、准确度、精密度、特异性及稳定性,可作为C1-INH制备工艺中的内部控制指标。

关键词： C1酯酶抑制剂动态显色法活性

新型冠状病毒肺炎康复者恢复期血浆中新型冠状病毒核酸检测方法的验证

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国际生物制品学杂志 2021年第1期44卷 7-12页

作者：王月喻剑虹刘莹罗艳郭佳茹张林林李璞赵传波陈玲向阳张雪陈鄂湘彭干李耀雄何彦林李策生国药集团武汉血液制品有限公司质量控制室 430207 国药集团武汉血液制品有限公司质量保证室 430207 国药集团武汉血液制品有限公司质量管理部 430207 国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部 430207

目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时... 详细信息

目的对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆中新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)核酸检测方法进行系统性验证。方法根据血浆样本实际情况,并结合试剂盒要求,建立COVID-19康复者恢复期血浆中2019-nCoV核酸的实时荧光定量PCR检测方法,并从专属性、检测限(limit of detection, LOD)、重复性及中间精密度对该方法进行系统性的验证,对20份COVID-19康复者恢复期血浆样本进行性能确认。结果专属性:阳性样本及阴性样本均能被有效检出;检测限:1×LOD~2×LOD企业参考品19次检测开放阅读框1a/b和/或核衣壳蛋白基因为阳性;重复性和中间精密度:两种阳性对照基因以及内部质控在不同荧光通道的循环阈值的相对标准偏差均符合要求。性能确认:康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测结果均为阴性。结论该检测方法专属性强、稳定可靠、重复性好,适用于COVID-19康复者恢复期血浆2019-nCoV核酸检测。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒核酸检测恢复期血浆