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产气荚膜梭菌α-β2-ε融合蛋白原核表达及其间接ELISA方法的建立

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微生物学通报 2024年第8期51卷 3189-3200页

作者：潘瑶任小侠胡云皓王雅茜刘燕蓝岚王豪杰岳怀宁吴建平朱良全四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所四川康定626000 中国兽医药品监察所北京100081

【背景】产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起牛魏氏梭菌病(猝死症)的主要病原,严重危害养牛业。酶联免疫吸附法(ELISA)是诊断疫病及抗体检测的重要手段。【目的】表达重组α-β2-ε融合蛋白,并以此为靶抗原建立间接ELISA抗体... 详细信息

【背景】产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起牛魏氏梭菌病(猝死症)的主要病原,严重危害养牛业。酶联免疫吸附法(ELISA)是诊断疫病及抗体检测的重要手段。【目的】表达重组α-β2-ε融合蛋白,并以此为靶抗原建立间接ELISA抗体检测方法,为临床检测牦牛***及流行病学调查提供技术支持。【方法】利用生物信息学软件(EditSeq、Protean)和Jameson-Wolf方法分析牛源***的α、β2和ε蛋白抗原指数,截取抗原指数较高肽段并用柔性Linker连接,经密码子优化后克隆至载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32α-β2-ε,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经培养、诱导表达、纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定。以重组α-β2-ε融合蛋白作为包被抗原,经棋盘法和控制单一变量法优化反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定临界值并对其敏感性、特异性、重复性和临床效果进行评价。【结果】α的241‒403肽段、β2的161‒355肽段、ε的154‒331肽段抗原指数较高,将它们连接并融合表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白表达正确。ELISA抗体检测方法最佳工作条件为:抗原包被浓度5μg/mL 4℃过夜或37℃孵育60 min;5%脱脂乳于37°C封闭1 h;血清稀释度为1:150于37°C孵育30 min;酶标二抗1:2000于37°C孵育30 min;避光显色10 min。检测临界值为0.4702;敏感性高,可检测阳性血清最大稀释度为1:3200;特异性强,与溶血性曼氏杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等阳性血清均无交叉反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于10%。四川省甘孜藏族自治州部分地区共277份牦牛血清样品检测结果显示,***抗体阳性率为89.89%,与商品化产气荚膜梭菌α毒素ELISA检测试剂盒检测结果基本一致。【结论】成功制备重组α-β2-ε融合蛋白并建立检测***的间接ELISA抗体检测方法。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素 β2毒素 ε毒素融合表达间接ELISA

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温州红鸡生长曲线拟合与最佳上市周龄分析

浙江农业学报 2024年

作者：李紫薇张雅文宋斌侯凤香金俊杰赵燕卢立志浙江省农业科学院畜牧兽医研究所温州市农业科学研究院畜牧兽医研究所

探究温州红鸡生长发育规律和不同周龄温州红鸡屠宰性能、肌肉品质的差异，为确定最佳上市时间和高效养殖提供理论依据。利用Logistic模型、Gompertz模型和Von Bertallanffy模型对温州红鸡0～24周龄的生长曲线进行拟合分析；分别选取26... 详细信息

探究温州红鸡生长发育规律和不同周龄温州红鸡屠宰性能、肌肉品质的差异，为确定最佳上市时间和高效养殖提供理论依据。利用Logistic模型、Gompertz模型和Von Bertallanffy模型对温州红鸡0～24周龄的生长曲线进行拟合分析；分别选取26、30和34周龄的温州红鸡各20只(公母各半)，测定屠宰性能、肌肉品质。结果表明：3种非线性模型均可以较好地拟合温州红鸡的生长，拟合度(R2)均达到0.99以上，其中Von Bertalanffy模型更适合公鸡(R2=0.998 2)，Gompertz模型更适合母鸡(R2=0.997 3)。屠宰率达到90%以上，全净膛率达到68%以上。公鸡、母鸡在30周龄时腿肌率均高于其他周龄；剪切力均随着周龄的增长逐渐增大；公鸡在30周龄时系水力、粗脂肪含量高于其他周龄，且磷含量显著高于其他周龄(P<0.05)；母鸡在30周龄钙含量最高。胸肌中共检测出16种氨基酸，30周龄母鸡的呈味氨基酸含量均高于其他周龄，公鸡随周龄的增长呈味氨基酸含量逐渐降低；胸肌中不饱和脂肪酸总量高于饱和脂肪酸，34周龄母鸡和30周龄公鸡不饱和脂肪酸含量最高。30周龄时每只公鸡生产利润为46.79元，母鸡生产利润为18.73元。综上所述，温州红鸡母鸡在30～34周龄上市，公鸡在30周龄上市为宜。

关键词：温州红鸡生长曲线屠宰性能肌肉品质上市时间

猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：赵子惠陈伯祥王佳成伟伟杨明李元新甘肃省畜牧兽医研究所

为开发一种猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列，设计了3对引物，使用构建的重组质粒作为标准阳性对照，通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条，成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA... 详细信息

为开发一种猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列，设计了3对引物，使用构建的重组质粒作为标准阳性对照，通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条，成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为：Mg2+浓度1.0 mmol/L，dNTP浓度0.8 mmol/L，Betaine浓度1.0 mol/L，BstDNA聚合酶浓度8.0U，反应温度63℃，反应时间60 min，AMV逆转录酶5U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带，证明了其对TGEV的特异性检测和良好的重复性，灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示，该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%，显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤，能够完成一步检测。此外，该方法不需要特殊仪器，适用于现场快速检测TGEV，为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新技术。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 RT-CPA S基因检测方法

冷季不同饲养管理模式和粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构和功能的影响

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草业科学 2024年第6期41卷 1453-1470页

作者：张振祥曹铨丁路明俞旸刘文亭杨晓霞张春平童永尚杨增增周沁苑王芳草董全民青海大学畜牧兽医科学院/青海省畜牧兽医科学院/青海省高寒草地适应性管理重点实验室青海西宁810016 西南民族大学青藏高原研究所四川成都610041

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲... 详细信息

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲喂粗精料比为90∶10、70∶30和50∶50的饲粮。试验结束屠宰后采集各组牦牛瘤胃液,利用16S rDNA高通量测序检测其菌群结构。结果表明,24份样品共检测到20696个ASVs,有4966、3069、3680和3536个ASVs分别在RCG1、RCC90、RCC70和RCC50组4组样品特异性表达。在门和属水平上,4组样品的共同优势菌为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门,以及理研菌科RC9属、普雷沃菌属和克里斯滕森菌科_R-7菌群。RCG1组和补饲组牦牛瘤胃菌群区系和丰度差异显著(P0.05),均注释到营养代谢和复制与修复等生物过程。饲养管理模式和不同粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构影响显著(P0.05),冷季补饲10%精料可显著提高瘤胃菌群丰度和多样性(P研究结果为青藏高原牦牛的合理饲养提供了数据支撑,也为研发适宜于青藏高原牦牛养殖业的管理模式,减轻放牧场压力,解决草地退化、草畜失衡及保持牦牛养殖业的健康良性发展等问题提供了理论支持。

关键词：牦牛养殖放牧管理农牧结合管理饲粮结构瘤胃微生物 16S rDNA基因高通量测序功能预测

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叙永县四川山地乌骨鸡发展现状、问题及对策

四川畜牧兽医 2024年第2期51卷 15-16页

作者：李永强杨朝武张增荣彭涵朱师良余春林四川省叙永县农业农村局畜牧兽医股四川叙永646400 四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

四川山地乌骨鸡包括兴文型、叙永型、沐川型和筠连型等四个类群,其中叙永型源于叙永县枧槽苗族乡,已有三百多年的饲养历史,2019年以“峰岩乌骨鸡”的名称获国家地理标志证明商标,是叙永县畜牧产业唯一取得地理标志的畜禽品种资源。本文... 详细信息

四川山地乌骨鸡包括兴文型、叙永型、沐川型和筠连型等四个类群,其中叙永型源于叙永县枧槽苗族乡,已有三百多年的饲养历史,2019年以“峰岩乌骨鸡”的名称获国家地理标志证明商标,是叙永县畜牧产业唯一取得地理标志的畜禽品种资源。本文就叙永县四川山地乌骨鸡发展现状、存在的问题进行分析,并对龙头企业打造、园区建设、资金帮扶体系构建与完善、品牌建设、品种保护与开发、联农惠农机制建立等方面提出了对策。

关键词：畜禽品种资源四川山地乌骨鸡饲养历史地理标志畜牧产业叙永县园区建设构建与完善

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预防育肥猪疾病的管理措施

吉林畜牧兽医 2024年第4期45卷 34-36页

作者：龙沛强四川省顾县畜牧兽医站四川广安638311

育肥猪正处于增肥关键阶段,生长速度较快,除了要做好日常喂养工作外,也要加强猪舍清理和消毒,确保育肥猪生活环境良好。针对猪易患疾病,应提前做好预防和治疗管理措施,增强育肥猪的免疫力和抵抗力,减少不必要的损失,从而获取更好的养殖... 详细信息

育肥猪正处于增肥关键阶段,生长速度较快,除了要做好日常喂养工作外,也要加强猪舍清理和消毒,确保育肥猪生活环境良好。针对猪易患疾病,应提前做好预防和治疗管理措施,增强育肥猪的免疫力和抵抗力,减少不必要的损失,从而获取更好的养殖效果和经济效益。本文对预防育肥猪疾病进行了深入研究,分析了一些常见疾病,并提出一些预防管理措施。

关键词：疾病预防育肥猪管理措施

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铜对动物脂质代谢影响的研究进展

中国饲料 2024年第13期 94-100页

作者：刁慧汤文杰周梦佳晏家友魏小兰黄崇波严鸿林何鹏王天蔚胡睿琪付洪森李书伟四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066 四川省畜科集团有限公司畜禽生物制品四川省重点实验室四川成都610066 四川畜科生物发展有限公司四川成都611330 西南科技大学生命科学与工程学院四川绵阳621010

铜是动物机体必需的营养元素,其以辅基的形式参与体内多种酶(细胞色素氧化酶、铜蓝蛋白、过氧化物歧化酶、赖氨酰氧化酶等)的构成,从而参与生物体的多种代谢过程,影响动物生长发育、造血、免疫等功能。研究表明,添加高铜有助于改善动物... 详细信息

铜是动物机体必需的营养元素,其以辅基的形式参与体内多种酶(细胞色素氧化酶、铜蓝蛋白、过氧化物歧化酶、赖氨酰氧化酶等)的构成,从而参与生物体的多种代谢过程,影响动物生长发育、造血、免疫等功能。研究表明,添加高铜有助于改善动物生产性能,但会导致体内铜过量蓄积,改变机体代谢,影响体脂合成,与多种疾病的发生发展有关;铜缺乏与人的高胆固醇血症、心血管疾病、非酒精性脂肪肝等多种疾病有密切关系。因此,本文系统地综述了铜在动物体内的代谢,阐明铜对脂质代谢调控和畜禽产品品质的影响,为铜在动物生产中的科学应用提供参考,同时指出铜在未来需要进一步探讨和研究的方向。

关键词：铜吸收转运脂质代谢畜产品品质动物

麦洼牦牛MFSD4A基因克隆及组织表达分析

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华北农学报 2024年第2期39卷 174-183页

作者：胡莲刘益丽赵迪王泽宁江明锋西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部和四川省重点试验室四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041

旨在克隆麦洼牦牛MFSD4A基因序列并阐明其在不同组织中的表达模式,分析MFSD4A互作蛋白mRNA表达水平及其相关性,确定MFSD4A蛋白的亚细胞定位,为后续MFSD4A在牦牛睾丸生长发育调控研究中提供理论依据。以4头健康麦洼牦牛的心、肝、脾、肺... 详细信息

旨在克隆麦洼牦牛MFSD4A基因序列并阐明其在不同组织中的表达模式,分析MFSD4A互作蛋白mRNA表达水平及其相关性,确定MFSD4A蛋白的亚细胞定位,为后续MFSD4A在牦牛睾丸生长发育调控研究中提供理论依据。以4头健康麦洼牦牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪、臀肌、背部肌肉、睾丸、结肠组织作试验材料,用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛MFSD4A基因CDS序列并对其进行生物信息学分析;利用RT-qPCR技术检测MFSD4A基因在心、肝、脾、肺、肾、臀肌、背部肌肉、脂肪、睾丸、淋巴等10个组织中的表达及与其互作蛋白的相关性;构建pEGFP-MFSD4A融合质粒转染牛肾细胞系(MDBK)探究MFSD4A蛋白的亚细胞定位情况。结果表明,麦洼牦牛MFSD4A基因CDS区全长为1 530 bp,编码509个氨基酸,理论等电点(pI)为8.66,具有12个跨膜结构域,属于碱性跨膜蛋白;RT-qPCR结果显示,MFSD4A mRMA在麦洼牦牛各组织中差异表达,且在睾丸组织中表达量最高,与MFSD9、CBY1、INHBA、UNC93A、SVOP、ID1在睾丸组织中的表达量呈极显著正相关,推测MFSD4A基因可能与牦牛睾丸的生长发育调控有关;构建pEGFP-MFSD4A融合质粒转染牛肾细胞(MDBK)后的荧光定位显示该蛋白主要定位于细胞核。

关键词：牦牛 MFSD4A 基因克隆互作蛋白分析亚细胞定位

四种藏兽医药用植物和屎肠球菌联用对大肠杆菌E6生物被膜的影响

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 12-20页

作者：谭敏杨丹娇汪露黄志宏陈朝喜西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所康定626000

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯... 详细信息

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚)、屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄西林和磺胺甲噁唑)联合对10株多重耐药大肠杆菌(E1-E10)杀菌活性,以探讨不同药物组合对E6生物被膜的清除作用。实验结果显示:152株大肠杆菌多表现为中等成膜能力和无成膜能力表型,对氯霉素、磺胺二甲嘧啶、土霉素、氨苄西林、磺胺甲噁唑的耐药率均高于90%,对二氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻呋、妥布霉素和头孢曲松的耐药率均低于50%,其中阿米卡星的敏感率最高,耐药率仅为19.90%;马蹄黄甲醇提取物、偏翅唐松草乙酸乙酯提取物、华丽龙胆甲醇提取物和岩生忍冬乙酸乙酯提取物、屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物对E1~E10的MIC范围分别为3.93~15.63、3.93~31.52,7.81~15.63、7.81~31.52、0.42~13.38和0.45~3.63 mg/mL;四种藏兽医药用植物不同提取部位和屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗菌药物分别呈现不同的联合作用;在MIC浓度下,药物联合对E6表现出较强的生物被膜清除能力,其中岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联用对E6生物被膜的抑制率高于其他组合,岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取部位与土霉素联用的抑制率分别为48.92%、42.58%,与氨苄西林联用的抑制率分别为48.58%、47.84%。选用的四种藏兽医药用植物、益生菌和抗菌药物联合应用在一定程度上能够解决本研究藏猪和藏鸡源大肠杆菌耐药性和生物被膜形成等问题。

关键词：藏兽医药用植物生物被膜形成能力多重耐药性耐药谱型