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基于高分辨质谱技术的婴幼儿食品中过敏原蛋白质的高灵敏检测

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色谱 2017年第10期35卷 1037-1041页

作者：吴慈陈溪刘健慧张晓林薛伟锋梁振刘梦遥崔妍黄大亮张丽华大连出入境检验检疫局检验检疫技术中心辽宁大连116100 中国科学院分离分析化学重点实验室国家色谱研究分析中心中国科学院大连化学物理研究所辽宁大连116023 中国科学院大学北京100049

基于高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,选择稳定性好、灵敏度高的特征肽段,利用平行反应监测(PRM)技术,实现了多类过敏原蛋白质的高灵敏度同时检测,并成功应用于婴幼儿食品中过敏原成分的分析。对于婴幼儿食品中蛋白质的提取,与传... 详细信息

基于高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,选择稳定性好、灵敏度高的特征肽段,利用平行反应监测(PRM)技术,实现了多类过敏原蛋白质的高灵敏度同时检测,并成功应用于婴幼儿食品中过敏原成分的分析。对于婴幼儿食品中蛋白质的提取,与传统的丙酮沉淀法比,采用膜上原位样品预处理方法(i-FASP)可实现更高的蛋白质提取效率和抗干扰能力。所检测的过敏原蛋白质的定量限(LOQ)最小可达到0.028 mg/L,其线性范围最宽可跨越4个数量级,且线性关系良好(相关系数R^2≥0.99)。该方法为食品中过敏原蛋白质组学快速分析提供了一种可靠的分析方法。

关键词：平行反应监测液相色谱-串联质谱过敏原蛋白质婴幼儿食品

低能激光照射对梗死后心肌微环境影响的实验研究

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中国循环杂志 2015年第1期30卷 47-49页

作者：侯剑峰袁昕张浩郑哲胡盛寿中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外心血管病医院心血管疾病国家重点实验室北京市100037

目的:探讨低能激光照射(LLLI)对梗死后心肌微环境的影响。方法:冠状动脉结扎法制作SD大鼠心肌梗死模型。3周后,经超声心动图筛选合格心肌梗死大鼠随机分为三组:1 LLLI组:心肌梗死后开胸接受LLLI预处理(n=26);2对照组:心肌梗死后单纯开胸... 详细信息

目的:探讨低能激光照射(LLLI)对梗死后心肌微环境的影响。方法:冠状动脉结扎法制作SD大鼠心肌梗死模型。3周后,经超声心动图筛选合格心肌梗死大鼠随机分为三组:1 LLLI组:心肌梗死后开胸接受LLLI预处理(n=26);2对照组:心肌梗死后单纯开胸,日光灯照射(n=27);3假手术组:单纯开胸,冠状动脉左前降支只穿线不行结扎(n=24)。LLLI预处理采用635 nm半导体低能激光(输出功率:5 mW;照射时间:150秒;能量密度:0.96 J/cm2)开胸单次照射。LLLI预处理后1小时、1天、1周,以免疫蛋白印迹法和实时定量聚合酶链反应法分别检测预LLLI处理区内心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,分别以黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定LLLI预处理区内心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,TUNEL法检测照射区心肌细胞凋亡,超声心动图评价左心功能。结果:LLLI显著提高了梗死后心肌组织中VEGF、GRP78的表达及SOD的活性,降低了MDA的含量。但未能显著改善梗死周边区心肌细胞凋亡和左心功能。结论:LLLI能够通过降低梗死后心肌组织氧化应激水平改善局部微环境。

关键词：低能激光照射心肌梗死微环境

重组人血小板生成素治疗脓毒症相关性血小板减少症的Meta分析

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国际输血及血液学杂志 2022年第4期45卷 306-314页

作者：邢学忠高勇王海军曲世宁黄初林张昊国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院重症加强治疗科北京100021

目的系统评价重组人血小板生成素(rhTPO)治疗脓毒症相关性血小板减少症(TCP)的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、中国知网(CNKI)等数据库中, 关于rhTPO治疗脓... 详细信息

目的系统评价重组人血小板生成素(rhTPO)治疗脓毒症相关性血小板减少症(TCP)的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、中国知网(CNKI)等数据库中, 关于rhTPO治疗脓毒症相关性TCP成年患者的随机对照试验(RCT)文献。研究组患者接受rhTPO治疗, 对照组患者接受静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)、重组人白细胞介素(rhIL)-11, 空白对照或者0.9%氯化钠注射液治疗。文献检索时间设定为数据库建库至2022年4月20日。由2位研究者按照本研究设定的文献纳入和排除标准独立筛选文献, 评价纳入文献的质量并提取相关临床资料。采用RevMan 5.3软件与R 4.1.3软件中Meta程序包, 对rhTPO治疗脓毒症相关性TCP成年患者的有效性和安全性进行Meta分析。rhTPO治疗脓毒症相关性TCP成年患者有效性及安全性的主要结局评价指标为有效性指标包括住院病死率、治疗后第7天血小板计数、血小板输注量;安全性指标包括总药物相关不良反应发生率。结果通过文献筛选, 共计14篇RCT文献符合本研究纳入标准, 纳入1 029例脓毒症相关性TCP患者, 其中研究组537例, 对照组492例。针对rhTPO治疗脓毒症相关性TCP成年患者有效性和安全性的Meta分析结果如下。①研究组与对照组患者的住院病死率相比, 差异无统计学意义(32.4%比38.8%, RR=0.84, 95%CI:0.69~1.03, P=0.09)。而与对照组相比, 研究组患者治疗第7天血小板计数显著增加(MD=28.27, 95%CI:16.95~39.60, P<0.001), 血小板输注量显著减少(MD=-1.35, 95%CI:-1.82~-0.88, P<0.001), 并且差异均有统计学意义。②与对照组相比, 研究组患者总药物相关不良反应发生率显著减少, 并且差异有统计学意义(4.2%比0, OR=0.08, 95%CI:0.01~0.60,P=0.01)。结论对于脓毒症相关性TCP成年患者, 应用rhTPO可以提升血小板计数, 减少血小板输注量, 减低总药物相关不良反应发生率, 但是不能降低患者住院病死率。

关键词：脓毒症血小板减少血小板生成素药物疗法 Meta分析重组人血小板生成素

Chanarin-Dorfman综合征一例国内首报

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中华皮肤科杂志 2021年第8期54卷 673-676页

作者：刘依和陈志明杨勇中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院遗传病中心南京210042

目的检测1例以鱼鳞病伴肝功能异常为主要临床表现的家系基因突变情况,并明确其诊断。方法收集先证者临床资料,采集先证者及其父母外周血,提取基因组DNA,对先证者进行遗传性皮肤病目标基因外显子测序,确定突变位点,在家系中对突变位点进... 详细信息

目的检测1例以鱼鳞病伴肝功能异常为主要临床表现的家系基因突变情况,并明确其诊断。方法收集先证者临床资料,采集先证者及其父母外周血,提取基因组DNA,对先证者进行遗传性皮肤病目标基因外显子测序,确定突变位点,在家系中对突变位点进行Sanger测序验证,并对先证者及其父母外周血涂片等辅助检查结果进行分析。结果先证者全身皮肤干燥,下肢可见白色细小鳞屑,伴有转氨酶升高、双耳轻度感音神经性耳聋和脂肪肝。先证者外周血基因组DNA中编码CGI-58蛋白的ABHD5基因第6外显子存在纯合突变(c.933dupA),导致氨基酸序列发生移码突变(p.R312Tfs*45),其父亲、母亲该位点均为杂合突变,突变与疾病符合共分离。先证者外周血涂片发现中性粒细胞内含脂质空泡,即Jordan小体阳性。结论先证者表现为鱼鳞病样皮损和肝功能异常,结合其ABHD5基因纯合突变和外周血涂片Jordan小体阳性,诊断为Chanarin-Dorfman综合征。

关键词：鳞癣样红皮病,先天性肝功能不全听觉丧失,感音神经性 DNA突变分析 Chanarin-Dorfman综合征基因,ABHD5 Jordan小体

肿瘤坏死因子α对骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞TAZ表达和成骨潜能的影响

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中华肿瘤杂志 2009年第1期31卷 5-9页

作者：李炳宗史明霞李静马杰陈磊陈斌赵春华中国医学科学院基础研究所组织工程研究中心北京100730

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）、具有PDZ结合域的转录共刺激因子TAZ和骨髓瘤骨病的关系。方法分离培养多发性骨髓瘤（MM）患者和正常人的骨髓间充质干细胞（MSCs），鉴定其生物学特性；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MM患者和正常... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）、具有PDZ结合域的转录共刺激因子TAZ和骨髓瘤骨病的关系。方法分离培养多发性骨髓瘤（MM）患者和正常人的骨髓间充质干细胞（MSCs），鉴定其生物学特性；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MM患者和正常人骨髓血清中TNF-α的浓度。MM患者骨髓CD138^＋细胞与正常人MSCs行Transwell成骨共培养后，采用实时定量PCR检测MSCs成骨指标和TAZ mRNA表达量，von Kossa染色法鉴定钙质沉积度。采用实时定量PCR和Western blot检测MSCs中TAZ mRNA和蛋白质的表达量。结果MM患者的MSCs成骨潜能和TAZ表达量较正常人降低。MM患者骨髓血清中的TNF-α浓度为（355.4±49.1）pg／ml，正常人为（92.3±17.2）pg／ml。CD138^＋骨髓瘤细胞可以抑制正常人MSCs向成骨细胞分化，TNF-α单克隆抗体可以部分逆转此抑制效应。随着培养体系中TNF-α（0、0.1、1、10ng／mL）浓度梯度增加，MSCs中TAZ表达量逐渐降低。结论MM患者的骨髓MSCs成骨潜能较正常人明显降低。骨髓瘤细胞可能是通过TNF-α抑制TAZ的表达，抑制MSCs的成骨作用。

关键词：多发性骨髓瘤间充质干细胞成骨 TAZ TNF-α

烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

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生物工程学报 2013年第9期29卷 1245-1253页

作者：谢贻欧阳浩淼黄日波陈东金城中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室北京100101 广西科学院非粮生物质酶解国家重点实验室国家非粮生物质能源工程技术研究中心广西生物炼制重点实验室广西南宁530007

探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因，对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillusfumigatus基因组中含有一个堙，基因（1752bp），编码的蛋白约65kDa，推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达... 详细信息

探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因，对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillusfumigatus基因组中含有一个堙，基因（1752bp），编码的蛋白约65kDa，推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体***，转化大肠杆菌EscherichiacoliBL21（DE3），经IPTG诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后，以七叶苷为底物进行了酶学分析，结果表明该酶的最适温度是45℃，最适pH在5．5～6．0之间，对七叶苷的‰值为17．7mmol／L。该酶在pH4～7范围内稳定；70℃保温2h后仍能保持60％的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响，Ca计对重组酶有轻微的激活作用，而SDS可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高，为进一步的研究与应用奠定了基础。

关键词：烟曲霉 β-葡萄糖苷酶原核表达酶学性质

N-甲基-N-亚硝基脲诱导大鼠视网膜变性早期基因表达谱分析

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中华实验眼科杂志 2013年第12期31卷 1131-1136页

作者：杨柳瞿远珍李岱吴开力首都医科大学附属北京天坛医院眼科北京100050 湖北咸宁学院湖北省咸宁市437100 中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广州510060

背景N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）诱导的大鼠光感受器细胞凋亡可用于研究视网膜变性类疾病，但视网膜变性类疾病早期基因水平的研究尚未见报道。目的应用基因芯片技术研究MNU诱导的视网膜变性大鼠早期基因表达谱的变化。方法6周龄雌性SD大... 详细信息

背景N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）诱导的大鼠光感受器细胞凋亡可用于研究视网膜变性类疾病，但视网膜变性类疾病早期基因水平的研究尚未见报道。目的应用基因芯片技术研究MNU诱导的视网膜变性大鼠早期基因表达谱的变化。方法6周龄雌性SD大鼠50只分为正常组20只、12h模型组20只和24h模型组10只。模型组大鼠皮下注射MNU（40mg／kg），正常组大鼠皮下注射等容量的生理盐水作为对照。分别于造模后12、12、24h处死正常组和12h模型组、24h模型组大鼠，大鼠右眼球进行常规视网膜组织病理学检查，正常组和12h模型组大鼠左眼的新鲜视网膜用基因芯片技术检测差异基因的表达，用荧光实时定量PCR（real—timePCR）法验证基因芯片技术检测出的差异表达率≥2．0的基因mRNA表达水平。结果全层视网膜厚度测量表明，24h模型组大鼠的厚度值明显低于正常组大鼠和12h模型组大鼠，差异均有统计学意义（t=9．926，P=0．002；t=2．736，P=0．028）。24h模型组大鼠外核层厚度值为（26．58±2．90）仙m，明显低于正常组的（38．11±1．01）μm和12h模型组的（35．07±3．03）μm，差异均有统计学意义（t=6．028，P=0．009；f=6．839，P=0．006），正常组与12h模型组间大鼠全层视网膜厚度和外核层厚度值比较差异均无统计学意义（全层厚度：t=1．541，P=0．324；外核层厚度：t=2．040，P=0．134）。大鼠cDNA基因芯片技术检测结果表明，12h模型组大鼠全部17000个基因的表达谱中涉及生物过程的基因为142个，涉及分子功能的基因为94个，排除重复基因共有74个基因，差异表达基因主要涉及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、Toll样受体通路和细胞凋亡通路。对基因芯片技术检测的差异表达率≥2．0的基因进行的***定量分析表明，CCL2、，L—Jb、CCL3、c-fos、c—myc、p53和MMP3基因mRNA表达值与基因芯片技术检测的表达趋势一致。结论MNU诱导的视网膜变性早期有明显的基因表达改变。基因芯片检测的基因表达改变结果与real—timePCR定量分析结果一致。

关键词：基因组学视网膜变性 N-甲基-N-亚硝基脲基因芯片实时定量反转录聚合酶链式反应动物模型

合成紫花茄皂苷诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

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中国肿瘤临床 2005年第9期32卷 481-485页

作者：马朋顾国锋陈希赵翔杜宇国张页北京大学医学部细胞生物学系中国科学院生态环境研究中心

目的:探讨合成紫花茄皂苷对BEL-7402细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(APA)法、吖啶橙荧光染色法和流式细胞术检测合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响以及诱导细胞凋亡的作用。利用蛋白印迹法检测药物作... 详细信息

目的:探讨合成紫花茄皂苷对BEL-7402细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(APA)法、吖啶橙荧光染色法和流式细胞术检测合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响以及诱导细胞凋亡的作用。利用蛋白印迹法检测药物作用后凋亡相关蛋白PARP的表达水平。结果:合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4.2μg/ml。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态。流式细胞术分析发现,细胞经皂苷作用6h、12h和24h后,凋亡率显著增加。蛋白印迹检测结果显示,合成紫花茄皂苷作用后肿瘤细胞内的PARP蛋白被剪切,Bcl-2蛋白的表达量下调。结论:合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,且这一作用可能与Bcl-2表达下调有关。

关键词： 7402细胞凋亡皂苷合成 BEL-7402细胞流式细胞术检测 Bcl-2蛋白凋亡诱导作用凋亡相关蛋白诱导细胞凋亡增殖抑制作用肿瘤细胞凋亡酸性磷酸酶蛋白印迹法荧光染色法人肝癌细胞 PARP 药物作用细胞增殖 IC50 显微镜下

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3D HepaRG聚球体模型的建立

中国新药杂志 2019年第22期28卷 2709-2717页

作者：李晓旭孟镇锴荣斌吴纯启郭尚敬王全军聊城大学药学院军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒物药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心聊城大学农学院

目的:构建用于体外肝毒性预测的药物安全性评价模型。方法:对比HepG2和HepaRG研究出更合适的细胞构建2D及3D聚球体模型。通过RT-PCR及免疫荧光检测等技术研究2种模型基因及蛋白表达的差异;采用阴性药物阿司匹林(aspirin,ASP)和叶酸(foli... 详细信息

目的:构建用于体外肝毒性预测的药物安全性评价模型。方法:对比HepG2和HepaRG研究出更合适的细胞构建2D及3D聚球体模型。通过RT-PCR及免疫荧光检测等技术研究2种模型基因及蛋白表达的差异;采用阴性药物阿司匹林(aspirin,ASP)和叶酸(folic acid,FA)以及报道的具有显著肝毒性的阳性药物对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)、曲格列酮(troglizone,Tro)、奈法唑酮(nefazodone,Nef)、托卡朋(tolcapone,Tol)、异烟肼(isoniazid,Iso),通过CCK8实验及IC50值对比其优势。结果:HepaRG显著优于HepG2,其3D聚球体模型中Ⅰ/Ⅱ相药物代谢酶、转运体、核受体及与胆汁淤积有关的主要酶类较2D模型明显上调。在肝毒性预测方面,2D模型由于无法长期培养仅能单次给药,3D聚球体模型采用单剂量及重复给药方式,通过IC50对比发现3D模型在重复给药实验中表现出更敏感的细胞毒性。结论:与2D细胞模型相比,3D HepaRG聚球体模型能够更好地用于体外肝毒性测试,并且对胆汁淤积性肝毒性也具有很好的预测能力。

关键词：胆汁淤积肝毒性 3D培养 HepaRG细胞 HepG2细胞