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诺如病毒消毒灭活方法研究进展

中国公共卫生 2024年第6期40卷 754-758页

作者：姜苏芮李慧莹段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

诺如病毒是全球范围内导致人患急性胃肠炎的主要病原体之一,具有感染剂量低、排毒量大、环境抗性强和传播途径多样等特点,难以预防和控制,至今尚无针对性的疫苗和药物等特异性治疗和防控手段,给全球公共卫生带来了极大的挑战和威胁。因... 详细信息

诺如病毒是全球范围内导致人患急性胃肠炎的主要病原体之一,具有感染剂量低、排毒量大、环境抗性强和传播途径多样等特点,难以预防和控制,至今尚无针对性的疫苗和药物等特异性治疗和防控手段,给全球公共卫生带来了极大的挑战和威胁。因此,快速高效的杀灭病毒、有效切断病原体传播途径对成功防控诺如病毒的感染和流行具有重要意义。本文就2000—2023年有关诺如病毒消毒灭活方法及其应用情况进行综述,为采取科学、有效的阻断措施降低人群感染诺如病毒的风险提供参考。

关键词：诺如病毒传播途径灭活方法消杀方式

一种基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法的建立

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中华预防医学杂志 2024年第4期58卷 489-496页

作者：苏文哲李岩陆维智谢华萍李魁彪狄飚聂凯王环宇张周斌许松涛广州市疾病预防控制中心病毒免疫部广州510440 山东省疾病预防控制中心传染病防制所济南250000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 广州市疾病预防控制中心主任室广州510440

目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份C... 详细信息

目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份CHIKV阳性样品对实验流程进行评估。结果:本研究所设计的引物方案可对各阳性样品进行成功扩增;在样品Ct值小于33时,可获得完整编码区序列;样品Ct值达到35时,可获得99.38%的编码区序列;使用多次迭代,逐步校正的拼接策略可将拼接成功率提高5.70%~25.43%。结论:建立的基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法操作简单,对多个浓度的基孔肯雅病毒阳性临床样品均表现良好。

关键词：基孔肯雅病毒全基因组测序多重PCR 高通量测序

单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测方法的建立

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中国热带医学 2024年第3期24卷 340-348页

作者：张天姿王瑞晨付士红李樊殷启凯李海聂凯王环宇许松涛中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所/世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206

目的建立单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的双重微滴式数字PCR检测方法。方法基于单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的保守区域,设计特异性引物探针,通过筛选引物探针组合,优化双重微滴式数字PCR反应退火温度及引物探针浓度比,... 详细信息

目的建立单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的双重微滴式数字PCR检测方法。方法基于单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒的保守区域,设计特异性引物探针,通过筛选引物探针组合,优化双重微滴式数字PCR反应退火温度及引物探针浓度比,建立双重单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测反应体系,对其他病毒进行检测,对临床样本进行验证,对建立的双重微滴式数字PCR方法的灵敏性、特异性及重复性进行分析。结果单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR检测方法最佳引物和探针浓度分别为800 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度是56℃;双重微滴式数字PCR检测方法的标准曲线相关系数(R2)为0.99,呈现良好的线性关系;灵敏度高,单纯疱疹病毒Ⅰ型最低检测下限为2.97拷贝/µL,水痘-带状疱疹病毒最低检测下限为2.73拷贝/µL;重复性好,变异系数小,检测结果稳定;特异性强,未发现与单纯疱疹病毒Ⅱ型、EB病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、巨细胞病毒、人巨细胞病毒、肠道病毒71型、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及人类核酸有交叉反应。结论本试验建立的单纯疱疹病毒Ⅰ型和水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR方法灵敏性强、特异性高、重复性好,可为不同场景下2种病毒的快速定量检测提供解决方案。

关键词：单纯疱疹病毒Ⅰ型水痘-带状疱疹病毒双重微滴式数字PCR 定量检测

两种直接免疫荧光法检测狂犬病病毒滴度的验证

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中国疫苗和免疫 2024年第3期30卷 288-292页

作者：于鹏程陶晓燕刘淑清刘茜张明慧沈立萍毕胜利朱武洋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室北京102206

目的对检测狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)滴度的荧光灶单位(Fluorescent focus unit,FFU)法和半数荧光灶数量(50%fluorescent focus infectious dose,FFD50)法两种直接免疫荧光法进行验证。方法应用FFU法和FFD50法检测RABV不同毒株滴度,计算FFU值和FFD50值的变异系数(Coefficient of variation,CV),验证可靠性(精密度和稳定性);与标准的小鼠脑内滴定法测定的半数致死量(50%lethal dose,LD50)值进行比较,验证准确性和线性范围。结果日间精密度和中间精密度验证显示,FFU法和FFD50法测定的CVS-11 RABV毒株滴度FFU值和FFD50值的CV均病毒孵育时间、丙酮固定时间和染色时间后,两种方法测定的CVS-11毒株滴度FFU值和FFD50值的CV均病毒稀释倍数在5-1至5-7范围内,FFU和FFD50与其呈线性关系,线性回归方程分别为y=-1.350x+7.391(R2=0.991)和y=-1.453x+8.285(R2=0.980)。结论FFU法和FFD50法检测RABV滴度均具有良好的可靠性和准确性,为替代小鼠脑内滴定法提供了支持。

关键词：狂犬病病毒直接免疫荧光法荧光灶单位半数荧光灶数量可靠性准确性

2019-2020年海南省登革病毒E基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 389-394页

作者：王如敏杜珊珊陈菁菁李丹丹马焱崔蕾孙初阳李建东任莉娜海南省疾病预防控制中心微生物检验室海南海口570203 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室卫生部医学病毒和病毒病重点实验室

目的了解2019-2020年海南省登革病毒(Dengue virus,DENV)E基因序列分子特征,探讨病毒可能的输入来源。方法收集登革热疑似病例血清样本,采用RT-PCR法进行核酸检测并分型,阳性样本进行登革病毒包膜(envelope,E)蛋白基因扩增及测序,应用... 详细信息

目的了解2019-2020年海南省登革病毒(Dengue virus,DENV)E基因序列分子特征,探讨病毒可能的输入来源。方法收集登革热疑似病例血清样本,采用RT-PCR法进行核酸检测并分型,阳性样本进行登革病毒包膜(envelope,E)蛋白基因扩增及测序,应用生物信息软件进行同源性和系统进化分析。结果从49例DENV阳性样本中获得14条DENV E基因序列。进化分析显示,11条DENV1型E基因序列间核苷酸同源性为97.2%~100.0.0%,均属于基因Ⅰ型,其中2条E基因序列(HNLS-8和HNCM-14)与2019年广州流行株(Guangzhou/19XN24503/2019)的核苷酸同源性为100.0%;2条DENV2型E基因序列分别属于Asian 1基因型和Cosmopolitan基因型,其中1条(HNLS-10)与2019-2020年广州流行株(Guangzhou/19XN22111/2019、Guangzhou/19XN50506/2020)同源性为99.6%,另1条(HNLD-2)与2019年昆明2株流行株(Kunming/HNQY20180091/2019、Kunming/HNQY2018005/2019)核苷酸同源性为100.0%。1条DENV3型E基因序列属于基因Ⅲ型,与2018年广州流行株(Guangzhou/18XN61927/2018)和2017年新加坡流行株(Singapore/15095Y15/2017)同源性较高,分别为99.6%和99.5%。结论2019-2020年,海南省检出输入引发的本地传播DENV1、DENV2和DENV3多型病毒,以DENV1为主,显示了加强流动人群中登革热监测与管理,及时防控登革热跨省、跨境传播的重要性。

关键词：登革病毒包膜蛋白基因基因型同源性

咖啡酸苯乙酯对朊病毒体外复制、扩增和纤维形成的抑制作用研究

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中华预防医学杂志 2024年第7期58卷 1011-1019页

作者：晁志悦贾筱溪曾嘉锋武月章肖康高利萍石琦董小平陈操传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国疾病预防控制中心-中国科学院武汉病毒研究所新发传染病与生物安全联合研究中心、中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430071

目的探究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对朊病毒(PrPSc)复制、扩增及纤维形成的影响及可能的机制。方法通过CCK8实验检测CAPE处理3、7 d后朊病毒感染细胞模型SMB-S15的细胞活力,得出CAPE对SMB-S15的最大安全浓度;选取安全范围内的浓度处理细胞,利... 详细信息

目的探究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对朊病毒(PrPSc)复制、扩增及纤维形成的影响及可能的机制。方法通过CCK8实验检测CAPE处理3、7 d后朊病毒感染细胞模型SMB-S15的细胞活力,得出CAPE对SMB-S15的最大安全浓度;选取安全范围内的浓度处理细胞,利用蛋白质免疫印迹方法分析CAPE处理前后细胞内PrPSc的含量变化。利用蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)技术和蛋白质免疫印迹方法检测CAPE处理前后扩增产物中PrP^(Sc)的含量变化。利用实时震动蛋白诱导扩增(RT-QuIC)技术检测CAPE处理前后朊蛋白纤维形成的变化情况。通过分子相互作用检测CAPE与小鼠重组全长朊蛋白的结合能力。结果 CCK8细胞活力实验结果显示:1 μmol/L CAPE处理细胞3、7 d时细胞存活率与对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05),当CAPE浓度超过1 μmol/L时,CAPE处理细胞3、7 d细胞存活率降低,与对照组之间差异均存在统计学意义(均P实验结果显示:CAPE处理3、7 d均可检测到SMB-S15细胞中PrPSc含量的降低(均P实验产物通过蛋白质免疫印迹方法检测结果显示:经CAPE处理后,适应株SMB-S15、139A、ME7的PMCA扩增产物中PrPSc含量(相对灰度值)降低,与对照组相比差异有统计学意义(均P实验结果显示:CAPE处理后139A、ME7、SMB-S15小鼠适应株和朊病毒感染细胞SMB-S15在反应中形成朊蛋白纤维(ThT峰值)均降低,且CAPE对不同种子朊蛋白纤维的抑制程度差异有统计学意义(均P<0.05),其中对ME7的抑制作用更明显。分子相互作用结果显示:CAPE与鼠源重组朊蛋白存在明显的分子结合,平衡解离常数KD为(2.92±0.41)×10^(-6) mol/L。结论 CAPE对PrPSc体外复制、扩增和纤维形成均具有抑制作用,可能与CAPE和朊蛋白特异性结合有关。

关键词：咖啡酸苯乙酯朊病毒朊蛋白

应用气-液两相呼吸道类器官从中国临床住院患儿中分离鉴定人副流感病毒1/2/3

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病毒学报 2024年第2期40卷 274-282页

作者：余玙璠吴伟波牛培华宋敬东霍威邦胡月超刘俊彤魏岚邓瑶杨扬朱娜谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室北京100052 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 深圳市病原微生物与免疫重点实验室国家感染性疾病临床医学研究中心深圳市第三人民医院深圳518112

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器... 详细信息

人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,hPIVs)是引起人类呼吸道感染的重要病原体之一,目前我国相关临床毒株资源有限,本研究旨在获得近期流行、背景明晰的hPIVs临床分离株。应用原代人呼吸道上皮细胞分化的气-液界面呼吸道上皮类器官(Air-liquid interface human airway epithelial organoid,HAE),从深圳市第三人民医院2016~2017年住院患儿hPIVs阳性咽拭子标本中分离获得hPIV1/2/3,分别命名为hPIV1/C-Tan/SZ01/2016、hPIV2/C-Tan/SZ01/2017、hPIV3/C-Tan/SZ01/2017。通过逆转录荧光定量PCR (Reversetranscriptionquantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测病毒核酸扩增、免疫荧光检测病毒蛋白在HAE的表达、负染及超薄切片透射电镜观察病毒形态和细胞定位,并对传代过程中病毒的活性、遗传稳定性和基因组特征进行分析。结果表明基于HAE分离hPIVs可以高效获得hPIVs临床分离株,所获毒株具有典型的病毒形态特征。三种hPIVs在HAE中复制良好且遗传稳定,病毒滴度均可达到约107 TCID50/100μL。对分离获得的hPIV1/2/3临床分离株进行全基因组及HN基因进行序列测定,结果表明:hPIV1全长为15568bp,属于hPIV1 C亚型;hPIV2全长15694bp,属于hPIV2 A3亚型;hPIV3全长15443bp,属于hPIV3 C3亚型,提示3株临床分离株与我国普遍流行的基因型相一致。综上,本研究应用HAE从近期住院患儿临床样本中成功分离获得生物学特性和基因组背景清晰且遗传稳定的hPIV1/2/3毒株。这些临床流行毒株资源的分离鉴定,为hPIVs的感染特点和致病机制的深入研究及抗病毒药物筛选和疫苗研发奠定了基础。

关键词：人副流感病毒病毒分离鉴定人呼吸道上皮类器官

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人偏肺病毒假病毒阳性标准品的制备与鉴定

病毒学报 2024年

作者：郑诗源黄益曼孟小草贺佳阳宋敬东麻粉莲郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国医科大学公共卫生学院

为制备一种安全、有效的人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）假病毒阳性标准品，并用于核酸检测的质量控制，本研究对335条HMPV全基因序列比对分析，选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1185... 详细信息

为制备一种安全、有效的人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）假病毒阳性标准品，并用于核酸检测的质量控制，本研究对335条HMPV全基因序列比对分析，选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1185 bp的N基因序列并与CD513B载体进行重组连接，采用第三代慢病毒包装体系构建HMPV假病毒颗粒，超速离心浓缩后感染HEK293T细胞，RT-qPCR核酸检测N基因和透射电镜观察鉴定重组假病毒颗粒，确定假病毒阳性标准品使用浓度，进一步评价阳性标准品的热稳定性和均一性。研究结果显示，包装获得的HMPV假病毒颗粒能够感染HEK293T细胞，假病毒颗粒为圆形或椭圆形病毒样结构，直径在150～200nm之间，并带有G蛋白刺突。HMPV假病毒稀释103倍后Ct值最适于进行核酸检测，并且均一性和稳定性可达到阳性标准品要求。本研究成功构建了含有HMPV N基因全长的假病毒颗粒，可作为核酸检测方法的阳性标准品，实现HMPV核酸提取和核酸检测过程的全程质量控制。

关键词：人偏肺病毒假病毒阳性标准品

2012-2023年882例重症手足口病病例病原谱及CV-A6基因特征分析

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病毒学报 2024年第2期40卷 383-391页

作者：路环环肖金波严冬梅冀天娇杨倩祝双利张勇传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家脊髓灰质炎实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家卫生健康委员会生物安全重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

为了解重症手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)病原谱变化情况以及重症HFMD相关柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CVA6)的基因特征,本研究收集了2012-2023年各省级HFMD监测网络实验室送检的882份重症HFMD病例病毒分离物,... 详细信息

为了解重症手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)病原谱变化情况以及重症HFMD相关柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CVA6)的基因特征,本研究收集了2012-2023年各省级HFMD监测网络实验室送检的882份重症HFMD病例病毒分离物,通过扩增病毒的VP1编码区进行分子分型以确定肠道病毒的血清型,并对其中的CVA6进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定分析,进行最大似然法系统进化树和氨基酸置换熵值等生物信息学分析。结果发现,2018年开始,以CVA6和CVA10为主的肠道病毒逐渐取代EV-A71和CV-A16成为导致重症HFMD的主要病原体,在每年检出的病原体中的比例均超过50.0%。除2013年重症HFMD中分离的CVA6属于D2基因亚型外,2013年后重症HFMD中分离的CVA6均属于D3a基因亚型,但2019年以后分离的CVA6序列与以往分离株序列的进化距离明显增大。此外,针对氨基酸位点的置换熵值研究表明,参与构成构象表位的VP1-283易发生突变,该位点从2017年开始由亲水的苏氨酸突变成疏水的丙氨酸,导致其可能分别与VP3-57N、VP3-66R之间形成氢键,这可能会影响到病毒的感染过程。本研究明确了2012-2023年中国重症HFMD病原谱的变化特征,探究了导致重症HFMD的CVA6的进化特点以及重要氨基酸变异特征,为重症HFMD的预防控制策略的制定提供了理论依据。

关键词：重症手足口病病原谱柯萨奇病毒A组6型系统进化氨基酸置换熵值