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猪伪狂犬病疫苗研究概况

动物医学进展 2024年第3期45卷 125-128页

作者：李雅雯张莉丁向彬鄢明华天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384 天津市农业科学院畜牧兽医研究所天津300381 国家动物疫病天津观测实验点天津300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津300381

猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种猪的急性传染病,疫苗免疫是有效预防该病的主要措施。2011年以来由于PRV变异毒株的出现,原有商品化疫苗对PRV变异毒株的免疫保护效果下降,致... 详细信息

猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种猪的急性传染病,疫苗免疫是有效预防该病的主要措施。2011年以来由于PRV变异毒株的出现,原有商品化疫苗对PRV变异毒株的免疫保护效果下降,致使PR在我国再度流行,研发可有效预防PRV变异毒株的猪伪狂犬病疫苗成为新的研究热点。论文从PRV疫苗的种类分析比较不同时期、不同方法构建的PRV疫苗优缺点,并阐述不同种类的PRV疫苗的特性及免疫保护效果等研究现状,以期为相关领域研究人员提供参考。

关键词：猪伪狂犬病疫苗

肠道菌群介导次级胆汁酸及其受体调节肠黏膜免疫机制的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 1904-1913页

作者：韩福珍蔡李萌李卓然王雪莹解伟纯匡虹迪李佳璇崔文姜艳平李一经单智夫唐丽杰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 农业部动物疫病病原生物学重点实验室东北科学观测实验站哈尔滨150030

胆汁酸是一种胆固醇衍生物,对提高每日膳食中脂肪的消化与吸收率具有显著功效。在肝内,细胞利用胆固醇形成初级胆汁酸,初级胆汁酸在肠道菌群产生的蛋白酶的影响下产生次级胆汁酸,极大地扩大了肠道环境的分子多样性。目前最常见的次级胆... 详细信息

胆汁酸是一种胆固醇衍生物,对提高每日膳食中脂肪的消化与吸收率具有显著功效。在肝内,细胞利用胆固醇形成初级胆汁酸,初级胆汁酸在肠道菌群产生的蛋白酶的影响下产生次级胆汁酸,极大地扩大了肠道环境的分子多样性。目前最常见的次级胆汁酸受体为跨膜G蛋白胆汁酸偶联受体-5(GPBAR1,也被称为TGR5)和核受体法尼类X受体(FXR),在调节机体健康中起着多效性作用,特别是可以维持肠道菌群稳态和黏膜免疫系统平衡。本综述讨论了胆汁酸与肠道菌群的关系、次级胆汁酸的代谢以及次级胆汁酸及其受体在肠道免疫系统中的不同作用机制,可为肠道菌群在动物肠道疾病的防治以及相关研究等方面提供理论基础。

关键词：肠道菌群次级胆汁酸 G蛋白胆汁酸偶联受体-5 核受体法尼类X受体黏膜免疫

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2019-2022年中国H6N1亚型禽流感病毒的生物学特性分析

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中国农业科学 2024年第9期57卷 1820-1832页

作者：陈源崔鹏飞施建忠张元成于晴晴颜成张亚萍王丛丛张洁王燕邓国华陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病防控全国重点实验室/国家禽类实验动物资源库

【背景】H6亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）广泛流行于我国南方地区，是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配，并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段，产生新型重组病毒，进而威胁... 详细信息

【背景】H6亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）广泛流行于我国南方地区，是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配，并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段，产生新型重组病毒，进而威胁人类健康。【目的】通过对我国H6N1亚型AIV的演化动态及其相关生物学特性分析研究，为我国禽流感的综合防控提供数据支持。【方法】采集2019—2022年我国25个省（直辖市、自治区）的活禽交易市场及养殖场家禽喉和泄殖腔拭子，通过接种鸡胚分离到7株H6N1亚型AIVs并对其进行全基因组测序，分析其遗传演化特征、受体结合特性及其对SPF鸡和BALB/c小鼠的感染性。【结果】遗传演化分析表明，7株病毒的基因与分离于北美及东南亚地区的野鸟源病毒基因同源性较高，基因来源复杂，具有明显的遗传多样性。贝叶斯演化分析表明，H6亚型AIV HA基因曾发生过多次的跨洲际传播，欧亚谱系病毒在北美地区也有着较长时间流行。1株病毒HA基因与北美地区毒株基因高度同源，根据贝叶斯演化分析结果，推测该病毒在野鸟体内经历了复杂的基因重配后形成，后经野鸟传入我国。特殊氨基酸位点分析结果显示，病毒HA蛋白裂解位点序列均为PQIETR↓GLF，符合低致病性AIV特征；此外，另有1株病毒的NP蛋白发生Y52H突变，据报道，该突变对AIV获得抵抗人干扰素刺激基因BTN3A3的能力起到关键作用。受体结合特性分析表明，部分毒株具有双受体结合特性，但结合人源受体能力弱于结合禽源受体能力。病毒对SPF鸡的感染性试验表明，鸡感染A/chicken/Jiangxi/S40445/2019(H6N1)后能通过呼吸道及消化道排毒，并且病毒可在鸡群内通过接触传播。鸡感染A/duck/Jiangxi/S10941/2019(H6N1)后仅有少数鸡通过呼吸道排毒，病毒无法在鸡群间通过接触传播。BALB/c小鼠的感染性试验表明，H6N1亚型AIV无需提前适应便可在小鼠呼吸道内有效复制，但对小鼠仍呈低致病力。【结论】2019—2022年分离于我国的H6N1亚型AIV基因大部分来源于野鸟源病毒，候鸟可经东亚-澳大利亚迁徙路线将病毒传入我国；部分病毒能够结合人源唾液酸受体并在小鼠呼吸道内有效复制，表明该亚型病毒对公共卫生安全构成潜在威胁。

关键词： H6N1 禽流感病毒跨洲际传播重配感染性

猪链球菌靶向DC重组蛋白DC3pep-SDZ对斑马鱼的免疫保护性分析

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中国兽医杂志 2024年第4期60卷 35-42页

作者：于恩远荣睿璠曾君赵瑞利郭海悦张东超胡烨李颖王心如天津农学院动物科学与动物医学学院天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津西青300392 天津市动物疫病预防控制中心天津北辰300402

为了探究本课题组前期构建的由猪链球菌(SS)的分泌型DNA核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)和高亲和力锌摄取系统蛋白(ZnuA)3个毒力因子的优势细胞表位和树突状细胞靶向肽(DC3pep)串联而成的重组蛋白DC3pep-SDZ(SsnA-DLDH-ZnuA)... 详细信息

为了探究本课题组前期构建的由猪链球菌(SS)的分泌型DNA核酸酶A(SsnA)、二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)和高亲和力锌摄取系统蛋白(ZnuA)3个毒力因子的优势细胞表位和树突状细胞靶向肽(DC3pep)串联而成的重组蛋白DC3pep-SDZ(SsnA-DLDH-ZnuA)对致病型SS攻击斑马鱼的免疫保护效果,本试验表达和纯化重组蛋白DC3pep-SDZ和SDZ,分别免疫AB系野生型斑马鱼,攻击致病型2、3和9型SS(SS2、SS3和SS9),计算存活率,采用苏木精-伊红(H.E.)染色法观察斑马鱼脑组织病理变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SS3感染斑马鱼后脑组织炎性细胞因子表达量变化。结果显示,诱导表达的重组蛋白DC3pep-SDZ和SDZ分子质量分别为44和42 kDa,2个蛋白均以可溶的形式表达。SS2、SS3和SS9攻击斑马鱼后,重组蛋白DC3pep-SDZ组和重组蛋白SDZ组斑马鱼存活率分别为50.0%、65.0%和60.0%,45.0%、47.3%和45.0%,两组间差异不显著(P>0.05),但与PBS对照组相比差异均极其显著(P<0.001)。H.E.染色镜检结果显示,重组蛋白DC3pep-SDZ组的斑马鱼被3种分型SS攻击后脑组织均无明显病理变化。RT-qPCR结果显示,重组蛋白DC3pep-SDZ组促炎细胞因子:与PBS对照组相比较IL-6、TNF-α和IFN-γmRNA表达量分别极显著(P<0.01)、极其显著(P<0.001)和极显著(P<0.01)下调,与重组蛋白SDZ组相比较IL-6和TNF-αmRNA表达量分别极显著(P<0.01)和显著下调(P<0.05);重组蛋白DC3pep-SDZ组抗炎性细胞因子:与PBS对照组相比较IL-10和TGF-β1 mRNA表达量分别极显著(P<0.01)和极其显著(P<0.001)上调,与重组蛋白SDZ组相比较TGF-β1 mRNA表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,重组蛋白DC3pep-SDZ较SDZ具有更好的免疫原性,能产生SS2、SS3和SS9交叉免疫保护作用,同时还能够有效缓解斑马鱼感染SS3后的脑部炎症。

关键词：猪链球菌斑马鱼表位蛋白 DC3pep-SDZ 免疫保护

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猪CD1d蛋白多克隆抗体的制备及应用

中国农业科学 2024年第8期57卷 1620-1628页

作者：刘传霞陈欣王晓李雪雯李婷婷翁长江郑君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/动物疫病预防控制国家重点实验室/国家非洲猪瘟专业实验室/基础免疫创新团队

【目的】制备猪源CD1d的多克隆抗体，为探究猪CD1d蛋白在非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染过程中的功能奠定基础。【方法】利用PCR方法扩增了猪CD1d基因，并将其同源重组至pGEX-6p1载体中，构建了原核重组表达质粒pG... 详细信息

【目的】制备猪源CD1d的多克隆抗体，为探究猪CD1d蛋白在非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染过程中的功能奠定基础。【方法】利用PCR方法扩增了猪CD1d基因，并将其同源重组至pGEX-6p1载体中，构建了原核重组表达质粒pGEX-6p1-CD1d。将重组质粒转化*** BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达，表达的GST-CD1d重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot(WB)方法鉴定，SDS-PAGE结果显示约50 ku处有一条明显的条带，该蛋白以包涵体形式表达。然后利用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法进行蛋白纯化，将纯化的GST-CD1d蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后，将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔，采用颈背部多点皮下注射，免疫剂量为200μg/只，首免后第3周和第5周分别进行二免和三免，均采用弗氏不完全佐剂乳化，方法和剂量与首免相同。三免后第7天，通过耳缘静脉采血分离血清。首免后第7周进行第四次免疫，一周后心脏采血。该抗体经Protein G亲和层析纯化后冻存于-80℃冰箱。通过WB和间接免疫荧光（IFA）鉴定瞬时转染表达的外源CD1d蛋白和猪原代巨噬细胞（PAMs）表达的内源CD1d蛋白的表达与细胞定位情况。同样，制备的CD1d抗体可以将外源瞬时转染表达的CD1d通过IP拉下。为了探究CD1d在ASFV感染早期的情况，将ASFV接种于PAMs，制备ASFV感染0、15、30、60 min的样品，以CD1d为一抗，通过WB检测了CD1d蛋白的表达情况。在HEK293T细胞共转pCAGGS-HA-CD1d和pCAGGS-Flag-CD2v质粒，24 h后收取细胞裂解，加入Flag beads过夜结合蛋白，通过WB检测互作情况染，同时，质粒共转染于共聚焦小皿中的HEK293T细胞，用标签抗体对其进行孵育，选择相应的荧光二抗，通过激光共聚焦显微镜观察CD1d与CD2v在细胞中共定位情况。采用Co-IP验证CD1d与ASFV外囊膜蛋白CD2v的相互作用。【结果】原核表达的GST-CD1d蛋白以包涵体形式表达在感受态细胞中，分子质量约为35 ku；实验兔4次免疫CD1d重组蛋白后采血并分离血清，纯化的抗体经SDS-PAGE检测在45和25 ku处各出现一条特异性条带，分别为CD1d抗体的重链与轻链。以纯化的CD1d蛋白作为免疫原制备的兔抗CD1d抗体包含重链和轻链，且具有较好纯度；该抗体能够通过WB和IFA鉴定瞬时转染的外源以及PAMs内源CD1d蛋白的表达和细胞定位。进一步检测结果显示，ASFV感染PAMs后，CD1d蛋白表达水平明显增加，并且WB和IFA结果显示CD1d与ASFV编码的外囊膜蛋白CD2v存在相互作用和共定位。【结论】通过原核表达技术制备了CD1d的抗体，为进一步探究CD1d蛋白在ASFV感染过程中的生物学功能打下了基础。

关键词： CD1d蛋白原核表达多克隆抗体非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白

民猪源唾液联合乳杆菌B112株调控内质网应激预防炎症反应的作用机制

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 784-792页

作者：吴佳鑫杨晓钰李卓然项晴刘郁蕾王晓娜李佳璇姜艳平崔文李一经唐丽杰东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 农业部动物疫病病原生物学重点实验室/东北科学观测实验站哈尔滨150030

本研究旨在探讨民猪源唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius)通过调控内质网应激预防LPS刺激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)引起炎症的作用机制。本试验从抗病性和耐寒性较好的优良猪种民猪的肠道中分离得到一株菌株B112确定为唾液联... 详细信息

本研究旨在探讨民猪源唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius)通过调控内质网应激预防LPS刺激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)引起炎症的作用机制。本试验从抗病性和耐寒性较好的优良猪种民猪的肠道中分离得到一株菌株B112确定为唾液联合乳杆菌。应用单层平板打孔法测定该菌株和三元猪源唾液联合乳杆菌对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径大小,以此来反映菌株的抑菌能力。采用体外细胞模型构建的方法,使用唾液联合乳杆菌B112预处理IPEC-J2,然后用LPS刺激IPEC-J2模拟肠道炎症,并通过实时荧光定量PCR检测炎症相关因子和内质网应激相关因子的变化情况。抑菌试验结果表明,民猪源唾液联合乳杆菌B112对3种致病菌均有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好;三元猪源唾液联合乳杆菌JCM1231对金黄色葡萄球菌并无抑菌作用,但对沙门菌的抑菌效果强于民猪源杆菌。体外抗炎试验结果表明,民猪源唾液联合乳杆菌B112可以降低由LPS刺激引起的IL-6等炎性相关因子和GRP78等内质网应激相关因子的m RNA表达量。综上所述,从民猪肠道内分离出的唾液联合乳杆菌B112可以抑制大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的生长繁殖,并且可以通过调控内质网应激预防LPS刺激IPEC-J2引起的炎症反应,本研究有望为后续进一步开发利用唾液联合乳杆菌在预防仔猪炎症方面的应用研究提供理论基础和技术参考。

关键词：民猪唾液联合乳杆菌分离鉴定内质网应激肠道炎症

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RNA结合蛋白ELAVL1的功能及其调控病毒复制的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 1914-1925页

作者：余祖华高梦茹齐志颖张静雨何雷陈建丁轲河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室/动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023

胚胎致死异常视觉蛋白1(embryonic lethal abnormal vision like 1, ELAVL1),又被称为人类抗原R(human antigen R, HuR),是一种典型的RNA结合蛋白(RNA binding protein, RBP),通过与3′非翻译区(3′untranslated element, 3′UTR)的AU富含元件(AU-rich element, ARE)结合,在mRNA转录和翻译过程中发挥重要作用。ELAVL1的作用十分广泛,可调控肿瘤的发生发展、凋亡、迁移与侵袭,是许多癌症治疗的关键靶点,还能参与调节编码器官发育和组织稳态的蛋白质和mRNA的水平,也有许多研究表明,ELAVL1通过转录后调控和翻译后修饰来调节病毒复制。本文主要综述了ELAVL1的生物学特点、功能、调控机制及其在病毒复制过程中的调控作用,旨在为进一步研究ELAVL1与畜禽病毒复制之间互作的机制提供理论参考。

关键词： ELAVL1 RNA结合蛋白病毒调控机制

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2023年养猪科技新技术盘点

猪业科学 2024年第2期41卷 53-55页

作者：孙华伟李彬江苏省农业科学院兽医诊断检测重点实验室/国家动物疫病南京观测实验点江苏南京210014

盘点2023年,中国生猪产业正在感受凛凛的寒冬,欠债猪王们纷纷“断臂求生”,持续低迷的猪价致使养猪企业和养猪散户持续面临现金流压力,“去产能”依然缓慢。持续的亏损经营中,上市猪企的平均资产负债率超过60%,创历史新高,而资金流动比... 详细信息

盘点2023年,中国生猪产业正在感受凛凛的寒冬,欠债猪王们纷纷“断臂求生”,持续低迷的猪价致使养猪企业和养猪散户持续面临现金流压力,“去产能”依然缓慢。持续的亏损经营中,上市猪企的平均资产负债率超过60%,创历史新高,而资金流动比率和速动比率均跌破历史低位。这一年,行业变革也在加速推进,推动养猪行业从速度向质量转变;既有人被推入“至暗时刻”,又有人“触底重生”,现对2023年养猪科技新技术盘点如下。

关键词：速动比率养猪行业行业变革盘点流动比率养猪企业生猪产业资产负债率

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mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：余祖华高梦茹何雷魏颖陈建陈松彪丁轲河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室/动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南科技学院动物科技学院

为研究马立克病病毒(Marek 's disease virus， MDV)编码的mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响，将mdv1-miR-M4-5p模拟物、抑制物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞后48 h，采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测细胞中mdv1-miR-M4-5p、TGF-β1、Smad2以及caspase-9、caspase-3、cyt-c、cyclinD1、Bcl-2等增殖和凋亡相关分子的转录；CCK-8检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果显示：与对照组相比，mdv1-miR-M4-5p模拟物转染显著上调了MDCC-MSB1细胞中mdv1-miR-M4-5p、cyclinD1、Bcl-2的转录水平，下调了TGF-β1、Smad2、cyt-c、caspase-9和caspase-3的表达，促进了细胞的增殖，减少了G1期细胞，增加了S和G2细胞，降低了细胞凋亡率。与对照组相比，mdv1-miR-M4-5p抑制物转染后MDCC-MSB1细胞的增殖、凋亡及其相关分子转录的结果与mdv1-miR-M4-5p模拟物转染后的结果相反。综上，Mdv1-miR-M4-5p可促进MDCC-MSB1细胞增殖，抑制其凋亡，这可能是通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路来实现的。

关键词： Mdv1-miR-M4-5p MDV 增殖凋亡 TGF-β1/Smad2