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茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 76-83页

作者：罗园园冯心怡褚泽文朱虹刘延庆王海波扬州大学医学院国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室扬州大学-扬州市肿瘤研究所江苏扬州225001

目的:探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸(PA),对肾癌侵袭转移的作用及机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测PA(0、20、40、80、160μmol·L^(-1))对细胞存活率的影响,并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA(... 详细信息

目的:探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸(PA),对肾癌侵袭转移的作用及机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测PA(0、20、40、80、160μmol·L^(-1))对细胞存活率的影响,并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞增殖的作用。细胞黏附实验用来观察PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞黏附能力的效果。划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞侵袭转移的影响。高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞运动的抑制作用。PA(0、20、40、80μmol·L^(-1))对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子(MMP/TIMP)和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法(Western blot)来检测。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,PA组细胞存活率显著降低(P<0.01),24 h时PA对ACHN细胞的半数抑制浓度(IC50)为70.42μmol·L^(-1)。克隆形成实验显示,与空白组比较,PA组细胞克隆群数目显著减少(P<0.01)。细胞黏附实验显示,与空白组比较,PA组细胞的黏附数量显著减少(P<0.01)。划痕实验表明,与空白组比较,PA组细胞的划痕愈合率降低(P<0.05,P<0.01)。Transwell侵袭实验显示,与空白组比较,PA组细胞的穿膜数量减少(P<0.01)。高内涵成像技术表明,与空白组比较,PA组细胞累计迁移距离更短(P<0.01)。Western blot结果表明,与空白组比较,PA组MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低(P<0.01),TIMP-1蛋白的表达升高(P<0.01)。此外,与空白组比较,PA组Smad2、Smad3蛋白的表达降低(P<0.01)。结论:PA可抑制肾癌细胞的增殖、侵袭转移,其机制可能是通过Smad2/3调控MMP/TIMP的稳态平衡。

关键词：茯苓酸肾癌基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子(MMP/TIMP) Smad2/3 侵袭和迁移

DNA末端保护盾Shieldin在DNA损伤修复中的研究进展

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中国药理学通报 2022年第1期38卷 12-15页

作者：周珂辉刘延庆陶丽扬州大学医学院国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室江苏扬州225009

同源重组(homologous recombination,HR)与非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)的选择机制是DNA双链断裂损伤修复的前沿科学问题。末端切除是HR修复的标志性事件,53BP1通过竞争BRCA1介导的末端切除将修复途径从HR转向NHEJ... 详细信息

同源重组(homologous recombination,HR)与非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)的选择机制是DNA双链断裂损伤修复的前沿科学问题。末端切除是HR修复的标志性事件,53BP1通过竞争BRCA1介导的末端切除将修复途径从HR转向NHEJ进行。近年来,多个课题组同时发现并证实Shieldin复合物是53BP1介导的两种修复途径选择的下游效应因子。Shieldin是由Rev7、SHLD1(C20orf196)、SHLD2(FAM35A)与SHLD3(CTC-534A2.2)组成的复合体蛋白,能够限制末端切除并抑制HR修复,并以53BP1依赖的方式促进NHEJ修复。该文对Shieldin结构组装、工作与活性调节机制的研究进展进行综述,同时关注Shieldin对肿瘤治疗干预的临床价值,以期为肿瘤耐药机制与逆转耐药研究提供新的线索分子。

关键词： Shieldin 53BP1 双链断裂损伤修复同源重组非同源末端连接肿瘤耐药

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代谢组学在类风湿关节炎诊断和治疗中的研究进展

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中国药理学通报 2022年第2期38卷 173-176页

作者：吕蒙莹梁巧玲罗照勇倪腾洋刘延庆扬州大学医学院转化医学研究院国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室江苏扬州225001

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种致残率高且病因不明的慢性自身免疫性疾病,早诊断、早治疗对于预防该疾病进一步发展至关重要。近年来,代谢组学技术因其具有整体性、动态性、高灵敏度和高通量等优势广泛应用于生命科学的... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种致残率高且病因不明的慢性自身免疫性疾病,早诊断、早治疗对于预防该疾病进一步发展至关重要。近年来,代谢组学技术因其具有整体性、动态性、高灵敏度和高通量等优势广泛应用于生命科学的各个领域,该文就代谢组学技术在RA早期诊断、疾病分型、药物疗效预测与评价研究等方面的进展进行综述,以期从代谢调控角度为RA的临床诊断和治疗提供新的思路。

关键词：代谢组学类风湿关节炎诊断治疗疾病分型生物标志物

南蛇藤提取物通过破坏线粒体结构促进胃癌AGS细胞凋亡的机制

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中国实验方剂学杂志 2022年第18期28卷 46-53页

作者：王海波罗园园冯心怡倪腾洋褚泽文朱淼刘延庆扬州大学医学院国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室扬州大学-扬州市肿瘤研究所江苏扬州225001

目的观察南蛇藤提取物(COE)对胃癌细胞的抑制作用,探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制,为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据。方法5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)染色联合流式细胞实验用来检测不同质... 详细信息

目的观察南蛇藤提取物(COE)对胃癌细胞的抑制作用,探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制,为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据。方法5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)染色联合流式细胞实验用来检测不同质量浓度COE(20、40、80 mg·L^(-1))对胃癌细胞增殖的影响。通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)染色实验联合流式细胞术检测COE对胃癌细胞凋亡的影响,用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对胃癌细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,用透射电镜检测COE处理后的胃癌细胞线粒体微观结构的变化,包括线粒体膜完整性和内部嵴的变化。COE处理后,Western blot检测胃癌细胞线粒体标志蛋白超氧化物歧化酶1(SOD1)、电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)、抗增殖蛋白1(PHB1)和热休克蛋白60(HSP60)水平的变化。结果Brdu染色显示,与空白组比较,COE组(40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞的增殖比例明显下降(P胃癌细胞的凋亡数量明显增加(P胃癌细胞的线粒体膜电位水平明显降低。Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg·L^(-1))促进胃癌凋亡的相关蛋白Bax和Caspase-3表达明显增加(P胃癌细胞凋亡抵抗相关蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达显著降低(P胃癌细胞的微观结构发生了明显变化,细胞膜内出现了很多空泡,线粒体结构出现破坏,线粒体内出现空泡。Western blot结果显示,与空白组比较,COE组(20、40、80 mg·L^(-1))胃癌细胞中与应激反应有关的蛋白SOD1表达增高(P胃癌细胞的增殖,促进胃癌细胞的凋亡,其机制可能与COE破坏胃癌细胞线粒体结构和功能从而激活细胞线粒体凋亡途径有关。

关键词：南蛇藤提取物线粒体胃癌凋亡

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南蛇藤总萜抑制中性粒细胞胞外诱捕网形成的作用与机制研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2024年第1期45卷 75-83,138页

作者：郭雅洁朱淼刘延庆陶丽扬州大学医学院/国家中医药管理局胃癌毒邪重点论治研究室江苏扬州225009

为探索南蛇藤总萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成及其作用机制,通过分离与制备中性粒细胞,建立佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导的NETs形成细胞模型。利用瑞氏-姬姆萨染色、扫描电镜与免疫荧光技术研究南蛇藤总萜对NETs形成及其生物学标志的影响,并利用Annexin V/PI试验研究南蛇藤总萜对中性粒细胞凋亡的影响。结果表明:南蛇藤总萜能剂量依赖性地抑制PMA诱导的NETs形成;南蛇藤总萜(80μg·mL^(-1))可阻断中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的释放,并破坏NETs相关DNA-NE复合物的形成;南蛇藤总萜(80μg·mL^(-1))可显著抑制PMA诱导的瓜氨酸化组蛋白H3(citrullinated histone H3,CitH3)的表达水平;南蛇藤总萜可剂量依赖性地促进中性粒细胞凋亡。综上,南蛇藤总萜对中性粒细胞NETs的形成具有抑制作用,其机制可能与其直接诱导中性粒细胞凋亡有关。

关键词：南蛇藤总萜中性粒细胞胞外诱捕网凋亡中性粒细胞弹性蛋白酶瓜氨酸化组蛋白H3

千金子二萜醇p53依赖性抗肿瘤活性及构效关系研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第4期39卷 26-29页

作者：陶丽许敏姜壮壮刘延庆扬州大学医学院/国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室江苏扬州225009

采用噻唑蓝(MTT)法测定6种千金子Lathyrol与Ingenol型二萜醇及其衍生物对不同p53基因型非小细胞肺癌细胞株的抗肿瘤活性,研究千金子二萜醇及其衍生物的构效关系及p53蛋白在千金子二萜醇发挥抗肿瘤活性中的作用与机制。结果表明:天然千... 详细信息

采用噻唑蓝(MTT)法测定6种千金子Lathyrol与Ingenol型二萜醇及其衍生物对不同p53基因型非小细胞肺癌细胞株的抗肿瘤活性,研究千金子二萜醇及其衍生物的构效关系及p53蛋白在千金子二萜醇发挥抗肿瘤活性中的作用与机制。结果表明:天然千金子二萜醇3位羟基成酯后可增加非小细胞肺癌毒性,其中以巨大戟醇甲基丁烯酸酯的细胞毒作用最强。表达p53蛋白可以进一步增加二萜醇酯类衍生物的细胞毒性。在千金子二萜母体醇中引入酯基团可以增强其抗肿瘤活性,同时也能增强其p53依赖的抗肿瘤作用。这一研究为千金子二萜醇作为抗肿瘤先导物来源及其进一步结构优化提供了科学依据。

关键词：千金子二萜醇构效关系 p53蛋白抗肿瘤活性

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毒邪理论治疗肿瘤源流及辨治要法

中华中医药杂志 2020年第10期35卷 5122-5127页

作者：戴小军于彦威刘延庆扬州大学临床中医学院扬州225009 国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室扬州225009

从毒邪论治是肿瘤治疗的核心问题之一,文章系统梳理了毒邪理论治疗肿瘤的源流:秦汉时期是毒邪学说论治肿瘤的萌芽期,晋隋唐宋时期大致构建了毒邪学说的框架,明清时期进一步认识到外感疫毒这一因素,现代以来多位医家提出"癌毒"这一概念... 详细信息

从毒邪论治是肿瘤治疗的核心问题之一,文章系统梳理了毒邪理论治疗肿瘤的源流:秦汉时期是毒邪学说论治肿瘤的萌芽期,晋隋唐宋时期大致构建了毒邪学说的框架,明清时期进一步认识到外感疫毒这一因素,现代以来多位医家提出"癌毒"这一概念。恶性肿瘤的治疗应在扶正祛邪的总体治疗原则下,特别重视毒邪这一重要病理因素。文章根据毒邪在恶性肿瘤发生发展过程中的证素、证候特征、病机规律等,阐述了扶正祛毒、清热解毒、理气排毒、祛瘀化毒、化痰散毒、祛风摄毒、泄浊解毒、安邪休毒、灭虫化毒、以毒攻毒10种抗肿瘤的辨治法则,同时结合现代科学研究成果,逐步完善从毒邪论治恶性肿瘤的理论体系和框架结构。

关键词：毒邪肿瘤辨证论治源流扶正祛邪毒邪理论

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中医药治疗胃癌淋巴转移的研究进展

中国实验方剂学杂志 2020年第7期26卷 225-231页

作者：褚泽文刘延庆扬州大学医学院(扬州大学转化医学研究院) 国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室扬州大学肿瘤防治重点实验室江苏扬州225001

胃癌的发病率和死亡率在所有肿瘤中均较高,我国因为胃癌死亡的人数每年高达49.8万人。由于早期胃癌的发病特征不明显,多数到医院治疗的患者均已是中晚期胃癌,给家庭和社会都带来了沉重的负担。中晚期胃癌的术后生存期显著低于早期胃癌,... 详细信息

胃癌的发病率和死亡率在所有肿瘤中均较高,我国因为胃癌死亡的人数每年高达49.8万人。由于早期胃癌的发病特征不明显,多数到医院治疗的患者均已是中晚期胃癌,给家庭和社会都带来了沉重的负担。中晚期胃癌的术后生存期显著低于早期胃癌,其中最重要的原因在于胃癌的淋巴转移。淋巴转移是胃癌的主要转移途径,进展期胃癌的淋巴转移率高达70%左右,早期胃癌也可有淋巴转移。胃癌的淋巴结转移率和癌灶的浸润深度呈正相关。目前的治疗手段除手术切除、淋巴化疗及分子靶向治疗外,中医药因其中毒性低、治疗效果好、价格低的优势也发挥了重要的作用。中医认为胃癌的发生多因饮食不洁、情志失调、素体亏虚而致痰凝、气阻、血瘀与胃发为本病,病机总属本虚标实,临床中医治疗多以化痰解毒、健脾益气、温中散寒为主。近年来,多项研究证明中医药治疗胃癌淋巴转移在临床中疗效显著、作用广泛,其可能通过抑制基质金属蛋白酶对基底膜和细胞外基质(ECM)的水解,激发肿瘤失巢凋亡,抑制淋巴管新生,调控与肿瘤相关基因的表达等途径来治疗胃癌淋巴转移。文章从近年来中医药在治疗胃癌淋巴转移中的理论研究、实验研究以及临床研究的进展进行综述,揭示中药作用的机制及其作用靶点,以期为中医药治疗胃癌淋巴转移的深入研究以及临床上的应用提供科学依据。

关键词：胃癌淋巴结转移中医药

前列腺增生症中医治则治法、常用方药文献研究

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中国实验方剂学杂志 2019年第19期25卷 198-203页

作者：吴梦婷史渊源王停朱佩轩刘珊陈聪范琼尹苏泽琦北京中医药大学北京100029 国家中医药管理局名医名方重点研究室北京100029

目的:基于名医名家临证经验,明确前列腺增生症(BPH)中医治则治法以及常用方药的分布规律。方法:系统检索1997年1月1日至2018年12月31日,中国知网、中国生物医学、维普、万方数据库中名医名家诊治BPH相关文献,建立文献分析数据库,整合、... 详细信息

目的:基于名医名家临证经验,明确前列腺增生症(BPH)中医治则治法以及常用方药的分布规律。方法:系统检索1997年1月1日至2018年12月31日,中国知网、中国生物医学、维普、万方数据库中名医名家诊治BPH相关文献,建立文献分析数据库,整合、分析中医治则治法及遣方用药相关内容,采用SPSS 20. 0软件进行统计,获得BPH中医治则治法及常用方剂和药物分布规律。结果:本研究共纳入合格文献109篇,涉及名医名家66位,得到BPH治则共9种,主要有'标本兼治''攻补兼施''调理阴阳'等;治法共55种,主要有'活血化瘀''清热利湿''温补肾阳''软坚散结''补益肾气'等;且BPH多从肾、脾、肺论治。通过归纳整理得到BPH常用的经方共有38个,使用较多的为'桂枝茯苓丸''滋肾通关丸''补中益气汤''八正散''济生肾气丸'等;常用药物共有217味,以'黄芪''熟地黄''白术''甘草''当归'等补虚药,'牛膝''桃仁''穿山甲''王不留行''丹参'等活血化瘀药,'茯苓''泽泻''车前子'等利水渗湿药为主。结论:BPH的治疗以'标本兼治、攻补兼施'为主要治则,常用'活血化瘀''清热利湿''温补肾阳'等治法,并进行相应的遣方用药。

关键词：前列腺增生中药治则治法文献研究