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旋毛虫新生幼虫细胞外囊泡的分离鉴定及组学分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第2期42卷 225-233页

作者：刘毅蔡玉春陈家旭陈韶红俞英昉中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际研究中心上海200025 上海健康医学院医学技术学院上海201318

目的分离并鉴定旋毛虫新生幼虫分泌的细胞外囊泡(EV)主要成分,了解新生幼虫EV的功能。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,手机旋毛虫肌幼虫,昆明小鼠灌胃感染肌幼虫(2000条/鼠)后5 d取小肠,网筛法收集旋毛虫成虫,成虫置于RPMI 1640培养液中培... 详细信息

目的分离并鉴定旋毛虫新生幼虫分泌的细胞外囊泡(EV)主要成分,了解新生幼虫EV的功能。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,手机旋毛虫肌幼虫,昆明小鼠灌胃感染肌幼虫(2000条/鼠)后5 d取小肠,网筛法收集旋毛虫成虫,成虫置于RPMI 1640培养液中培养48 h后收集新生幼虫。采用差速超速离心法提取旋毛虫新生幼虫培养液中的EV,透射电子显微镜观察EV形态,使用纳米颗粒跟踪分析技术检测EV的粒径,蛋白质免疫印迹(Western blotting)验证EV蛋白。对新生幼虫及其EV进行蛋白组质谱分析和miRNA测序分析,采用t检验比较新生幼虫及其EV之间蛋白和miRNA的表达差异。差异表达蛋白和miRNA靶基因进行基因本体论(GO)功能条目富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。使用WoLFPSORT分析蛋白的亚细胞定位。结果透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析结果显示,旋毛虫新生幼虫分泌的EV为“杯盘”形膜性囊泡,平均粒径为(101.7±1.8)nm。Western blotting结果显示,新生幼虫EV能与旋毛虫感染小鼠血清产生特异性条带,相对分子质量约为65000。蛋白组质谱分析结果显示,新生幼虫及其EV样品中分别检测到1424和231种蛋白,有220种蛋白在两组样品中均有表达,其中116种表达有差异(在EV中31种表达上调、85种表达下调)。蛋白亚细胞定位分析结果显示,差异蛋白主要分布于细胞质(30.2%,35/116)、细胞核(19.0%,22/116)和细胞膜(17.2%,20/116)。miRNA测序结果显示,新生幼虫及其EV样品分别检测到183和117种miRNA,有46种miRNA在两组样品中均有表达,其中40种表达有差异(在EV中10种表达上调、30种表达下调)。在EV中表达上调的10种miRNA中,let-7-5p表达最高。GO功能条目富集分析结果显示,差异蛋白有57种属于细胞组成、73种具有分子功能、63种参与生物过程,差异miRNA的靶基因主要与自噬相关12基因转移酶活性、胞质泛素连接酶复合物、细胞对紫外线A的响应和钙离子稳态等条目有关。KEGG通路富集分析结果显示,差异蛋白主要富集在代谢途径、内质网中的蛋白质加工等相关通路,差异miRNA的靶基因仅涉及自噬-其他1条途径。结论本研究分离并鉴定了旋毛虫新生幼虫分泌的EV,检测到新生幼虫及其EV间差异表达的116种蛋白和40种miRNA,主要参与代谢、自噬等途径,推测新生幼虫EV可能在旋毛虫感染早期逃避宿主免疫防御的过程中发挥重要作用。

关键词：旋毛虫新生幼虫细胞外囊泡蛋白组学 miRNA测序

生育力下降现状的生殖医学对策——生育力保存

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四川大学学报（医学版） 2024年第3期55卷 507-512页

作者：朱慧莉黄薇四川大学华西第二医院生殖医学科成都610041 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学) 成都610041 国家卫生健康委时间生物学重点实验室(四川大学) 成都610041

全球育龄人群呈现生育力下降趋势,人类生育问题面临巨大的挑战,生育力保存技术应运而生。生育力保存,即针对因恶性肿瘤放化疗及其他一些影响生育的疾病,为患者保存生育能力。本文从生育力保存现状、生育力保存方法和应用、儿童的生育力... 详细信息

全球育龄人群呈现生育力下降趋势,人类生育问题面临巨大的挑战,生育力保存技术应运而生。生育力保存,即针对因恶性肿瘤放化疗及其他一些影响生育的疾病,为患者保存生育能力。本文从生育力保存现状、生育力保存方法和应用、儿童的生育力保存、生育力保存的实施这4个方面,对生育力保存作一综述。人类生育力保存主要应用于早期及预后良好的年轻及儿童肿瘤患者,影响性腺功能的慢性疾病和环境暴露因素。生育力保存的方法包括女性的卵母细胞冷冻、胚胎冷冻和卵巢组织冷冻,和男性的精子冷冻和睾丸组织冷冻。青春期前的儿童只能采取卵巢组织冷冻或睾丸组织冷冻。当患者有生育需求时,复苏冷冻的精子进行辅助生育,复苏冷冻的胚胎或复苏冷冻的卵母细胞体外受精后的胚胎进行胚胎移植,或者复苏冷冻的性腺组织进行自体移植,实现其生育后代的目的。生育力保存为人类生育提供新的方法,应遵循伦理原则,充分保障患者及其子代的权益。

关键词：生育力保存肿瘤冷冻生殖医学综述

沿血管周围间隙弥散张量成像分析法对9～18岁孤独症谱系障碍患者脑类淋巴系统改变的探讨

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放射学实践 2024年第9期 1117-1121页

作者：徐滢莹苏醒吉兆正陈佳璐李雪刘靖北京大学第六医院北京大学精神卫生研究所国家卫生健康委员会精神卫生学重点实验室(北京大学)国家精神心理疾病临床医学研究中心(北京大学第六医院)

目的:基于血管周围间隙弥散张量成像分析法(DTI-ALPS)探讨9～18岁孤独症谱系障碍(ASD)男性患者脑类淋巴系统功能改变，以及沿血管周围间隙(ALPS)指数与临床表现间的关系。方法:纳入北京大学第六医院符合美国精神障碍诊断与统计手册第五... 详细信息

目的:基于血管周围间隙弥散张量成像分析法(DTI-ALPS)探讨9～18岁孤独症谱系障碍(ASD)男性患者脑类淋巴系统功能改变，以及沿血管周围间隙(ALPS)指数与临床表现间的关系。方法:纳入北京大学第六医院符合美国精神障碍诊断与统计手册第五版(DSM-5)孤独症谱系障碍诊断标准的9～18岁男性34例，以及年龄相匹配的正常男性对照30例。采集所有受试者弥散张量成像(DTI)数据并计算ALPS指数，比较2组受试者临床资料和双侧ALPS指数(ALPS-L、ALPS-R)的差异。采用相关性分析检验双侧ALPS指数与社交反应量表(SRS)的相关性。结果:与正常对照组相比，ASD组ALPS-L及ALPS-R指数显著减低(t=2.060,P=0.044;t=2.675,P=0.010)。总体ALPS-L与SRS量表各因子分及总分无明显相关关系(P均>0.05),总体ALPS-R与SRS社交认知因子分、社交沟通因子分、社交动机因子分无明显相关关系(P均>0.05),总体ALPS-R与SRS社交知觉因子分、孤独症行为方式因子分及SRS总分均呈负相关关系(r=-0.309,P=0.013;r=-0.359,P=0.004;r=-0.298,P=0.017)。结论:ASD患者存在大脑类淋巴系统功能异常，类淋巴系统功能异常与ASD临床症状相关，可能是ASD患者潜在病理基础之一。

关键词：孤独症谱系障碍类淋巴系统血管周围间隙弥散张量成像磁共振成像

基于时间序列模型的海南省白纹伊蚊种群动态与气象影响因素研究

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中国热带医学 2024年第3期24卷 282-286,314页

作者：李明发刘莹刘璞瑜吴群曾雪霞孙定炜杨国静海南医学院国家卫生健康委员会热带病防治重点实验室热带医学院公共卫生与全健康国际学院海南海口571199 海南省疾病预防控制中心热带病与慢性病预防控制所海南海口570203

目的探讨基于气象因子的时间序列模型在海南省白纹伊蚊种群密度中的应用,为海南省登革热防控提供科学依据。方法采用双层叠帐法和布雷图指数法,对2017—2022年海南省18个市县不同生境的白纹伊蚊逐月进行监测,记录帐诱指数和布雷图指数... 详细信息

目的探讨基于气象因子的时间序列模型在海南省白纹伊蚊种群密度中的应用,为海南省登革热防控提供科学依据。方法采用双层叠帐法和布雷图指数法,对2017—2022年海南省18个市县不同生境的白纹伊蚊逐月进行监测,记录帐诱指数和布雷图指数。采用Mann-Kendall趋势性检验分析2个密度指数的时间变化趋势;采用Spearman相关分别分析各气象因子与两个指数的关联强度,并剔除无关变量,进一步通过全子集回归法筛选出最终变量;基于时间序列分析对2个密度指数分别构建3个时间序列模型,并以均方根误差、平均绝对误差等为精度评价指标确定最优模型;对2023—2024年的密度指数进行预测。统计分析均在R(4.3.1)中进行。结果帐诱指数和布雷图指数整体呈逐年下降趋势(Mann-Kendall趋势检验Z分别为-6.15和-4.03,P均<0.05);与帐诱指数关联性最强的气象因子是月平均最低气温;与布雷图指数关联性最强的气象因子是月平均最低气温和月平均相对湿度。综合各项评估指标,多元时间序列模型精度最高。2023年和2024年帐诱指数和布雷图指数有1~2个峰值,且峰期分别在6—9月和5—9月。2023年预测值与实测值特征基本一致,预测效果显著。结论本研究在季节性时间序列的基础上加入了气象因子,更准确地预测了2023年和2024年海南省伊蚊密度,可为海南省登革热防控提供参考依据。

关键词：白纹伊蚊媒介监测消长趋势影响因素多元时间序列

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Ⅲa基因缺失的人7型腺病毒载体系统的建立

病毒学报 2024年第2期40卷 365-373页

作者：王洋王永进侯文哲郭小娟郑贵森邹小辉甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京100052

为了获得既能高效扩增外源基因,又不产生复制型子代病毒的腺病毒载体,我们构建了一个Ⅲa基因缺失的单周期腺病毒载体。本研究在前期已构建的E3区携带绿色荧光蛋白GFP的人7型腺病毒载体pK-Ad7E3GFP基础上进行。首先设计引物扩增包含氨苄... 详细信息

为了获得既能高效扩增外源基因,又不产生复制型子代病毒的腺病毒载体,我们构建了一个Ⅲa基因缺失的单周期腺病毒载体。本研究在前期已构建的E3区携带绿色荧光蛋白GFP的人7型腺病毒载体pK-Ad7E3GFP基础上进行。首先设计引物扩增包含氨苄青霉素抗性基因和质粒复制起点的AMP-ORI片段,利用限制性内切酶Asc I将pK-Ad7E3GFP切割为29.1kb与7.7kb的大小片段,其中,7.7kb小片段与AMP-ORI片段组装,获得第一个中间质粒pA-Ad7E3GAscI;经重叠延伸PCR、酶切、DNA组装等方法,将pA-Ad7E3GAscI上的Ⅲa基因进行删除,获得第二个中间质粒pA-AscDⅢa;经Pme I酶切的pA-AscDⅢa与上述29.1kb大片段经DNA组装后,得到重组腺病毒质粒pK-Ad7DⅢaE3GFP。同时,构建携带Ⅲa基因的真核表达载体pTPL-Ⅲa,转染293细胞,经G418筛选构建细胞系293-Ⅲa。结果发现,经Pme I线性化的pK-Ad7DⅢaE3GFP质粒转染293-Ⅲa细胞,7d后可见荧光聚集,且逐渐增大,表明重组腺病毒Ad7DⅢaE3GFP拯救成功;提取病毒基因组进行PCR鉴定,结果与预期相符;细胞培养上清经负染后,在电镜下可见腺病毒典型的正二十面体形态,培养细胞中也可见病毒呈晶格排列;以上结果均表明Ad7DⅢaE3GFP拯救成功。本研究成功建立了Ⅲa基因缺失的单周期人7型腺病毒载体系统,为该载体的研究与应用奠定基础。

关键词： Ⅲa基因人7型腺病毒载体单周期载体 DNA组装病毒拯救

注意缺陷多动障碍共患对立违抗障碍儿童大脑皮质形态学特点

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中国心理卫生杂志 2024年第2期38卷 97-103页

作者：司飞飞刘璐李海梅董敏曹庆久孙黎钱秋谨王玉凤北京大学第六医院北京大学精神卫生研究所国家卫生健康委员会精神卫生学重点实验室(北京大学)国家精神心理疾病临床医学研究中心(北京大学第六医院)北京100083

目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)共患对立违抗障碍(ODD)儿童的大脑皮质形态学特点。方法:选取符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)诊断标准的ADHD共患ODD儿童16例,不共患ODD的ADHD儿童20例,及性别、年龄匹配的36例正常对照儿... 详细信息

目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)共患对立违抗障碍(ODD)儿童的大脑皮质形态学特点。方法:选取符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)诊断标准的ADHD共患ODD儿童16例,不共患ODD的ADHD儿童20例,及性别、年龄匹配的36例正常对照儿童。采用中国修订韦氏儿童智力量表(C-WISC)评估智商。所有被试进行脑磁共振成像扫描及数据采集,采用FreeS urfer软件分析大脑皮质形态学指标。结果:ADHD伴ODD组[(6528.1±857.5)mm^(3)vs.(7591.2±657.3)mm^(3)]、ADHD不伴ODD组[(6867.2±841.3)mm^(3)vs.(7591.2±657.3)mm^(3)]左外侧颞上回脑区皮质体积均小于正常对照组(P0.05);ADHD组左外侧颞上回脑区皮质体积与ODD症状的相关无统计学意义(P>0.05)。3组间皮质厚度、表面积和曲率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:左外侧颞上回皮质体积减小可能是ADHD儿童的重要脑结构异常指征,共患ODD未改变这一特点。

关键词：儿童注意缺陷多动障碍对立违抗障碍大脑皮质形态学

HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 135-141页

作者：毛燕俞佳丽袁静达静静余福勋查艳贵州省人民医院肾内科贵州贵阳550002 贵州大学医学院生物医学系贵州贵阳550025 国家卫生健康委员会肺脏免疫性疾病诊治重点实验室贵州贵阳550002

目的探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏... 详细信息

目的探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

关键词：高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1) BV2小胶质细胞下丘脑炎症 Toll样受体4(TLR4)

马方综合征患者眼前节生物学参数和FBN1基因型对眼后节病变的影响

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中华眼科杂志 2024年第7期60卷 601-610页

作者：刘燕陈天慧蒋永祥复旦大学上海医学院眼科学与视觉科学系、复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科、国家卫生健康委员会/中国医学科学院近视眼及相关眼病重点实验室上海200031

目的探讨马方综合征(MFS)患者眼后节病变的特征及其与眼前节生物学参数及FBN1基因型的关系。方法横断面研究。收集2013年1月至2023年3月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科就诊的MFS患者121例,其中男性76例,女性45例;年龄为(11.72±11.66... 详细信息

目的探讨马方综合征(MFS)患者眼后节病变的特征及其与眼前节生物学参数及FBN1基因型的关系。方法横断面研究。收集2013年1月至2023年3月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科就诊的MFS患者121例,其中男性76例,女性45例;年龄为(11.72±11.66)岁。采用B超观察是否存在后巩膜葡萄肿,根据超广角眼底像、彩色眼底像和相干光层析扫描结果观察是否存在黄斑病变并判断其类型。黄斑病变按照萎缩-牵引-新生血管分级系统进行分类。收集患眼眼前节生物学参数,包括眼轴长度、角膜平均曲率、角膜散光度数、角膜水平径、前房深度及晶状体厚度,并观察晶状体脱位的方向和范围。采用基于面板的全眼科遗传病基因组进行下一代测序对患者的FBN1基因突变进行了分子遗传学分析,并分析基因型和眼前节生物学参数对眼后节表现的影响。结果共有60例患者出现眼后节病变,包括视网膜脱离(4例,3.31%),黄斑病变(47例,38.84%)和后巩膜葡萄肿(54例,44.63%)。是否合并后巩膜葡萄肿[23.09(22.24,24.43)和27.04(25.44,28.88)mm],以及是否合并黄斑病变[23.16(22.24,24.61)和27.04(25.74,28.78)mm]的患者间,眼轴长度的差异均有统计学意义(均P会影响萎缩性黄斑病变的发生(均P<0.05)。FBN1突变位于转化生长因子β调节序列的患者后巩膜葡萄肿和黄斑病变的占比最高,均为10/11。结论MFS患者后巩膜葡萄肿和黄斑病变的发生率较高,并且倾向于向严重程度更高的分级发展。年龄、眼轴长度、前房深度、角膜散光度数,以及FBN1基因突变位点所在位置及区域均是MFS患者眼后节病变的影响因素。

关键词：马凡综合征眼后段眼前半段巩膜疾病黄斑变性新生血管化,病理性轴长度,眼遗传关联研究

基于症状网络分析探讨情绪失调在注意缺陷多动障碍与对立违抗障碍间的作用

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中华精神科杂志 2024年第9期57卷 586-594页

作者：高媛刘倩溶李海梅潘美蓉朱子青司飞飞赵梦婕岳鑫鑫王玉凤钱秋谨刘璐北京大学第六医院北京大学精神卫生研究所国家卫生健康委员会精神卫生学重点实验室(北京大学)国家精神心理疾病临床医学研究中心(北京大学第六医院) 北京

目的基于偏相关网络模型与贝叶斯网络模型探讨情绪失调与注意缺陷多动障碍(attention-deficit/hyperactivity disorder, ADHD)和对立违抗障碍(oppositional defiant disorder, ODD)症状系统间的关系。方法采用横断面研究, 纳入2002年9月... 详细信息

目的基于偏相关网络模型与贝叶斯网络模型探讨情绪失调与注意缺陷多动障碍(attention-deficit/hyperactivity disorder, ADHD)和对立违抗障碍(oppositional defiant disorder, ODD)症状系统间的关系。方法采用横断面研究, 纳入2002年9月至2022年6月北京大学第六医院门诊就诊的ADHD共患ODD的患儿967例, 采用ADHD症状评定量表评估ADHD症状, 儿童临床诊断性会谈量表评估ODD症状, Conners父母症状问卷评估患儿情绪失调问题。使用R语言(版本 4.1.2)的mgm包、qgraph包、bnlearn包等进行网络分析, 基于ADHD、ODD、情绪不稳定因子共30个症状条目, 构建偏相关网络模型与贝叶斯网络模型, 基于节点指标探索核心症状与桥连症状。结果偏相关网络分析结果显示, 情绪失调症状与ODD症状之间的关联更为紧密;ODD症状有较高的强度, 尤其是"很敏感, 很容易生气"(强度=3.57)与"经常和大人争吵"(强度=2.32)症状;情绪失调症状有较高的桥连强度, 其中"好斗或容易被激怒"(桥连强度=2.64)最突出。贝叶斯网络分析结果显示, ADHD症状位于有向无环图(directed acyclic graphs, DAG)的中上部, 主要通过直接关联情绪失调症状间接关联DAG下部的ODD症状。结论相较于ADHD, 情绪失调与ODD的症状关联更强, 并在ADHD与ODD的症状连接中发挥桥连作用;ADHD症状可以通过直接驱动情绪失调症状间接驱动ODD症状。

关键词：注意力缺陷障碍伴多动对立违抗障碍情绪失调网络分析