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广东畜牧兽医科技 2024年第2期49卷 8-15,40页

作者：何燕华陈鹏符明永邹娴刘文华罗成龙猪禽种业全国重点实验室/广东省畜禽育种与营养研究重点实验室/广东省农业科学院动物科学研究所广东广州510642 华南农业大学动物科学学院广东广州510640 广东省农业科学院农业生物基因研究中心广东广州510640

该试验旨在开发适合制备鸡生殖前体细胞移植受体公鸡的方法。试验选用5-7月龄、体重相近、繁殖性能正常的81只岭南黄公鸡进行试验。试验分两次开展,试验一根据公鸡体重计算白消安用量,试验二不以公鸡体重来计算白消安用量,而是每组固定... 详细信息

该试验旨在开发适合制备鸡生殖前体细胞移植受体公鸡的方法。试验选用5-7月龄、体重相近、繁殖性能正常的81只岭南黄公鸡进行试验。试验分两次开展,试验一根据公鸡体重计算白消安用量,试验二不以公鸡体重来计算白消安用量,而是每组固定白消安用量。通过分析注射白消安后第15天、30天、45天或60天公鸡的血常规指标、体重、睾丸重、死亡率、曲精细管直径、周长和面积及生育能力,评价白消安直接注射到年轻公鸡睾丸中制备鸡生殖前体细胞移植受体方法的效果。试验一结果表明,注射白消安后第15天仅有1只注射量为1.2 mg/kg的公鸡睾丸部分曲精细管内出现生精细胞减少现象,对血常规指标、死亡率、睾丸大小和重量以及受精率均无影响,而其他鸡只与对照组相比无明显变化。试验二结果表明,公鸡睾丸注射30-50mg/单侧白消安后第15和30天,睾丸大小、重量明显变小,第30天后组织切片分析显示睾丸内精曲细管膜底部和腺腔排空,第45天注射量为30-40mg/单侧的公鸡睾丸内大部分精原干细胞可以恢复,白消安注射组在第15-45天公鸡配种后受精率明显下降,但整个过程中公鸡体重和血常规指标无显著影响。综上表明,公鸡睾丸注射白消安可以清除内源性精原干细胞,且睾丸正常生理生殖功能不受影响,注射剂量为30-40mg/单侧后第30天,公鸡睾丸内精曲小管膜底部和腺腔排空,此时是注射生殖前体细胞最佳时间。

关键词：公鸡睾丸白消安生殖细胞

INH表位多肽疫苗抗体间接ELISA测定方法的建立及优化

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中国畜牧兽医 2016年第8期43卷 2156-2163页

作者：张玲玲岳耀敬冯瑞林李红峰郭婷婷袁超牛春娥刘建斌孙晓萍韩吉龙刘善博杨博辉中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院羊育种工程技术研究中心兰州730050 甘肃省武威市天祝县畜牧技术推广站天祝733200

本试验在间接ELISA的基础上建立了一种检测抑制素(inhibit hormone,INH)表位多肽疫苗抗体的方法并对ELISA试剂盒进行优化,为今后测定主动免疫后细毛羊体内INH表位多肽疫苗抗体提供理论参考。在前人研究的基础上,采用间接ELISA法测定血清... 详细信息

本试验在间接ELISA的基础上建立了一种检测抑制素(inhibit hormone,INH)表位多肽疫苗抗体的方法并对ELISA试剂盒进行优化,为今后测定主动免疫后细毛羊体内INH表位多肽疫苗抗体提供理论参考。在前人研究的基础上,采用间接ELISA法测定血清中INH表位多肽疫苗抗体的含量,通过对不同试验条件的控制摸索出最佳试验条件,即以脱脂奶粉为封闭液,INH及GnIH以表位多肽疫苗抗体稀释度为20 000倍,最佳反应时间60min,最佳显色时间为15min。本试验建立了一种检测细毛羊体内INH及GnIH抗体的方法,为今后对INH表位多肽疫苗抗体的研究提供了参考。

关键词：抑制素细毛羊主动免疫生殖激素

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龙眼种质资源果实糖组分及含量特征分析

果树学报 2015年第3期32卷 420-426页

作者：陈秀萍邓朝军胡文舜蒋际谋姜帆许奇志郑少泉福建省农业科学院果树研究所福州350013 福建省龙眼枇杷育种工程技术研究中心福州350013 福建省农业科学院福州350002

【目的】对63份龙眼种质资源成熟果实中的可溶性糖组分及含量进行分析,了解龙眼种质资源果实糖分组成及含量特点。【方法】用高效液相色谱法测定,数据进行聚类分析。【结果】龙眼种质资源成熟果实中的可溶性糖主要包括蔗糖、果糖和葡萄... 详细信息

【目的】对63份龙眼种质资源成熟果实中的可溶性糖组分及含量进行分析,了解龙眼种质资源果实糖分组成及含量特点。【方法】用高效液相色谱法测定,数据进行聚类分析。【结果】龙眼种质资源成熟果实中的可溶性糖主要包括蔗糖、果糖和葡萄糖,其中蔗糖含量最高,均值为94.14 mg·g-1,占总糖的62.5%;葡萄糖与果糖含量接近,分别占总糖的19.3%和18.2%;果糖、葡萄糖和蔗糖含量变异系数为25.0%~25.5%,蔗糖与单糖比值为0.75~4.83;总糖含量与甜度值、蔗糖与总糖含量间均呈极显著正相关(r=0.99**、0.82**),果糖与葡萄糖含量间呈极显著的直线正相关(斜率为1.060 5,R2=0.958 3);根据3种糖占总糖的比率,将63份龙眼种质资源分为2个类群5个组群,不同组群间果糖、葡萄糖和蔗糖含量占总糖的比率差异均达极显著水平。【结论】龙眼种质资源成熟果实中的可溶性糖主要由蔗糖、果糖和葡萄糖组成,均具有丰富的多样性,其中蔗糖含量最高,果糖和葡萄糖含量接近;63份龙眼种质资源分为糖组成特征明显的2个类群5个组群。

关键词：龙眼种质资源可溶性糖高效液相色谱法

慢病毒介导稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系构建及其活性验证

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广东农业科学 2023年第2期50卷 125-135页

作者：李晓娇朱新宇邹娴严霞何燕华罗成龙仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州510225 广东省农业科学院动物科学研究所/畜禽育种国家重点实验室/广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广东广州510640

【目的】筛选稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系(DF-1),并基于单链退火修复机制(Single Strand Annealing, SSA)的报告载体系统,检测DF-1细胞系中的Cas9核酸酶活性。【方法】将携带Cas9蛋白的慢病毒载体质粒与辅助质粒一起转染293T细胞... 详细信息

【目的】筛选稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系(DF-1),并基于单链退火修复机制(Single Strand Annealing, SSA)的报告载体系统,检测DF-1细胞系中的Cas9核酸酶活性。【方法】将携带Cas9蛋白的慢病毒载体质粒与辅助质粒一起转染293T细胞包装慢病毒,收集慢病毒Cas9上清液感染DF-1细胞,经抗生素筛选得到稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞,分别用PCR和Western blot验证阳性DF-1细胞表达Cas9蛋白的情况;选择鸡卵清白蛋白(OVA)基因的sgRNA序列,将sgRNA退火产物克隆至pYP152构建sgRNA表达载体,并在sgRNA靶位点两端设计引物扩增OVA基因靶片段,将靶片段克隆至报告载体pCMV-SSA-mCherry-HindⅢ,以破坏mCherry蛋白的表达,之后再将sgRNA表达载体与SSA报告载体共同转染稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞,最后在荧光显微镜下分析不同稳转株对mCherry蛋白表达的修复情况。【结果】经抗生素筛选得到27株稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系,采用PCR扩增稳转细胞基因组,结果显示这些细胞具有Cas9蛋白基因序列,Western blots试验结果显示上述稳转细胞株均表达Cas9蛋白;sgRNA表达载体与mCherry-SSA报告载体共转后,通过荧光显微镜观察发现筛选到的稳转细胞株均可恢复报告载体中mCherry蛋白的表达。【结论】成功构建了具有切割活性的稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系,可为后续在稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系上开展鸡相关功能基因研究提供基础材料。

关键词：稳定表达慢病毒 CRISPR/Cas9 SSA修复载体构建 DF-1

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家禽基因组选择研究进展

中国家禽 2014年第10期36卷 2-5页

作者：刘天飞瞿浩王劼舒鼎铭广东省农业科学院畜牧研究所广东广州510640 畜禽育种国家重点实验室广东广州510640

基因组选择(Genomic selection,GS)是新一代畜禽遗传评估方法,具有早期选择准确率高、可缩短世代间隔、对于低遗传力性状以及难以测量或测量费用较高的性状选择效率高等优点,目前已经广泛应用于奶牛育种中。本文综述了基因组选择方法在... 详细信息

基因组选择(Genomic selection,GS)是新一代畜禽遗传评估方法,具有早期选择准确率高、可缩短世代间隔、对于低遗传力性状以及难以测量或测量费用较高的性状选择效率高等优点,目前已经广泛应用于奶牛育种中。本文综述了基因组选择方法在家禽中的研究进展,并对我国家禽实施基因组选择方法进行展望。

关键词：基因组选择基因组育种值估计家禽

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桑树多倍体鉴定和育种研究现状

西北农业学报 2015年第12期24卷 1-13页

作者：焦锋薛忠民苏超西北农林科技大学蚕桑丝绸研究所陕西杨凌712100

近年来发现桑属植物存在14条染色体的2倍体(2n=2x=14)物种,而过去认为桑树2倍体有28条染色体(2n=2x=28),这些研究引起对桑属植物染色体组基数的关注。本文概述在植物多倍体研究中细胞学和分子技术的最新进展和应用;总结桑树多倍体类型... 详细信息

近年来发现桑属植物存在14条染色体的2倍体(2n=2x=14)物种,而过去认为桑树2倍体有28条染色体(2n=2x=28),这些研究引起对桑属植物染色体组基数的关注。本文概述在植物多倍体研究中细胞学和分子技术的最新进展和应用;总结桑树多倍体类型、形成原因、表型效应及其生产应用;介绍桑树4倍体、3倍体的人工诱变创制技术,包括诱变处理方法、诱变后的管理、诱变体的选择、3倍体的人工有性杂交培育等,以及桑树多倍体的鉴定方法。指出采用物理和化学方法诱导与杂交育种技术结合是桑树多倍体育种的关键技术。提出多倍体育种今后研究的主要方向,为桑树多倍体育种和应用研究提供理论参考。

关键词：桑树多倍体表型效应诱导技术育种

果叶兼用多倍体新桑品种的选育及其光合特性研究

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中国农业科学 2011年第3期44卷 562-569页

作者：王茜龄余茂德鲁成吴存容敬成俊西南大学生物技术学院

【目的】选育果叶兼用多倍体新桑品种,使桑树利用多元化,提高桑树的经济效益;探讨桑树多倍化以后光合特性,为桑树多倍体育种提供理论指导。【方法】采用单株选优与化学诱变相结合的染色体工程,选育果叶兼用多倍体桑树品种(2n=4X=56);测... 详细信息

【目的】选育果叶兼用多倍体新桑品种,使桑树利用多元化,提高桑树的经济效益;探讨桑树多倍化以后光合特性,为桑树多倍体育种提供理论指导。【方法】采用单株选优与化学诱变相结合的染色体工程,选育果叶兼用多倍体桑树品种(2n=4X=56);测定多倍体与无性系亲本二倍体桑的形态性状,光合日变化和叶绿素含量,对叶绿体超微结构进行观察。【结果】该品种年平均桑产叶量和产果量较对照品种‘红果2号’(2n=2X=28)分别高38%和45.89%。该品种桑叶养蚕成绩中的万头蚕产茧量、万头蚕产茧层量和4—5龄每100 kg桑叶产茧量较对照叶用桑‘湖桑32号’分别高4.65%、4.35%和5.2%。于2009年通过重庆市蚕桑品种审定。四倍体叶绿素含量、RuBPcase羧化活性提高,叶绿素a与叶绿素b的比值降低,叶绿体内部基粒片层和基质片层丰富,垛叠疏松,排列有序,净光合速率(Pn)高于无性系亲本二倍体。【结论】多倍体新桑品种不但桑叶产量和质量高,且产果量高;体细胞染色体加倍以后,光合性能增强。

关键词：桑树多倍体净光合速率叶绿体超微结构

甜菜磷脂酰肌醇转运蛋白基因SbSEC14的克隆及低温胁迫下的表达分析

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中国农学通报 2020年第32期36卷 39-48页

作者：邹锋康贾海伦丁广洲陈丽黑龙江省甜菜工程技术研究中心哈尔滨150080 国家糖料改良中心哈尔滨150080 黑龙江省高校甜菜遗传育种重点实验室哈尔滨150080

磷脂酰肌醇转运蛋白(PITPs)广泛存在于真核生物细胞中,能够在体外膜脂质双层之间调控磷脂酰肌醇(PtdIns)或者磷脂酰胆碱(PtdCho)单体的独立转运。参与磷酸肌醇代谢、膜运输、极性生长、信号转导、逆境胁迫、胞浆运动和细胞周期调节等多... 详细信息

磷脂酰肌醇转运蛋白(PITPs)广泛存在于真核生物细胞中,能够在体外膜脂质双层之间调控磷脂酰肌醇(PtdIns)或者磷脂酰胆碱(PtdCho)单体的独立转运。参与磷酸肌醇代谢、膜运输、极性生长、信号转导、逆境胁迫、胞浆运动和细胞周期调节等多种重要的生命过程,在植物的逆境响应以及发育调节中具有重要的作用。为了研究甜菜磷脂酰肌醇转运蛋白基因及其在低温胁迫下的表达情况。本研究以甜菜基因组数据库中一条预测的磷脂酰肌醇转运蛋白基因CRS1为模板,用基因克隆的方法得到一条全长765 bp,开放阅读框596 bp,编码198个氨基酸的甜菜SEC14基因,命名为SbSEC14。理化性质分析表明,该蛋白质为不稳定亲水蛋白;蛋白质二、三级结构分析表明,该蛋白质α-螺旋所占的比例最高,为47.47%,β-转角所占比例最低,为5.56%;蛋白质保守结构分析表明,该蛋白质有典型的SEC14结构域;蛋白质系统进化树分析表明,甜菜SbSEC14基因与菠菜、藜麦的磷脂酰肌醇运转蛋白基因亲缘关系最近;实时荧光定量结果表明,SbSEC14基因在甜菜中组成型表达,在甜菜叶中的表达量最高,在甜菜根中的表达量最低,在叶中表达量约为根中的2.5倍。甜菜幼苗4℃处理0、2、6、12、24 h,该基因在植株处理0~2 h时表达量呈上升趋势,在植株处理2~6 h时表达量呈下降趋势,在植株处理6~24 h时表达量趋于平稳状态。因此,预测该基因与甜菜抗低温胁迫相关。

关键词：甜菜磷脂酰肌醇运转蛋白 SEC14 低温非生物胁迫

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羊毛角蛋白融合型丝素蛋白膜材料的性能分析

丝绸 2023年第12期60卷 28-35页

作者：常雪宁何海波王依辰曾頔代方银赵天福西南大学资源昆虫高效养殖与利用全国重点实验室重庆400715 西南大学蚕桑纺织与生物质科学学院重庆400715 西南大学重庆市生物质纤维材料与现代纺织工程技术研究中心重庆400715

羊毛角蛋白关联蛋白(KAPs)是一类富含半胱氨酸的纤维蛋白,可以氧化形成二硫键,与疏水相互作用和范德华力一起赋予角蛋白高的机械强度和结构稳定性。为了扩展天然蚕丝蛋白质材料的研究,本文以通过转基因法得到的KAP融入型蚕丝为材料,制... 详细信息

羊毛角蛋白关联蛋白(KAPs)是一类富含半胱氨酸的纤维蛋白,可以氧化形成二硫键,与疏水相互作用和范德华力一起赋予角蛋白高的机械强度和结构稳定性。为了扩展天然蚕丝蛋白质材料的研究,本文以通过转基因法得到的KAP融入型蚕丝为材料,制备丝素蛋白膜,检测分析了膜的结构和性能。发现转KAP基因丝素膜含有更多的β-折叠结构,KAP的融入可以显著提高膜的机械性能和疏水性,融入不同种类的KAP可以获得性能不同的融合蛋白材料。通过转基因法制取蚕丝/羊毛角蛋白混合蛋白膜具有方法简便、无污染等特点,可为天然蚕丝材料的研究和应用提供新的思路。

关键词：丝素羊毛角蛋白再生蛋白膜结构机械性能亲水性

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