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hsc70-4基因促进家蚕核型多角体病毒复制增殖

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微生物学报 2019年第7期59卷 1275-1284页

作者：陈鹏包希艳董战旗康涛涛朱艳潘敏慧鲁成西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715

【目的】热休克应答(heat shock response, HSR)是机体细胞应对环境压力的一种重要防御策略,鉴定热休克蛋白在杆状病毒侵染宿主过程中的功能,并揭示其作用的分子机制,为探明宿主与病毒相互作用的分子基础提供理论依据。【方法】通过分... 详细信息

【目的】热休克应答(heat shock response, HSR)是机体细胞应对环境压力的一种重要防御策略,鉴定热休克蛋白在杆状病毒侵染宿主过程中的功能,并揭示其作用的分子机制,为探明宿主与病毒相互作用的分子基础提供理论依据。【方法】通过分子克隆技术对Bmhsc70-4基因进行克隆,并利用BioEdit及GeneDoc对其进行多序列比对分析;分别通过真核表达和基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统对Bmhsc70-4基因进行过表达和敲除;利用荧光定量PCR技术检测相应基因的表达量;通过对Caspase-9和Caspase-3/7活性的检测确定Bmhsc70-4基因对细胞凋亡的影响;通过免疫荧光验证BmHSC70-4和BmlAP的共定位情况,并进一步通过免疫共沉淀验证它们的相互作用。【结果】Bmhsc70-4基因开放阅读框为1950 bp,编码649个氨基酸,在昆虫间具有较高的保守性;BmNPV能够诱导Bmhsc70-4基因上调表达,过表达Bmhsc70-4基因能够促进BmNPV的增殖,敲除Bmhsc70-4基因能够抑制BmNPV的增殖,表明Bmhsc70-4基因的表达利于BmNPV的增殖;Bmhsc70-4基因具有抑制家蚕细胞凋亡的功能;荧光共定位显示BmHSC70-4和BmlAP共定位于细胞质中,免疫共沉淀结果表明两者可以相互作用;BmNPV侵染过程中Bmhsc70-4基因能够促进B加ap基因的表达。【结论】Bmhsc70-4基因具有抑制家蚕细胞凋亡的功能,在BmNPV侵染家蚕细胞过程中,能够与BmlAP相互作用,并促进BmNPV复制增殖。

关键词：家蚕 BmNPV 热休克应答细胞凋亡 Bmhsc70-4 Bmiap

家蚕CRISPR/Cpf1基因编辑系统建立

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生物工程学报 2021年第12期37卷 4342-4350页

作者：董战旗秦琪张新铃李柯洁陈鹏潘敏慧西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716 西南大学农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400716

自CRISPR/Cas9基因编辑系统成功应用于模式生物以来,因其快速、高效、便捷等特点,广泛应用于基因功能研究、基因治疗和基因工程等研究领域。与此同时,CRISPR/Cas系统不断在微生物界的发现也加速了新的基因编辑工具的不断涌现。CRISPR/C... 详细信息

自CRISPR/Cas9基因编辑系统成功应用于模式生物以来,因其快速、高效、便捷等特点,广泛应用于基因功能研究、基因治疗和基因工程等研究领域。与此同时,CRISPR/Cas系统不断在微生物界的发现也加速了新的基因编辑工具的不断涌现。CRISPR/Cpf1是第二类(Ⅴ型)能够编辑哺乳动物基因组的CRISPR系统,相比于CRISPR/Cas9基因编辑系统,能够利用5′T-PAM富集区增加基因组覆盖率,具有其切割位点为粘性末端和更不易同源重组修复等诸多优势。基于此,本研究构建了能够在家蚕细胞表达的3个不同来源的CRISPR/Cpf1 (AsCpf1、FnCpf1和LbCpf1)表达载体,选择高度保守的家蚕热休克蛋白基因BmHSP60和家蚕ATP酶家族BmATAD3A基因分别设计靶标gRNA,构建gHSP60-266R和gATAD3A-346R基因编辑载体。通过T7E1酶切分析和T克隆测序,鉴定3个Cpf1基因编辑系统AsCpf1、FnCpf1和LbCpf1对靶标基因BmHSP60和BmATAD3A的编辑效率。同时,利用Western blotting分析不同基因编辑系统敲除靶基因后对其BmATAD3A和BmHSP60蛋白翻译的影响。本研究成功构建了家蚕CRISPR/Cpf1基因编辑系统,能够在家蚕细胞中有效编辑家蚕基因组,为家蚕基因功能研究、基因工程和遗传育种开发了新技术与新方法。

关键词：家蚕基因编辑 CRISPR/Cpf1

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生态环境对金苦荞农艺性状与品质性状的影响

分子植物育种 2021年

作者：夏宇飞杨丽娟冉盼陈庆富贵州师范大学荞麦产业技术研究中心

本研究拟探究生态因子对金苦荞农艺性状与品质性状的影响，以及找到适宜金苦荞的推广地区。试验以新培育的3个金苦荞品系(金苦1612-16，金苦1612-243，金苦1612-248)为材料，使用方差分析、多重比较、相关性分析等方法研究了生态因子...

本研究拟探究生态因子对金苦荞农艺性状与品质性状的影响，以及找到适宜金苦荞的推广地区。试验以新培育的3个金苦荞品系(金苦1612-16，金苦1612-243，金苦1612-248)为材料，使用方差分析、多重比较、相关性分析等方法研究了生态因子对金苦荞农艺性状与品质性状的影响，并以平均隶属函数评估了3个金苦荞品系对四川凉山、江苏泰州、贵州贵阳3个地区的适应性。结果表明，3个品系的产量与总黄酮含量均高于甜荞与苦荞；粗蛋白含量与甜荞相仿。在产量上，3个地区无显著差异；总黄酮含量以四川凉山地区最高，为3.09%；粗蛋白含量以江苏泰州地区最高，为17.15%。株高与生育期以四川凉山地区显著高于其他地区。产量与生态因子相关性并不显著；农艺性状与品质性状均受到生态因子的显著影响。此外，金苦1612-248的平均隶属函数值最高，为0.9。本研究结果表明金苦荞的产量与品质相较于甜荞、苦荞更优异，并且产量更稳定。生产高黄酮的金苦荞应种植在温差较大的地区。生产高蛋白的金苦荞应在温度较高、降雨充足，光照强度较弱、光照时间较少的地区。金苦1612-16、金苦1612-243最适宜的种植地区为江苏泰州、金苦1612-248最适宜的种植地区为四川凉山。本试验筛选出了适合3个金苦荞品系的种植地区，并为金苦荞的育种与推广提供了参考。

关键词：

基于电子鼻与GC-MS融合技术的优质红茶和缺陷红茶香气品质评价

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食品科学 2024年第2期45卷 274-282页

作者：王立磊杨艳芹谢佳灵缪伊雯王启威江用文邓余良童华荣袁海波西南大学食品科学学院重庆400715 中国农业科学院茶叶研究所农业农村部特种经济动植物生物学与遗传育种重点实验室浙江杭州310008

依据专家感官审评结果将14个红茶样本按香气品质的优劣划分为优质红茶与缺陷红茶2组,基于快速气相电子鼻(fast gas chromatography-electronic-nose,GC-E-Nose)和气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)融合技术结合多元统计分析对2组茶样进行判别分析,筛选影响两类茶样分类的关键差异组分。结果显示:GC-E-Nose(44维)和GC-MS(73维)相融合可以得到117维融合数据集,用其建立的正交偏最小二乘判别分析模型可以实现两类红茶的准确分类,其模型解释能力和预测能力(R_(Y)^(2)=0.976,Q^(2)=0.959)较单一的GC-E-Nose或GC-MS数据模型更优。基于变量投影重要性>1.6和P技术可以实现缺陷红茶和优质红茶的快速、准确分类,该方法可作为传统感官审评方法的补充,为红茶品质控制和质量提升提供技术支撑。

关键词：信息融合技术红茶香气快速气相电子鼻气相色谱-质谱

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昆虫启动子的研究及应用

昆虫学报 2018年第3期61卷 360-370页

作者：童晓玲石津盖停停方春燕代方银西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法... 详细信息

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法进行综述,主要阐述昆虫启动子及其特定元件的鉴定方法,以及昆虫启动子的应用。

关键词：昆虫启动子特异序列鉴定应用害虫防治

苦荞COP1基因的生物信息学分析及参与花色苷合成研究

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西南农业学报 2022年第9期35卷 1977-1985页

作者：王丽娟赵佳利杨姣黄娟陈庆富邓娇贵州师范大学荞麦产业技术研究中心贵阳550001

【目的】研究苦荞(Fagopyrum tartaricum Gaertn)COP1(Constitutive Photomorphogenic1)基因(FtCOP1)的生物信息学特征及其在花色苷生物合成中的表达模式,为进一步研究COP1基因参与调控苦荞花色苷生物合成的分子机制奠定基础,并为利用Ft... 详细信息

【目的】研究苦荞(Fagopyrum tartaricum Gaertn)COP1(Constitutive Photomorphogenic1)基因(FtCOP1)的生物信息学特征及其在花色苷生物合成中的表达模式,为进一步研究COP1基因参与调控苦荞花色苷生物合成的分子机制奠定基础,并为利用FtCOP1改良苦荞品质提供参考。【方法】利用PCR技术克隆苦荞COP1基因,利用生物信息学工具对其基因结构和编码蛋白的理化性质、二级和三级结构、亚细胞定位、保守结构域以及其它物种的COP1蛋白进化关系进行分析。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析该基因在正常光照和黑暗处理苦荞芽菜中与花色苷生物合成结构基因的表达水平及花色苷含量的相关性。【结果】FtCOP1基因完整的CDS全长2082 bp,该基因结构由12个内含子与13个外显子构成,共编码693个氨基酸,其理论pI值为6.23,蛋白大小为75.876 kD,推测其具有亲水性,定位在细胞核中,含有1个跨膜螺旋结构域,无信号肽;二、三级结构主要元件为无规则卷曲和α螺旋,苦荞的COP1蛋白与藜麦COP1蛋白的亲缘关系最近,与其他物种COP1蛋白具有相似的motif和保守结构域,基因结构也相似。FtCOP1基因在黑暗培养的苦荞芽菜中的表达水平显著高于正常光照培养的苦荞芽菜,与花色苷生物合成结构基因的表达量及花色苷的积累量呈负相关。【结论】苦荞与其它物种COP1蛋白在植物进化中的功能比较保守,推测FtCOP1可能负调控光依赖型花色苷的生物合成。

关键词：苦荞 FtCOP1基因基因克隆生物信息学分析花色苷生物合成

2016―2022年新疆绿洲高品质棉花生产现状及加快建设高品质棉花种植带对策研究(Ⅱ)

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中国棉花 2024年第8期51卷 1-13页

作者：毛树春于小新葛群王雪姣郑艺买文选宋妮田立文王占彪中国农业科学院棉花研究所/棉花生物育种及产业技术工程研究中心河南安阳455000 中国农业科学院西部农业研究中心新疆昌吉831100 中国纤维质量监测中心北京100005 新疆维吾尔自治区农业气象台(新疆兴农网信息中心) 乌鲁木齐830002 中国科学院新疆生态与地理研究所乌鲁木齐830011 中国农业科学院农田灌溉研究所河南新乡453002 新疆农业科学院经济作物研究所乌鲁木齐830091

采用统计分类方法,对新疆绿洲2016―2022年3 595.8万t(15 915.5万包)公证检验(公检)原棉进行逐包品质分析,按生态亚区细分的10个亚亚区(北疆东部亚亚区、北疆中部亚亚区、北疆西部一亚亚区、北疆西部二亚亚区,南疆西部亚亚区、南疆中部... 详细信息

采用统计分类方法,对新疆绿洲2016―2022年3 595.8万t(15 915.5万包)公证检验(公检)原棉进行逐包品质分析,按生态亚区细分的10个亚亚区(北疆东部亚亚区、北疆中部亚亚区、北疆西部一亚亚区、北疆西部二亚亚区,南疆西部亚亚区、南疆中部亚亚区、南疆东部亚亚区、南疆南部亚亚区,东疆吐鲁番盆地亚亚区和东疆哈密盆地亚亚区)归类统计,厘清各亚亚区高品质原棉占比的状况,为高品质棉花种植带规划、建设和承建单位的遴选提供决策依据。结果表明,7年加权平均,各亚亚区高品质原棉占比表现为北疆西部二亚亚区(62.1%)>北疆东部亚亚区(45.9%)>北疆中部亚亚区(35.8%)>东疆吐鲁番盆地亚亚区(31.6%)>北疆西部一亚亚区(22.8%)>东疆哈密盆地亚亚区(20.8%)>南疆中部亚亚区(18.8%)>南疆东部亚亚区(17.9%)>南疆南部亚亚区(16.2%)>南疆西部亚亚区(4.7%)。围绕提升高品质棉花的生产能力和稳定性,建议在北疆天山北麓大部、东疆亚区、南疆中部亚亚区、南疆东部亚亚区率先开展高品质棉花种植带建设,遴选这些产地的县(县级市、区)和新疆生产建设兵团的团场率先开展整建制高品质棉花种植带的示范性创建,预计高品质棉花产量潜力在400万t左右,可为完成农业农村部提出的“十四五”高品质棉占比45%左右和今后更高高品质棉占比目标,加快建设棉花强国奠定基础;并提出在南疆西部亚亚区开展中短绒陆地棉种植带建设,形成差异化的陆地棉品质类型和结构,预计中短绒棉花产量潜力为100万t左右,以满足市场新需求。最后,探讨了高品质棉花种植带生产链建设实施方案的主要措施。

关键词：棉花区划亚亚区新疆绿洲高品质

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漂白粉对家蚕中肠产消化酶细菌的影响

应用昆虫学报 2019年第1期56卷 142-149页

作者：李畅周沂张玉琴陈林杨仁奎冯丽春农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室西南大学生物技术学院重庆400716 重庆市蚕业科学技术研究院重庆400700

【目的】本研究以漂白粉液浸渍消毒(以下简称浸消)桑叶饲喂家蚕为处理组,分析了不同组之间家蚕中肠细菌数量的差异;探讨了各组家蚕中肠产消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶)细菌的菌株数量、产酶种类及相对产酶能力的差异。【方... 详细信息

【目的】本研究以漂白粉液浸渍消毒(以下简称浸消)桑叶饲喂家蚕为处理组,分析了不同组之间家蚕中肠细菌数量的差异;探讨了各组家蚕中肠产消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶)细菌的菌株数量、产酶种类及相对产酶能力的差异。【方法】用16S rDNA测序技术对产酶菌株进行了鉴定,比较各组产酶菌种类的不同。【结果】饲喂不同有效氯浓度漂白粉液浸消叶对家蚕中肠细菌的数量、产酶菌数量均有抑制作用,且随有效氯浓度升高抑制作用增强;各处理组产蛋白酶菌株平均相对产酶能力均低于清水组,且清水组肠液中产淀粉酶菌株数明显多于各处理组;取食漂白粉液浸消桑叶后,家蚕中肠产消化酶细菌类群构成有一定变化,清水组和全程0.3%组产酶菌属相对较丰富,有Staphylococcus sp.、Lelliottiasp.和Buttiauxella sp.,其他处理组的产酶菌属相对单一,只有Staphylococcus sp.。【结论】以上结果说明漂白粉对家蚕中肠内细菌及产酶菌的增殖有抑制作用,中肠内产蛋白酶菌的产酶能力和产淀粉酶菌株的数量也受到抑制,对产酶菌类群构成有一定影响。

关键词：漂白粉家蚕中肠产酶菌

不同加工方式制作桑枝饲料的营养价值及用于肉牛饲养的瘤胃降解特性

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蚕业科学 2018年第4期44卷 594-600页

作者：郑旺黄传书张洪燕刘建勇杨凯黄先智沈以红家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学重庆400715 农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 重庆市蚕业科学技术研究院重庆400700 云南省草地动物科学研究院昆明650212

以冬季剪伐的桑枝条为原料,分别采用粉碎方式和膨化方式加工制作桑枝饲料,通过化学分析方法和尼龙袋法评价2种桑枝饲料的饲用价值。测定膨化桑枝饲料和粉碎桑枝饲料中的粗蛋白质含量均较高,质量分数分别达到7.97%、7.43%,且差异极显著（... 详细信息

以冬季剪伐的桑枝条为原料,分别采用粉碎方式和膨化方式加工制作桑枝饲料,通过化学分析方法和尼龙袋法评价2种桑枝饲料的饲用价值。测定膨化桑枝饲料和粉碎桑枝饲料中的粗蛋白质含量均较高,质量分数分别达到7.97%、7.43%,且差异极显著（P〈0.01）;膨化桑枝饲料中的粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的含量极显著低于粉碎桑枝饲料（P〈0.01）。根据RFV饲料评定标准评定膨化桑枝饲料的等级为3级,高于粉碎桑枝饲料。将装有永久性瘤胃瘘管的30月龄云南云岭牛作为供试肉牛,测定2种桑枝饲料营养物质在肉牛瘤胃中的降解率,结果是膨化桑枝饲料营养物质的降解率极显著高于粉碎桑枝饲料（P〈0.01）。研究结果表明,桑枝饲料中的粗蛋白含量较高,采用膨化方式加工的桑枝饲料的营养价值以及在肉牛瘤胃中的降解率均更高,可作为反刍动物的粗饲料。

关键词：桑枝饲料粉碎膨化营养成分肉牛瘤胃降解率