检索结果-南通市图书馆

dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物科学学报 2011年第3期29卷 385-391页

作者：张帆姜玲华中农业大学园艺林学学院/教育部园艺植物生物学重点实验室国家果树脱毒种质资源室内保存中心武汉430070

以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外... 详细信息

以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外壳蛋白CP基因反向重复表达载体pHellsgate12-CPIR（简称PHG12-CPIR）分别转化到烟草和拟南芥中,获得阳性植株,并利用渗透法和农杆菌介导的瞬时表达体系将pHG12-CPIR载体导入到番木瓜中。对转基因植株进行攻毒试验并分析了其抗病性。在接种3~7d内,在拟南芥和番木瓜上转基因植株的发病情况较轻,而野生型植株叶片与转基因植株相比,均表现出不同程度的黄化、皱缩和枯斑等症状。在接种PRSV后,番木瓜和拟南芥转化植株表现症状的叶片的比例与对照相比,结果显著低于对照,而在烟草植株上症状表现的差异不明显。在3种植物上RT-PCR检测结果显示,在接种番木瓜环斑病毒PRSV后,野生型植株中有高浓度的病毒积累,而转pHG12-CPIR基因植株中几乎没有病毒积累,推测转pHG12-CPIR基因植株中瞬时表达系统已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。

关键词：番木瓜环斑病毒 CP基因番木瓜 RNAi 抗病性渗透法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

红肉猕猴桃离体快速繁殖技术研究

华中农业大学学报 2008年第1期27卷 101-104页

作者：严姜黎张翼邢梅冯向梅姜玲国家果树脱毒种质资源室内保存中心/教育部园艺植物生物学重点实验室/华中农业大学园艺林学学院武汉430070

以红阳红肉猕猴桃为试材,通过调整植物生长调节剂浓度与种类,筛选出适宜于红肉猕猴桃植株愈伤组织形成、不定芽增殖和植株生根的最佳配方。结果表明:在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中,增殖率可达87.5%;使用MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5... 详细信息

以红阳红肉猕猴桃为试材,通过调整植物生长调节剂浓度与种类,筛选出适宜于红肉猕猴桃植株愈伤组织形成、不定芽增殖和植株生根的最佳配方。结果表明:在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中,增殖率可达87.5%;使用MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA培养基,不定芽的增殖系数达到最高值3.7个;在1/2 MS+0.7 mg/L IBA培养基中,不定芽诱导生根效果较佳。

关键词：红肉猕猴桃愈伤组织不定芽增殖生根

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

芽孢杆菌处理对柑桔苗木黄龙病抑制效果

中国农业大学学报 2021年第8期26卷 72-83页

作者：胡党振徐嫒媛于梦怡姜玲华中农业大学园艺林学学院/园艺植物生物学教育部重点实验室/国家果树脱毒种质资源室内保存中心/农业农村部华中地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室武汉430070

为探明芽孢杆菌处理对柑桔苗木黄龙病的抑制效果,本研究对复合菌剂进行分离得到单菌落,对No.4菌株进行细菌纯培养鉴定,通过序列测定确定其分类地位,并采用固体发酵方法制备菌剂,用该菌剂对3个品种的盆栽苗木进行灌根处理。结果表明:No.... 详细信息

为探明芽孢杆菌处理对柑桔苗木黄龙病的抑制效果,本研究对复合菌剂进行分离得到单菌落,对No.4菌株进行细菌纯培养鉴定,通过序列测定确定其分类地位,并采用固体发酵方法制备菌剂,用该菌剂对3个品种的盆栽苗木进行灌根处理。结果表明:No.4菌株属芽孢杆菌属,革兰氏染色呈阳性;通过16SrDNA和recA基因测序分析,证明该No.4菌株与贝莱斯芽孢杆菌同源性达93%;该菌剂灌根21次时,‘沃柑’和‘沙糖橘’黄龙病阳性率由处理前的100%分别降低至50%和75%,而对照样品的阳性率均保持不变;No.4菌剂处理能促进‘沃柑’、‘沙糖橘’和南丰蜜橘3个品种的新生根系增多,褐变根系减少;扫描电镜和石蜡切片观察表明:南丰蜜橘韧皮部杆菌造成根系褐变,染病植株根系的表皮细胞易产生木栓化,表皮细胞上翘,内皮层产生空洞,结构破坏;No.4菌剂处理后,病原诱导启动子GST1及转录因子WRKY22和WRKY24基因的mRNA相对表达量提高。可见,No.4菌剂对柑桔苗木黄龙病有一定程度的抑制效果,对褐变根系有明显的缓解作用。

关键词：贝莱斯芽孢杆菌韧皮部杆菌实时定量根系褐变抗性基因

地高辛(DIG)和碱性磷酸酶标记cDNA探针检测PRSV

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2007年第3期15卷 496-502页

作者：姜玲张红艳张明涛刘小梅伏卉国家果树脱毒种质资源室内保存中心武汉430070 华中农业大学园艺林学学院教育部园艺植物生物学重点实验室

根据GenBank发表的PRSV(番木瓜环斑病毒)中国Sm株系的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,以美中红(Caricapapaya ***)带病样品的RNA为模板进行RT-PCR扩增,将其目的cDNA片段克隆到pGEM-Teasy质粒载体上。以重组质粒作模板,用PCR-DIG标记方... 详细信息

根据GenBank发表的PRSV(番木瓜环斑病毒)中国Sm株系的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,以美中红(Caricapapaya ***)带病样品的RNA为模板进行RT-PCR扩增,将其目的cDNA片段克隆到pGEM-Teasy质粒载体上。以重组质粒作模板,用PCR-DIG标记方法制备cDNA探针,另一种非放射性探针是经凝胶电泳分离、纯化cDNA片段,用碱性磷酸酶直接进行标记。利用地高辛(DIG)标记和碱性磷酸酶直接标记的cDNA探针核酸分子杂交及RT-PCR方法对PRSV进行了检测。结果表明,(1)测序结果表明美中红No.2序列与中国优势株系Sm的同源性为94.7%;(2)DIG标记的3种cDNA探针(861,455和215bp)对样品的总RNA检测结果一致,且861bp的探针杂交斑点最为清晰,上述核酸杂交结果与RT-PCR检测结果相符,核酸分子杂交检测的灵敏度和特异性能满足常规检测的需要;(3)碱性磷酸酶直接标记861bp的cDNA探针可进行PRSV的斑点杂交检测,可获得有效的杂交结果;(4)DIG标记探针对叶脉进行了印迹杂交检测,结果与RT-PCR检测结果相符。

关键词：番木瓜环斑病毒(PRSV) 地高辛(DIG)标记探针碱性磷酸酶直接标记杂交 RT-PCR

两种芽孢杆菌共处理对感染黄龙病的柑桔苗的作用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国南方果树 2022年第1期51卷 9-18页

作者：徐媛媛胡党振南京詹平姜玲华中农业大学园艺林学学院/园艺植物生物学教育部重点实验室/国家果树脱毒种质资源室内保存中心/华中地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室武汉430070

以南丰蜜桔和沙糖桔黄龙病感病苗为试材,利用贝莱斯芽孢杆菌TD2-1(Bacillus velezensisi TD2-1)和解淀粉芽孢杆菌TD2-2(Bacillus amyloliquefaciens TD2-2)固体发酵培养物等量混合后配制的悬浊液对苗木进行多次灌根处理,采用qPCR(quanti... 详细信息

以南丰蜜桔和沙糖桔黄龙病感病苗为试材,利用贝莱斯芽孢杆菌TD2-1(Bacillus velezensisi TD2-1)和解淀粉芽孢杆菌TD2-2(Bacillus amyloliquefaciens TD2-2)固体发酵培养物等量混合后配制的悬浊液对苗木进行多次灌根处理,采用qPCR(quantitative polymerase chain reaction)和PCR(polymerase chain reaction)方法对处理前和处理后的叶脉和枝皮进行了黄龙病病原的分子检测,并对相关生理指标和根部特征进行了分析和观察。结果表明,经两种菌剂15次灌根处理,南丰蜜桔苗木的黄龙病阳性率从100%降低至53.3%;与清水对照组相比,菌剂处理组的叶片胼胝质含量降低了18.37%,超氧化物歧化酶、硫氧还蛋白氧化还原酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均有所提高,而褐变根系明显减少。感病沙糖桔苗木经过23次菌剂处理后,新根发达,褐变现象减轻。反相高效液相色谱分析表明,解淀粉芽孢杆菌TD2-2有表面活性素产生。

关键词：芽孢杆菌柑桔黄龙病褐变防御酶表面活性素

GatewayTM系统快速构建番木瓜环斑病毒CP基因反向重复序列表达载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2008年第3期16卷 526-529页

作者：姜玲秦长平伏卉华中农业大学园艺林学学院国家果树脱毒种质资源室内保存中心教育部园艺植物生物学重点实验室武汉430070

设计含有attB侧翼序列的引物,用于番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus)的外壳蛋白基因(CP)基因的PCR扩增。在BP重组酶的作用下,将CP基因与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与目的载体pHell... 详细信息

设计含有attB侧翼序列的引物,用于番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus)的外壳蛋白基因(CP)基因的PCR扩增。在BP重组酶的作用下,将CP基因与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与目的载体pHellsgate12发生重组反应,再进行平板培养筛选及PCR扩增和酶切反应。结果证明,用限制性内切酶XhoⅠ酶切消化后,琼脂糖凝胶电泳获得了预期长度为1700bp的重组片段;以启动子和外壳蛋白基因及外壳蛋白基因和终止子序列为基础,分别设计2对引物,经PCR扩增分别获得582和773bp片段。结果表明,获得了含有内含子的CP基因反向重复结构的表达载体。

关键词：关健词:番木瓜环斑病毒反向重复序列重组 GatewayTM

柑橘黄龙病病原菌nrdB基因的原位杂交分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺学报 2023年第12期50卷 2689-2700页

作者：张少然宗琪刘阳姜玲华中农业大学农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室武汉430070 华中农业大学园艺林学学院果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室国家果树脱毒种质资源室内保存中心武汉430070

柑橘植株是否感染黄龙病,可通过qPCR检测其病原韧皮部杆菌(CandidatusLiberibacter Asiaticus,CLas)来判断,但是不同组织样本影响检测结果,因此有必要研究韧皮部杆菌在不同组织中的定位。以柑橘黄龙病韧皮部杆菌的核糖核苷酸还原酶(Ribo... 详细信息

柑橘植株是否感染黄龙病,可通过qPCR检测其病原韧皮部杆菌(CandidatusLiberibacter Asiaticus,CLas)来判断,但是不同组织样本影响检测结果,因此有必要研究韧皮部杆菌在不同组织中的定位。以柑橘黄龙病韧皮部杆菌的核糖核苷酸还原酶(RibonucleotideReductase,RNR)β亚基基因序列为依据,设计和制备123 bp的RNA探针,经原位杂交试验,在显微镜下能清晰地观察到阳性植株筛管和伴胞中的可视化蓝色杂交信号,导管呈环纹结构。CLas在不同器官中的分布存在显著差异,与新生组织根尖和茎尖相比,RNR基因在枝皮、叶柄、叶脉的韧皮部中的定位更准确。原位杂交的可视化结果与qPCR检测结果一致。

关键词：柑橘韧皮部杆菌 RNA原位杂交核糖核苷酸还原酶β亚基基因

墨兰组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺学报 2005年第6期32卷 1056-1060页

作者：姜玲张明涛陈泽雄马国华华中农业大学园艺林学学院园艺植物生物学教育部重点实验室国家果树种质资源脱毒室内保存中心武汉430070 中国科学院华南植物园广州510650

对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病叶样... 详细信息

对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病叶样提取的RNA经反向转录和PCR扩增反应,在琼脂糖凝胶电泳中检测到长为767 bp的CymMv病原特异扩增产物,而健康墨兰叶样中未检测到该扩增产物.单纯利用原球茎顶端分生组织培养获得的试管苗,脱毒率为72.9%;原球茎顶端分生组织经过20 mg·L-1的三氮唑核苷处理,可以获得100%的无病毒苗.虽然三氮唑核苷处理造成原球茎顶端分生组织细胞一定程度的伤害,但经过5～6个月的培养,分生组织能恢复生长,不定芽能有效地增殖,并获得了再生植株.当三氮唑核苷处理浓度为40 mg·L-1时,原球茎的顶端分生组织出现透明和褐变现象,细胞活力难以恢复.

关键词：墨兰建兰花叶病毒三氮唑核苷 RT—PCR

聚-γ-谷氨酸对柑橘苗木性状和GABA的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华中农业大学学报 2020年第5期39卷 108-114页

作者：宗琪张生才范国泰孙萌姜玲华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 国家现代产业技术体系福建永春芦柑综合试验站永春362600 华中农业大学园艺林学学院/国家果树脱毒种质资源室内保存中心/农业农村部华中地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室武汉430070

通过株高、冠径及酶活的测定研究聚-γ-谷氨酸(PGA)水溶液灌根对柑橘苗木个体性状和叶片中抗性相关酶的影响,并采用亲水相互作用色谱(HILIC LC-MS/MS)分析了PGA灌根前后叶片中200个靶向代谢物含量的变化。结果表明:PGA处理能促进苗木株... 详细信息

通过株高、冠径及酶活的测定研究聚-γ-谷氨酸(PGA)水溶液灌根对柑橘苗木个体性状和叶片中抗性相关酶的影响,并采用亲水相互作用色谱(HILIC LC-MS/MS)分析了PGA灌根前后叶片中200个靶向代谢物含量的变化。结果表明:PGA处理能促进苗木株高、冠径和嫁接苗分枝数的增加;PGA处理后,柑橘叶片中超氧化物歧化酶(SOD,抗氧化物保护酶)、过氧化物酶(POD,参与过氧化产物的清理)和多酚氧化酶(PPO,酚类物质代谢的参与酶)的活性增加;PGA处理后,柑橘叶片中L-谷氨酸含量下降73.2%倍,而γ-氨基丁酸(GABA)含量增加了1.6倍,N6-甲基腺嘌呤含量提高2.3倍。靶向代谢物分析获得109个代谢物的定量结果,其中,13种代谢物对照与处理的差异达到显著水平。

关键词：聚-γ-谷氨酸柑橘苗木靶向代谢物 γ-氨基丁酸抗性相关酶良种繁育