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急性淋巴细胞白血病阿糖胞苷耐药细胞株的构建及机制研究

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中国实验血液学杂志 2021年第5期29卷 1403-1410页

作者：覃祥刘静陈曦钟芳芳杨友曾艳李程刘文君西南医科大学附属医院儿科四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的:构建耐阿糖胞苷(Ara-C)的急性淋巴细胞白血病(ALL)耐药细胞株,并探讨可能耐药机制。方法:低浓度Ara-C持续诱导培养Jurkat和Nalm-6细胞,构建Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株。CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周... 详细信息

目的:构建耐阿糖胞苷(Ara-C)的急性淋巴细胞白血病(ALL)耐药细胞株,并探讨可能耐药机制。方法:低浓度Ara-C持续诱导培养Jurkat和Nalm-6细胞,构建Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株。CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR检测多药耐药基因和Ara-C代谢酶m RNA表达水平,免疫印迹法检测细胞周期蛋白表达水平。结果:成功构建了Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株,耐药指数分别为1 973.908±161.163和7 231.643±1 190.624,耐药细胞株对阿霉素等常用化疗药物无交叉耐药。流式细胞术检测结果显示,Jurkat/Ara-C细胞G_(0)/G_(1)期比例增加(P<0.05),G_(2)/M期减少(P<0.05),而Nalm-6/Ara-C细胞周期分布较Nalm-6细胞无明显改变。实时荧光定量PCR检测发现脱氧胞苷激酶和胞苷脱氨酶在耐药细胞中低表达(P<0.05),MRP在Nalm-6/Ara-C细胞中高表达(P<0.05),MDR1、LRP和BCRP未见明显增加。蛋白免疫印迹检测发现Cyclin B1在耐药细胞中明显低表达(P<0.05),Cyclin D1未见明显改变。结论:低浓度持续诱导法成功构建了ALL耐Ara-C细胞株,其耐药机制可能与脱氧胞苷激酶和Cyclin B1的缺乏有关。

关键词：急性淋巴细胞白血病阿糖胞苷耐药脱氧胞苷激酶胞苷脱氨酶 CyclinB1

肺炎支原体感染患儿TLR4/NF-κB介导机体细胞免疫及体液免疫应答的作用

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中华医院感染学杂志 2023年第20期33卷 3151-3155页

作者：罗平白永旗辛艳梅郭渠莲沈兴西南医科大学附属医院儿科儿童血液肿瘤与出生缺陷实验室四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的分析肺炎支原体感染患儿炎症因子、T淋巴细胞表达水平变化,并探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)途径在机体细胞免疫及体液免疫应答中的作用机制。方法选取2021年1月-2022年12月西南医科大学附属医院收治的肺炎支原体感染患儿... 详细信息

目的分析肺炎支原体感染患儿炎症因子、T淋巴细胞表达水平变化,并探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)途径在机体细胞免疫及体液免疫应答中的作用机制。方法选取2021年1月-2022年12月西南医科大学附属医院收治的肺炎支原体感染患儿120例设为感染组,并以同期105名健康体检的健康儿童作为对照组;采用聚合酶链式反应(PCR)检测两组研究对象外周血中TLR4、NF-κB、抑制蛋白κB(IκB)mRNA相对表达量,并比较两组血清中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α);采用流式细胞仪检测CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)及CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)及CD_(4)^(+)CD_(25)^(+)调节性T细胞(Treg)水平。结果感染组患儿IL-6、IL-8、TNF-α高于对照组,感染组患儿TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量高于对照组,IκB mRNA低于对照组(P<0.05);感染组患儿外周CD_(4)^(+)CD_(25)^(+)Treg、CD_(8)^(+)高于对照组,CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)以及CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)低于对照组(P<0.05);MP感染患儿TLR4、NF-κB与IL-6、IL-8和TNF-α均呈正相关(P<0.05),IκB与IL-6、IL-8和TNF-α均呈负相关(P<0.05);TLR4、NF-κB与CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)均呈负相关,而与CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)CD_(25)^(+)Treg均呈正相关;IκB与CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)均呈正相关,而与CD_(8)^(+)、CD_(4)^(+)CD_(25)^(+)Treg均呈负相关(P<0.05)。结论肺炎支原体感染可激活TLR4/NF-κB信号通路,该通路介导机体细胞免疫和体液免疫应答,导致淋巴细胞亚群失调,同时可促进多种炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α释放,诱发肺部炎症反应。

关键词：肺炎支原体儿童 Toll样受体4/核因子-κB信号通路淋巴细胞亚群白细胞介素-6 白细胞介素-8 肿瘤坏死因子-α

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输血相关性坏死性小肠结肠炎的思考

临床儿科杂志 2022年第9期40卷 647-653页

作者：雷小平罗丽娟西南医科大学附属医院儿科(新生儿)四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)是一种新生儿时期严重威胁生命的胃肠道疾病,多以腹胀、呕吐、血便及休克等非特异性症状为主要临床表现,在早产儿中症状更不典型。目前广泛被认可的NEC病因包括早产、感染、缺氧缺血和喂养不当等。近年来,... 详细信息

新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)是一种新生儿时期严重威胁生命的胃肠道疾病,多以腹胀、呕吐、血便及休克等非特异性症状为主要临床表现,在早产儿中症状更不典型。目前广泛被认可的NEC病因包括早产、感染、缺氧缺血和喂养不当等。近年来,红细胞输注(RBCT)与NEC之间的相关性受到广泛关注。文章通过梳理输血与NEC的相关性、输血相关性坏死性小肠结肠炎(TANEC)的影响因素及发病机制和TANEC的预防等方面的研究进展,认为TANEC是客观存在的,但贫血本身才是TANEC的发病基础,预防贫血、合理输血是减少TANEC的基本策略。

关键词：坏死性小肠结肠炎红细胞输注新生儿

咖啡因不同维持方式预防早产儿呼吸暂停的效果

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实用医学杂志 2022年第15期38卷 1936-1941页

作者：包正荣马艳白梦思吴瑞琳董文斌雷小平西南医科大学附属医院新生儿科四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的探究两种咖啡因维持方式预防呼吸暂停(apnea of prematurity,AOP)的有效性和安全性,以达到简化临床使用咖啡因的目的。方法选取2018年1月至2020年12月收治的孕周0.05)。两组早产儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)... 详细信息

目的探究两种咖啡因维持方式预防呼吸暂停(apnea of prematurity,AOP)的有效性和安全性,以达到简化临床使用咖啡因的目的。方法选取2018年1月至2020年12月收治的孕周出生体质量×10 mg/kg,n=166)和维持剂量变化组[5 mg/(kg·d),随体质量增加而增加,n=144]。比较两组患儿的AOP预防效果、并发症、不良反应及临床结局。结果维持剂量固定组中频繁出现呼吸暂停、需额外增加咖啡因剂量及提高呼吸支持强度的发生率低于维持剂量变化组(P出生体重恢复时间差异均无统计学意义(均P>0.05)。两组早产儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)、支气管肺发育不良(broncho pulmonary dysplasia,BPD)、脑室内出血(intraventricular hemorrhage,IVH)、晚发型败血症、心动过速、喂养不耐受及需治疗的早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)和动脉导管未闭(patent ductus arteriosus,PDA)的发生率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论出生体质量×10 mg/kg的每日固定剂量维持可有效改善早产儿呼吸暂停,并且可能减少频繁的医嘱更改而导致的临床工作负担和患儿安全风险。

关键词：咖啡因早产儿呼吸暂停维持剂量效果安全性

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白血病．淋巴瘤 2022年第2期31卷 111-116页

作者：陈千翟一蔓刘文君西南医科大学附属医院儿科(血液肿瘤病区)四川省出生缺陷临床医学研究中心泸州646000

目的系统评价C-KIT基因突变与儿童核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)预后的关系。方法以"KIT""Acute Myeloid Leukemia""Children"为英文检索词检索PubMed数据库;以"KIT""急性髓系白血病""儿童"为检索词检索中国期刊全文数据库(C... 详细信息

目的系统评价C-KIT基因突变与儿童核心结合因子相关急性髓系白血病(CBF-AML)预后的关系。方法以"KIT""Acute Myeloid Leukemia""Children"为英文检索词检索PubMed数据库;以"KIT""急性髓系白血病""儿童"为检索词检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普数据库、万方数据库,检索时间为建库至2020年10月1日。文献经过严格筛选后纳入分析;根据基因检测明确有无基因改变,分为C-KIT突变组和野生组,分析两组完全缓解(CR)率、无事件生存(EFS)率、总生存(OS)率的差异。结果共纳入6篇文献,其中英文文献4篇,中文文献2篇,共667例患者。儿童CBF-AML患者中,C-KIT突变组与野生组EFS率比较,差异有统计学意义(HR=2.40,95%CI 1.47~3.89,P=0.001);两组CR率和OS率差异均无统计学意义(OR=0.93,95%CI 0.48~1.80,P=0.830;HR=1.92,95%CI 0.96~3.83,P=0.065)。结论C-KIT基因突变可能是儿童CBF-AML患者预后不良的危险因素。

关键词：白血病,髓样,急性儿童核心结合因子类原癌基因蛋白质c-kit

高氧抑制SIRT1和PGC-1α表达引起肺泡上皮细胞线粒体功能障碍

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第9期36卷 788-793页

作者：汪璠雷小平康兰朱晓丹阮颖董文斌西南医科大学附属医院新生儿科四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的探讨沉默配对型信息调节因子2同源物1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(SIRT1-PGC-1α)信号途径介导高氧对A549人肺泡上皮细胞线粒体功能的影响及其可能机制。方法取对数生长期的人肺泡上皮细胞,随机分为对照组和高氧组... 详细信息

目的探讨沉默配对型信息调节因子2同源物1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(SIRT1-PGC-1α)信号途径介导高氧对A549人肺泡上皮细胞线粒体功能的影响及其可能机制。方法取对数生长期的人肺泡上皮细胞,随机分为对照组和高氧组。对照组置于37℃、50 mL/L CO2饱和湿度培养箱中培养,高氧组予以950 mL/L O2处理。培养24 h后,Mito SOX^TM染色法检测线粒体活性氧(Mito-ROS)水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,实时定量PCR检测线粒体DNA含量及SIRT1、PGC-1α、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)mRNA水平,Western blot法检测SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平。结果与对照组相比,高氧组细胞Mito-ROS明显增加,膜电位明显下降;高氧组线粒体DNA含量减少,SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA和蛋白表达均下降。结论高氧诱导SIRT1和PGC-1α表达降低引起人肺泡上皮细胞线粒体功能障碍。

关键词：高氧人肺泡上皮细胞沉默配对型信息调节因子2同源物1(SIRT1) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α) 线粒体功能障碍

苦杏仁苷对新生大鼠坏死性小肠结肠炎的保护作用

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中国比较医学杂志 2022年第1期32卷 75-81页

作者：曾信豪谢东可郑皓徐沛王小勇西南医科大学附属医院儿外科四川泸州646000 四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的分析苦杏仁苷对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的保护作用。方法将60只出生7 d的健康新生SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、苦杏仁苷低剂量组、苦杏仁苷中剂量组、苦杏仁苷高剂量组和柳氮磺嘧啶组,每组10只。除对照组外,其... 详细信息

目的分析苦杏仁苷对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的保护作用。方法将60只出生7 d的健康新生SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、苦杏仁苷低剂量组、苦杏仁苷中剂量组、苦杏仁苷高剂量组和柳氮磺嘧啶组,每组10只。除对照组外,其他各组大鼠均采用缺氧冷应激联合配方奶侵袭性喂养法建立NEC模型。同时低、中、高剂量组分别给予20、40、80 mg/kg苦杏仁苷,柳氮磺嘧啶组给予300 mg/kg柳氮磺嘧啶,连续给药5 d。末次干预12 h后,记录大鼠体重变化,取小肠回盲部组织进行HE染色,并进行回盲部肠组织损伤评分;通过TUNEL染色检测细胞凋亡率;通过酶联免疫法检测血清炎症因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。通过Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-1)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠体重显著下降,肠组织损伤评分、肠组织细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、IL-1β、SOD、MDA、GSH-Px水平以及NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平显著升高(P临床进一步探究。

关键词：苦杏仁苷小肠结肠炎大鼠氧化应激水平

槐耳对人急性T淋巴细胞白血病CEM-C1细胞耐药性的逆转作用及机制

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解放军医学杂志 2021年第3期46卷 213-220页

作者：任丹薇龙思利覃祥牛亚娜钟芳芳刘静刘文君西南医科大学附属医院儿科血液肿瘤病区/四川省出生缺陷临床医学研究中心四川泸州646000

目的探讨槐耳能否逆转人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞对糖皮质激素的耐药性及其可能的机制。方法人CEM-C1、CEM-C7细胞经不同浓度槐耳处理后设为对照组(0μg/ml)及200、600μg/ml槐耳处理组,T-ALL细胞株CEM-C1细胞设槐耳... 详细信息

目的探讨槐耳能否逆转人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞对糖皮质激素的耐药性及其可能的机制。方法人CEM-C1、CEM-C7细胞经不同浓度槐耳处理后设为对照组(0μg/ml)及200、600μg/ml槐耳处理组,T-ALL细胞株CEM-C1细胞设槐耳(100μg/ml)联合地塞米松(DEX,12.5、25、50、100、200μg/ml)组。CCK-8法检测槐耳对各组细胞增殖的影响;流式细胞术检测不同浓度(200、600μg/ml)槐耳对CEM-C1、CEM-C7细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blotting检测CEM-C1、CEM-C7细胞中及CEM-C1细胞经不同浓度(200、600μg/ml)槐耳处理后MDR1、Pim3蛋白的表达水平;qRT-PCR检测CEM-C1、CEM-C7细胞中及CEM-C1细胞经不同浓度(200、600μg/ml)槐耳处理后Pim3 mRNA的表达情况。结果槐耳呈剂量依赖性地抑制CEM-C1、CEM-C7细胞增殖;在CEM-C1细胞中,与单用DEX比较,槐耳联合DEX的耐药逆转倍数为1.34倍,且槐耳联合低浓度DEX(12.5、25、50μg/ml)组CEM-C1细胞的增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);槐耳联合DEX各组的两药相互作用指数(CDI)均<1。与对照组比较,CEM-C1及CEM-C7细胞凋亡率随槐耳浓度的增加而升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,200、600μg/ml槐耳处理CEM-C1、CEM-C7细胞48 h后,S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CEM-C1细胞中MDR1、Pim3蛋白表达水平(分别为2.41±0.32、0.39±0.10)及Pim3 mRNA表达水平(1.00)均明显高于CEM-C7细胞(分别为1.34±0.43、0.13±0.05及0.37±0.02),差异有统计学意义(P<0.05);CEM-C1细胞经200、600μg/ml槐耳处理后,MDR1、Pim3蛋白及Pim3 mRNA表达水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论槐耳可抑制CEM-C1、CEM-C7细胞的增殖,促进其凋亡,并可部分逆转CEM-C1细胞对糖皮质激素的耐药性,其机制可能与Pim3下调有关。

关键词：急性淋巴细胞白血病槐耳 Pim3 耐药性

不同免疫分型急性淋巴细胞白血病患儿融合基因检测及预后分析

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中国实验血液学杂志 2022年第6期30卷 1673-1678页

作者：刘春艳潘燕莎杨洪胡晓陈红英刘文君西南医科大学附属医院儿科(四川省出生缺陷临床医学研究中心) 四川泸州646000

目的:观察不同免疫分型急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的融合基因检出情况,并分析融合基因与预后的关系。方法:回顾性分析本院2015年5月-2020年5月收治的86例ALL患儿的临床资料,记录患儿免疫分型及预后情况,比较不同免疫分型患儿的融合基... 详细信息

目的:观察不同免疫分型急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的融合基因检出情况,并分析融合基因与预后的关系。方法:回顾性分析本院2015年5月-2020年5月收治的86例ALL患儿的临床资料,记录患儿免疫分型及预后情况,比较不同免疫分型患儿的融合基因检出情况,并分析融合基因检测与预后的关系。结果:骨髓免疫分型结果显示,86例ALL患儿中有13例T细胞型,73例B细胞型。T细胞型患儿融合基因SIL-TAL1的检出率明显高于B细胞型患儿(P0.05)。随访8-12个月,以复发为终点事件,平均随访时间为(10.14±1.75)个月,86例ALL患儿中15例复发(17.44%),经Kaplan-Meier法绘制复发曲线显示,15例复发患儿的中位复发时间为9个月。预后不良组患儿微小残留病阳性、有髓外浸润占比均高于预后良好组,比较差异有统计学意义(均P1,P0.707,有一定的预测价值。结论:不同免疫分型的ALL患儿融合基因存在差异,微小残留病、髓外浸润、融合基因均与患儿预后有关,检测融合基因可作为预测患儿预后的新手段。

关键词：急性淋巴细胞白血病免疫分型融合基因预后髓外浸润