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基于UPLC-Q-Orbitrap-MS分析芪苈强心胶囊的物质基础及其体内分布

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：张建伟华杰凯李荣胜王琴常昕楠刘伟沈杰上海中医药大学附属曙光医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），定性分析芪苈强心胶囊中的化学成分及其体内分布。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS对芪苈强心胶囊供试品溶液、灌胃给药后小鼠的血清及脑、心脏、肺脏... 详细信息

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），定性分析芪苈强心胶囊中的化学成分及其体内分布。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS对芪苈强心胶囊供试品溶液、灌胃给药后小鼠的血清及脑、心脏、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏中的化学成分进行检测，通过Thermo Xcalibur 2.2软件构建化合物信息数据库，并拟合准分子离子对应的化合物分子式，以保留时间、精确相对分子质量、碎片离子等信息，结合对照品和文献数据，鉴定芪苈强心胶囊中化学成分及其体内分布。结果：从芪苈强心胶囊中共鉴定或推测出233种化合物，包括萜类70种、黄酮类58种、有机酸类24种、生物碱类16种、甾类20种、香豆素类7种、其他类38种，其中73种通过对照品鉴定。组织分布结果显示，分别在血、脑、心脏、肺脏、脾脏、肝脏及肾脏中检测到移行成分71、17、38、33、32、58、43种。奎宁酸、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱等37种化学成分移行入血和心脏；毛蕊异黄酮、美迪紫檀烷、芒柄花素、泽泻醇B和泽泻醇A等14种化学成分在血和各组织中均有分布。结论：该研究较全面地分析了芪苈强心胶囊的物质基础及其体内分布情况，其中黄芪甲苷、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3、毛蕊异黄酮苷和芥子碱等成分可能是治疗心力衰竭的重要成分，可为芪苈强心胶囊的质量控制和药效物质基础研究提供依据。

关键词：芪苈强心胶囊化学成分分析成分归属超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS) 组织分布物质基础心力衰竭

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真菌三萜生物合成途径关键后修饰酶研究进展

中成药 2024年第1期46卷 187-192页

作者：占慧慧刘媛孟俊华崔培梧湖南中医药大学药学院国家中医药管理局中药药性与药效三级科研实验室菌物药研究室湖南长沙410208

真菌是三萜类天然产物发掘的重要资源宝库,现有研究表明真菌三萜具有显著的抗肿瘤、抗炎、抗菌、降糖、降脂、提高免疫力等活性,一直是中药学、天然药物等领域的研究热点。真菌三萜主要从真菌子实体中提取,但真菌野生资源匮乏,人工栽培... 详细信息

真菌是三萜类天然产物发掘的重要资源宝库,现有研究表明真菌三萜具有显著的抗肿瘤、抗炎、抗菌、降糖、降脂、提高免疫力等活性,一直是中药学、天然药物等领域的研究热点。真菌三萜主要从真菌子实体中提取,但真菌野生资源匮乏,人工栽培周期长,子实体中三萜含量低,化学合成困难,而生物合成具有较大的开发前景。本文就近年来国内外关于真菌三萜生物合成途径关键后修饰酶——细胞色素P450单加氧酶和糖基转移酶的研究进展进行综述,以期为真菌三萜合成途径充分解析和高效合成提供参考。

关键词：真菌三萜甲羟戊酸途径细胞色素P450酶糖基转移酶

基于HPLC指纹图谱与一测多评法结合的桑黄品质评价研究

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中国药学杂志 2024年第6期59卷 531-540页

作者：彭思源邓元辉丁婵孟俊华崔培梧湖南中医药大学药学院菌物药研究室长沙410208 国家中医药管理局中药药性与药效三级科研实验室长沙410208 长沙时代基因医学检验实验室长沙410000

目的基于HPLC特征图谱,建立同时测定桑黄中原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、紫萁酮和牛奶树碱5种成分含量的一测多评方法(quantitative analysis of multi-components with a single-marker,QAMS),对不同来源的桑黄药材进行品质评价研究。... 详细信息

目的基于HPLC特征图谱,建立同时测定桑黄中原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、紫萁酮和牛奶树碱5种成分含量的一测多评方法(quantitative analysis of multi-components with a single-marker,QAMS),对不同来源的桑黄药材进行品质评价研究。方法收集了3个种源地共10个批次的桑黄药材样品,采用Wondasil C_(18)Superb色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,进样量20μL,采用变波长程序,建立内参物原儿茶醛与原儿茶酸、咖啡酸、紫萁酮、牛奶树碱的相对校正因子并进行了相对校正因子的耐用性考察。采用外标法(external standard method,ESM)和QAMS法分别测定不同来源共10批桑黄药材中该5种成分的含量以验证QAMS法的准确性。结果采用SPSS与Origin Pro进行主成分分析、相似度分析和聚类分析。结果显示,5种成分专属性、精密度、重复性、稳定性、线性范围(r2>0.9990)均良好、平均加样回收率99.74%~102.78%,RSD 1.34%~2.92%。以原儿茶醛为内参物,原儿茶酸、咖啡酸、紫萁酮、牛奶树碱的平均相对校正因子分别为0.8519、1.4469、1.6157、0.7747;t检验结果表明,ESM法与QAMS法测定结果差异不显著。通过统计学分析实现了数据集的可视化,聚类分析发现西藏和广东产地的桑黄样品呈现一定的地域差异,但也发现了源于广东和长白山的个别桑黄样品与源于西藏的桑黄样品聚为一类的现象,意味着不能仅仅依据产地评价桑黄品质优劣,因为可能存在基源不清或品种混淆的状况。不同桑黄样品中牛奶树碱、原儿茶醛、紫萁酮的含量差异较大,且此3类成分对主成分的贡献较多,可能为桑黄的主要质量标志物。结论该研究基于HPLC指纹图谱建立的QAMS法简单、经济、实用,可以实现对桑黄中主要成分的快速、科学分析,也为其种质资源的品质评价提供了一定的科学依据。

关键词：桑黄指纹图谱一测多评法外标法相对校正因子质量评价

腹部推拿对慢性疲劳综合征模型大鼠脏器指数、海马细胞形态及细胞凋亡的影响

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 845-852页

作者：安成飞张小凡宁静谭涛李华南天津中医药大学第一附属医院国家中医针灸临床医学研究中心国家中医药管理局推拿手法生物效应三级实验室天津300073

目的探讨腹部推拿治疗慢性疲劳综合征(CFS)的作用机制。方法采用随机数字表法将30只清洁级雌性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组及腹部推拿组,每组各10只,模型对照组及腹部推拿组采用冷水游泳联合慢性束缚法建立CFS模型,腹部推拿组大... 详细信息

目的探讨腹部推拿治疗慢性疲劳综合征(CFS)的作用机制。方法采用随机数字表法将30只清洁级雌性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组及腹部推拿组,每组各10只,模型对照组及腹部推拿组采用冷水游泳联合慢性束缚法建立CFS模型,腹部推拿组大鼠以津沽脏腑推拿核心手法层按、团摩为主要干预手法,层按“关元”8 min、团摩“中脘”12 min,每天治疗1次,连续干预14 d,正常对照组和模型对照组大鼠在腹部推拿组大鼠推拿期间仅束缚于实验台上。干预结束后测定各组大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴主要脏器指数、海马细胞凋亡情况,采用海马组织尼氏染色及海马神经元透射电镜观察分析各组大鼠海马细胞形态学。结果模型对照组与正常对照组比较,各脏器指数上调(P学意义。模型对照组与正常对照组比较,细胞核明显固缩、核膜结构破裂、边缘不规则;腹部推拿组与模型对照组比较,大部分细胞形态无异常,有少量核膜结构不清晰。其他2组与正常对照组比较,海马神经元细胞损伤明显;腹部推拿组与模型对照组比较,海马神经元细胞状态良好。模型对照组神经元细胞凋亡程度明显高于正常对照组(P学意义。结论冷水游泳联合慢性束缚法能够模拟大鼠CFS的发生,腹部推拿能够降低CFS大鼠HPA轴中的关键脏器下丘脑、垂体、肾上腺的脏器指数,能够减轻海马组织的损伤、抑制海马细胞凋亡、增加海马细胞的活性,有助于维持海马神经元的正常生理功能。

关键词：腹部推拿慢性疲劳综合征脏器指数海马神经细胞形态结构神经细胞凋亡大鼠

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针刺治疗偏头痛的机制研究进展

中国针灸 2024年第3期44卷 360-366页

作者：王文慧沈燕王舒天津中医药大学第一附属医院天津300381 国家中医针灸临床医学研究中心天津300381 天津市针灸学重点实验室国家中医药管理局针刺量效关系三级实验室国家中医药管理局脑病针刺疗法重点研究室天津300381 天津市中医药研究院附属医院天津300120

检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台(Wanfang)、维普资讯中文期刊服务平台(VIP)、中文科技期刊全文数据库、PubMed、Medline、Cochrane Library数据库2013-2023年收录的关于针刺治疗偏头痛的机制研究的文献,从三叉神... 详细信息

检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台(Wanfang)、维普资讯中文期刊服务平台(VIP)、中文科技期刊全文数据库、PubMed、Medline、Cochrane Library数据库2013-2023年收录的关于针刺治疗偏头痛的机制研究的文献,从三叉神经血管系统机制、代谢相关机制、遗传学机制、大脑结构与功能改变方面梳理偏头痛的发病机制及针刺治疗偏头痛的可能机制。发现目前针刺治疗偏头痛的机制以三叉神经血管系统研究最多,已有研究证实针刺对皮层扩散性抑制(CSD)、星形胶质细胞和神经源性激肽等三叉神经系统相关环节有确切的调节作用;代谢相关机制及遗传因素虽然越来越被关注,但其在针刺治疗偏头痛机制方面的研究还较少,需要进一步深入探索;偏头痛的脑结构与功能的研究越来越深入,但研究存在一些争议,未来需要更大样本量和规范设计的研究方案,以进一步探索针刺治疗偏头痛的机制。

关键词：偏头痛针刺机制研究三叉神经血管系统(TGVS) 代谢组学遗传学

竹节参总皂苷对高脂饮食小鼠白色脂肪棕色化/棕色脂肪活化的影响及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 71-78页

作者：王淑文胡雅琪王锐张一凡薛梦珍王雅琦夏芳奇朱蕾奇袁成福三峡大学国家中医药管理局中药药理(肿瘤)科研三级实验室湖北宜昌443002 三峡大学基础医学院湖北宜昌443002

目的:研究竹节参总皂苷对高脂饮食(HFD)喂养C57BL6/J雄性小鼠白色脂肪棕色化/棕色脂肪活化的影响,并探讨其机制。方法:将32只8周龄小鼠随机分为正常组、模型组、竹节参总皂苷低、高剂量组。对竹节参总皂苷低、高剂量组分别按25、75 mg·... 详细信息

目的:研究竹节参总皂苷对高脂饮食(HFD)喂养C57BL6/J雄性小鼠白色脂肪棕色化/棕色脂肪活化的影响,并探讨其机制。方法:将32只8周龄小鼠随机分为正常组、模型组、竹节参总皂苷低、高剂量组。对竹节参总皂苷低、高剂量组分别按25、75 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量灌胃给药4个月,其余组用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶剂灌胃。4月后将小鼠置于4℃环境进行急性冷暴露实验,监测小鼠核心体温情况,冷暴露实验结束后处死小鼠,快速分离棕色脂肪组织(BAT)及腹股沟白色脂肪组织(iWAT)。苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠组织形态变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠中解偶联蛋白1(UCP1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、细胞色素C(CytC)、PR结构域蛋白16(PRDM16)、超长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠UCP1、PRDM16、PPARγ、PGC-1α蛋白表达;免疫组织化学检测各组小鼠UCP1表达。结果:①与模型组比较,竹节参总皂苷可降低小鼠体质量及iWAT、BAT水平(P实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠体温降低(P<0.05);与模型组比较,竹节参总皂苷高剂量组小鼠体温显著上升(P<0.01)。③与正常组比较,模型组小鼠iWAT、BAT中脂肪细胞直径明显增大,单位面积细胞数目减少;与模型组比较,竹节参总皂苷用药组的细胞直径明显减小,单位面积细胞数目增多,竹节参总皂苷高剂量组效果更明显。④与正常组比较,模型组小鼠脂肪组织中FABP4、UCP1、CytC、PRDM16、ELOVL3、PGC-1α、PPARγmRNA表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,竹节参总皂苷干预后,上述mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。⑤与正常组比较,模型组脂肪组织UCP1、PRDM16、PPARγ、PGC-1α蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,竹节参总皂苷高剂量组干预后,上述蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:竹节参总皂苷可诱导高脂饮食小鼠白色脂肪组织棕色化/棕色脂肪活化,增强高脂诱导肥胖小鼠适应性产热;其机制涉及PPARγ/PGC-1α通路的激活。

关键词：竹节参总皂苷白色脂肪棕色化棕色脂肪活化肥胖过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)

不同性味化瘀消癥药对子宫腺肌病小鼠肠道代谢的差异性调节作用研究

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中药药理与临床 2024年

作者：刘士丹王美玲屈赵付先芸王坤陈敏敏杨丹三峡大学国家中医药管理局中药药理科研三级实验室三峡大学健康医学院宜昌市中医医院

目的：探讨不同性味化瘀消癥药对子宫腺肌病(AM)小鼠肠道代谢的差异性调控作用。方法：ICR小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、桂枝茯苓丸0.42 g/kg组和大黄-桃仁0.31 g/kg组。采用同种异体垂体移植法构建AM小鼠模型。对比小鼠给药前... 详细信息

目的：探讨不同性味化瘀消癥药对子宫腺肌病(AM)小鼠肠道代谢的差异性调控作用。方法：ICR小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、桂枝茯苓丸0.42 g/kg组和大黄-桃仁0.31 g/kg组。采用同种异体垂体移植法构建AM小鼠模型。对比小鼠给药前后热板痛阈值变化，阴道涂片观察小鼠动情周期，HE染色评价子宫组织病理浸润深度，免疫荧光检测子宫组织雌激素受体α(ERα)表达。采用液质联用技术(LC-MS)进行肠道代谢组学分析，筛选和对比潜在的差异代谢物，并根据部分筛选结果进行实验验证。结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠热板痛阈时间显著缩短(P 学评分显著升高(P 学评分和ERα表达水平显著降低(P 学筛选到35种与AM相关的生物标志物，桂枝茯苓丸0.42 g/kg组、大黄-桃仁0.31 g/kg组可回调其中8种差异代谢物。其中，桂枝茯苓丸0.42 g/kg组可干预含硫氨基酸代谢的多个环节，显著升高花生四烯酸代谢中前列腺素D3含量，有效抑制硬脂酰胺、硬脂酸甘油酯、磷脂酰甘油等脂肪酸代谢水平。大黄-桃仁0.31 g/kg组同时调控花生四烯酸代谢中前列腺素D3及血栓素B2水平，并通过胆汁酸途径改善AM的脂质代谢紊乱。进一步的实验证实，与正常对照组相比，模型对照组中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)蛋白表达显著上调(P < 0.01)，子宫组织活性氧(ROS)表达水平显著升高(P < 0.01)；与模型对照组相比，各给药组中TNF-α、IL-1β蛋白表达明显下调(P < 0.05)，桂枝茯苓丸0.42 g/kg组能明显降低ROS表达(P < 0.05)。结论：两类不同性味的化瘀消癥药可参与调控不同的代谢通路及环节，通过调节炎症因子、氧化应激水平发挥对AM小鼠的治疗作用。

关键词：桂枝茯苓丸大黄-桃仁子宫腺肌病肠道代谢组学肿瘤坏死因子-α 白介素-1β

摩腹法对IBS-D模型大鼠肠黏膜紧密连接功能及ZO-1的影响研究

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辽宁中医杂志 2024年

作者：李华南崔刘魁卢燚张玮包安陈英英刘书芹王金贵天津中医药大学第一附属医院国家中医针灸临床医学研究中心国家中医药管理局推拿手法生物效应三级实验室

目的：验证摩腹法干预腹泻型肠易激综合征（IBS with predominant diarrhea， IBS-D）模型大鼠效果，阐明腹部推拿对IBS-D模型大鼠肠黏膜紧密连接的影响。方法：采用母婴分离法+慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。将30只SD雄性大鼠，随机分... 详细信息

目的：验证摩腹法干预腹泻型肠易激综合征（IBS with predominant diarrhea， IBS-D）模型大鼠效果，阐明腹部推拿对IBS-D模型大鼠肠黏膜紧密连接的影响。方法：采用母婴分离法+慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。将30只SD雄性大鼠，随机分为正常组、模型组、摩腹组，每组10只。采用粪便含水量测试、粪便性状评分评价干预效果。利用透射电镜观察结肠粘膜组织状态。应用Western-blot法检测大鼠结肠组织中ZO-1蛋白表达。结果：（1）与模型组比较，摩腹组粪便含水率、粪便性状评分明显下降（P＜0.05），接近正常组（P＞0.05）。（2）透射电镜下观察，模型组肠上皮细胞胞浆内有空泡，线粒体大量减少，分布不均，少见完整细胞核，细胞形态大小不一，细胞间间隙变大，紧密连接结构遭到破坏，肠上皮微绒毛缺如；摩腹干预后，肠上皮细胞质空泡减少得到恢复，线粒体增多，结构清晰，细胞核结构可见，细胞间间隙变窄，紧密连接结构部分恢复，肠上皮微绒毛分布不均部分短缺。（3）与正常组相比，模型组ZO-1蛋白表达明显下调（P＜0.05），当予以摩腹干预后，ZO-1蛋白表达明显上调（P＜0.05）。结论：摩腹法能够通过上调ZO-1蛋白表达对大鼠肠上皮紧密连接产生影响，进而对肠上皮紧密连接和肠上皮通透性产生影响，进而改善IBS-D大鼠肠道症状。

关键词： IBS-D 摩腹法肠上皮通透性紧密连接 ZO-1蛋白

基于网络毒理学结合网络药理学及实验验证探讨黄芪减雷公藤肾毒性机制

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中药药理与临床 2024年

作者：吴溪吴德玲魏良兵刘涛王紫柠孟楣高家荣安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽中医药大学第一附属医院国家中医药管理局中药制剂三级实验室

目的：利用网络毒理学筛选雷公藤致肾毒性靶点，利用网络药理学与分子对接探讨黄芪减雷公藤肾毒性的作用机制，并进行动物实验验证。方法：在OMIM、PharmGKB、GeneCards收集肾毒性相关靶点，在CTD检索雷公藤肾毒性靶点，Venny2.1.0获得... 详细信息

目的：利用网络毒理学筛选雷公藤致肾毒性靶点，利用网络药理学与分子对接探讨黄芪减雷公藤肾毒性的作用机制，并进行动物实验验证。方法：在OMIM、PharmGKB、GeneCards收集肾毒性相关靶点，在CTD检索雷公藤肾毒性靶点，Venny2.1.0获得雷公藤肾毒性交集靶点；检索TCMSP、ETCM、以及文献补充收集黄芪成分，Swiss Target Prediction收集黄芪成分作用靶点，Venny2.1.0获得黄芪干预雷公藤肾毒性交集靶点；通过Cytoscape3.9.1构建网络图；利用Metascape对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集；Autodock4.2进行分子对接。根据预测结果进行动物实验验证，分别进行血清检测、病理组织下观察以及对KEGG分析中通路进行验证。结果：收集黄芪化学成分46个、雷公藤致肾毒性靶点425个、黄芪干预雷公藤肾毒性潜在靶点83个。富集分析发现共同靶点主要参与细胞对化学应激的反应、细胞迁移、细胞运动等生物工程。KEGG信号通路排除广泛通路后主要富集于AGE-RAGE、HIF-1、C型凝集素受体、IL-17、PI3K/AKT等信号通路。PPI结果显示AKT1、IL6、VEGFA可能是黄芪干预雷公藤肾毒性的核心靶点，其中AKT1为最重要的核心靶点。“中药-成分-靶点-通路”结果显示异鼠李素、华良姜素、山柰酚、槲皮素、3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷可能是黄芪干预雷公藤肾毒性的核心成分。分子对接结果发现黄芪中以上核心成分与核心靶点结合后，均与AKT1结合最强。动物实验结果说明模型对照组大鼠出现急性肾损伤，血清SCr、BUN含量显著升高（P<0.01），雷公藤水提物能够明显下调PI3K、AKT mRNA表达，而配伍黄芪水提物后能够上调其表达。结论：黄芪中核心成分可能作用于AKT1核心靶点，通过调控PI3K/AKT通路发挥干预雷公藤肾毒性的作用。

关键词：黄芪雷公藤网络毒理学和网络药理学肾毒性机制