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产气荚膜梭菌α-β2-ε融合蛋白原核表达及其间接ELISA方法的建立

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微生物学通报 2024年第8期51卷 3189-3200页

作者：潘瑶任小侠胡云皓王雅茜刘燕蓝岚王豪杰岳怀宁吴建平朱良全四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所四川康定626000 中国兽医药品监察所北京100081

【背景】产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起牛魏氏梭菌病(猝死症)的主要病原,严重危害养牛业。酶联免疫吸附法(ELISA)是诊断疫病及抗体检测的重要手段。【目的】表达重组α-β2-ε融合蛋白,并以此为靶抗原建立间接ELISA抗体... 详细信息

【背景】产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是引起牛魏氏梭菌病(猝死症)的主要病原,严重危害养牛业。酶联免疫吸附法(ELISA)是诊断疫病及抗体检测的重要手段。【目的】表达重组α-β2-ε融合蛋白,并以此为靶抗原建立间接ELISA抗体检测方法,为临床检测牦牛***及流行病学调查提供技术支持。【方法】利用生物信息学软件(EditSeq、Protean)和Jameson-Wolf方法分析牛源***的α、β2和ε蛋白抗原指数,截取抗原指数较高肽段并用柔性Linker连接,经密码子优化后克隆至载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32α-β2-ε,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经培养、诱导表达、纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定。以重组α-β2-ε融合蛋白作为包被抗原,经棋盘法和控制单一变量法优化反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定临界值并对其敏感性、特异性、重复性和临床效果进行评价。【结果】α的241‒403肽段、β2的161‒355肽段、ε的154‒331肽段抗原指数较高,将它们连接并融合表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白表达正确。ELISA抗体检测方法最佳工作条件为:抗原包被浓度5μg/mL 4℃过夜或37℃孵育60 min;5%脱脂乳于37°C封闭1 h;血清稀释度为1:150于37°C孵育30 min;酶标二抗1:2000于37°C孵育30 min;避光显色10 min。检测临界值为0.4702;敏感性高,可检测阳性血清最大稀释度为1:3200;特异性强,与溶血性曼氏杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等阳性血清均无交叉反应;重复性好,批内和批间变异系数均小于10%。四川省甘孜藏族自治州部分地区共277份牦牛血清样品检测结果显示,***抗体阳性率为89.89%,与商品化产气荚膜梭菌α毒素ELISA检测试剂盒检测结果基本一致。【结论】成功制备重组α-β2-ε融合蛋白并建立检测***的间接ELISA抗体检测方法。

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素 β2毒素 ε毒素融合表达间接ELISA

CD4^(+)T细胞相关细胞因子在人兽共患寄生虫感染中的作用研究进展

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动物医学进展 2024年第1期45卷 104-109页

作者：陈晓娣康润敏魏勇叶勇刚西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 四川省畜牧科学研究院/动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

CD4^(+)T细胞亚群及其分泌的细胞因子在寄生虫感染过程中发挥着极其重要的调控作用,与寄生虫感染的发生、发展、预后密切相关。已知CD4^(+)T细胞亚群包括Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th9细胞以及Tfh细胞等,机体的Th1/Th2、Th... 详细信息

CD4^(+)T细胞亚群及其分泌的细胞因子在寄生虫感染过程中发挥着极其重要的调控作用,与寄生虫感染的发生、发展、预后密切相关。已知CD4^(+)T细胞亚群包括Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th9细胞以及Tfh细胞等,机体的Th1/Th2、Th17/Treg细胞处于动态平衡,但在特异性抗原刺激下,这种动态平衡会被打破。目前可用来预防或治疗寄生虫病的疫苗和药物较少,主要原因是对寄生虫病致病机制的认识有限。研究表明,寄生虫感染导致宿主炎症以及刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。论文主要阐述与CD4^(+)T细胞亚群相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-9及IL-21在寄生虫感染中的作用,以期为探索和研究寄生虫病的发病机制及寄生虫在宿主体内的免疫逃逸机制提供参考。

关键词：细胞因子人兽共患寄生虫感染干扰素-γ 白介素

蜀兴1号肉兔和伊拉兔生产性能及MSTN、Myf5和MyoG基因的表达

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江苏农业科学 2024年第8期52卷 151-157页

作者：曾建红李丛艳郭志强郑洁李钰莹杨锐任永军雷岷谢晓红邝良德四川省畜牧科学研究院四川成都610066 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

测定蜀兴1号肉兔和伊拉兔的生产性能相关指标,比较二者性状差异,并分析肉质相关基因的表达差异,为蜀兴1号肉兔的开发利用和肉质功能基因鉴定提供研究基础。测定蜀兴1号肉兔和伊拉兔生长性能等指标,每个品种挑选体质量相近的30只(公母各... 详细信息

测定蜀兴1号肉兔和伊拉兔的生产性能相关指标,比较二者性状差异,并分析肉质相关基因的表达差异,为蜀兴1号肉兔的开发利用和肉质功能基因鉴定提供研究基础。测定蜀兴1号肉兔和伊拉兔生长性能等指标,每个品种挑选体质量相近的30只(公母各半)进行屠宰,测定屠宰性能和肉质特性,通过实时荧光定量方法研究蜀兴1号肉兔和伊拉兔肉质特性相关基因的相对表达量,并将肉质特性相关基因的表达水平与熟肉率、滴水损失和肌内脂肪含量进行相关性分析。结果表明,在生长性能方面,蜀兴1号肉兔的日增质量和料质量比显著低于伊拉兔(P<0.05),育肥成活率差异不显著。在屠宰性能方面,蜀兴1号肉兔宰前活体质量显著低于伊拉兔,但其屠宰性能好、商业胴体率、半净膛率、全净膛率和肉骨比显著高于伊拉兔(P<0.05)。在肉质特性方面,蜀兴1号肉兔背最长肌的滴水损失显著低于伊拉兔,熟肉率和脂肪含量显著高于伊拉兔(P<0.05)。水分含量、蛋白质含量、灰分含量、pH值、肉色、全质构分析指标等均差异不显著。在肉质基因表达方面,蜀兴1号肉兔Myf5基因表达显著高于伊拉兔,MyoG基因表达显著低于伊拉兔(P<0.05),蜀兴1号肉兔的MSTN基因表达略高于伊拉兔但差异不显著。蜀兴1号肉兔的背最长肌Myf5基因的相对表达量与肌内脂肪含量呈显著正相关,MyoG基因的相对表达量与熟肉率呈显著正相关,与滴水损失呈显著负相关(P<0.05)。伊拉兔的背最长肌Myf5基因的相对表达量与熟肉率和肌内脂肪含量呈显著正相关,MyoG基因的相对表达量与滴水损失呈显著负相关(P<0.05)。与伊拉兔相比,蜀兴1号肉兔具有更好的屠宰性能和肉质特性,且蜀兴1号肉兔和伊拉兔熟肉率、滴水损失和肌内脂肪含量的差异与Myf5和MyoG基因的表达差异有关。

关键词：蜀兴1号肉兔伊拉兔生长性能屠宰性能肉质特性相关基因

冷季不同饲养管理模式和粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构和功能的影响

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草业科学 2024年第6期41卷 1453-1470页

作者：张振祥曹铨丁路明俞旸刘文亭杨晓霞张春平童永尚杨增增周沁苑王芳草董全民青海大学畜牧兽医科学院/青海省畜牧兽医科学院/青海省高寒草地适应性管理重点实验室青海西宁810016 西南民族大学青藏高原研究所四川成都610041

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲... 详细信息

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲喂粗精料比为90∶10、70∶30和50∶50的饲粮。试验结束屠宰后采集各组牦牛瘤胃液,利用16S rDNA高通量测序检测其菌群结构。结果表明,24份样品共检测到20696个ASVs,有4966、3069、3680和3536个ASVs分别在RCG1、RCC90、RCC70和RCC50组4组样品特异性表达。在门和属水平上,4组样品的共同优势菌为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门,以及理研菌科RC9属、普雷沃菌属和克里斯滕森菌科_R-7菌群。RCG1组和补饲组牦牛瘤胃菌群区系和丰度差异显著(P0.05),均注释到营养代谢和复制与修复等生物过程。饲养管理模式和不同粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构影响显著(P0.05),冷季补饲10%精料可显著提高瘤胃菌群丰度和多样性(P<0.05),补饲30%高蛋白水平精料时瘤胃菌群对饲草料消化吸收最佳。本研究结果为青藏高原牦牛的合理饲养提供了数据支撑,也为研发适宜于青藏高原牦牛养殖业的管理模式,减轻放牧场压力,解决草地退化、草畜失衡及保持牦牛养殖业的健康良性发展等问题提供了理论支持。

关键词：牦牛养殖放牧管理农牧结合管理饲粮结构瘤胃微生物 16S rDNA基因高通量测序功能预测

一株牛呼吸道冠状病毒的分离鉴定及部分生物学特征

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3094-3104页

作者：班玛王清陈曦岳怡苏玉蓉岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省阿坝州动物疫病预防控制中心阿坝州624011

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种... 详细信息

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种人盲肠腺癌细胞(HCT-8),分离纯化后,对引起细胞病变的病毒分离株的S和HE基因进行序列测定和系统发育分析,并将病毒分离株接种BALB/c小鼠进行致病性研究。结果显示,成功分离到1株致细胞病变的毒株,经荧光定量PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定为BRCV,蚀斑纯化后计算病毒TCID_(50)为10^(-8.46)·0.1 mL^(-1)。S基因和HE基因序列分析表明两种基因均发生重组事件;S蛋白具有2个独特的氨基酸突变(A33G和A975V),分别位于S1亚基的受体结合域和S2亚基;HE基因具有2个独特的氨基酸突变(L235R和L365F),分别位于凝集素域和近膜端域。分离株对4周龄BALB/c小鼠具有较强的致病性,能够引起小鼠呼吸加快和腹泻等临床症状,剖检和组织病理学显示肺和肠道出血,病毒主要分布在肺和肠组织,以肺组织中病毒载量最高。本研究首次在国内肉牛中分离到1株BRCV,S和HE基因分子有独特氨基酸突变,成功建立了小鼠感染模型,为进一步研究BCoV的生物学特性和遗传进化提供了参考。

关键词：牛呼吸道冠状病毒 S基因 HE基因小鼠致病性

2018-2023年西昌市某奶牛场布鲁氏菌病血清学监测分析

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山东畜牧兽医 2024年第4期45卷 18-19,22页

作者：陈世云刘凤尾彭艳伶张涛周志华四川省西昌市农业农村局四川西昌615600 四川省凉山州畜牧兽医科学研究所四川西昌西昌攀西乳业有限责任公司四川西昌

为掌握西昌市某奶牛场布鲁氏菌病流行情况,做好奶牛布鲁氏菌病的防治工作,2018-2023年连续六年对该奶牛场采集血清样本,累计采集2201份血样,经西昌市动物疫病预防控制中心兽医实验室采用虎红平板凝集试验(RBT)、间接酶联免疫吸附试验(iE... 详细信息

为掌握西昌市某奶牛场布鲁氏菌病流行情况,做好奶牛布鲁氏菌病的防治工作,2018-2023年连续六年对该奶牛场采集血清样本,累计采集2201份血样,经西昌市动物疫病预防控制中心兽医实验室采用虎红平板凝集试验(RBT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)进行初筛;运用试管凝集试验(SAT)、竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)进行复核。结果显示,2018-2023年虎红平板凝集试验初筛阳性数分别为5、6、4、8、7、0,初筛阳性率分别为1.5%、1.89%、1.25%、1.96%、1.98%、0;间接酶联免疫吸附试验初筛阳性数分别为4、4、3、8、5、0,初筛阳性率分别为1.20%、1.26%、0.93%、1.96%、1.41%、0;试管凝集(SAT)试验与竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)的复核结果显示,2018、2019年阳性数分别为2和1,阳性数占总群分别为0.60%和0.32%,2020-2023连续四年均为阴性。针对奶牛布鲁氏菌病流行特点及血清学检测结果,制定符合该牛场布鲁氏菌病净化的相应防控措施,以期预防控制奶牛布鲁氏菌病的发生,能够及时发现并淘汰病畜,为奶牛健康生产提供有效保障。

关键词：奶牛布鲁氏菌病血清学监测

四种藏兽医药用植物和屎肠球菌联用对大肠杆菌E6生物被膜的影响

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 12-20页

作者：谭敏杨丹娇汪露黄志宏陈朝喜西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所康定626000

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯... 详细信息

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚)、屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄西林和磺胺甲噁唑)联合对10株多重耐药大肠杆菌(E1-E10)杀菌活性,以探讨不同药物组合对E6生物被膜的清除作用。实验结果显示:152株大肠杆菌多表现为中等成膜能力和无成膜能力表型,对氯霉素、磺胺二甲嘧啶、土霉素、氨苄西林、磺胺甲噁唑的耐药率均高于90%,对二氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻呋、妥布霉素和头孢曲松的耐药率均低于50%,其中阿米卡星的敏感率最高,耐药率仅为19.90%;马蹄黄甲醇提取物、偏翅唐松草乙酸乙酯提取物、华丽龙胆甲醇提取物和岩生忍冬乙酸乙酯提取物、屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物对E1~E10的MIC范围分别为3.93~15.63、3.93~31.52,7.81~15.63、7.81~31.52、0.42~13.38和0.45~3.63 mg/mL;四种藏兽医药用植物不同提取部位和屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗菌药物分别呈现不同的联合作用;在MIC浓度下,药物联合对E6表现出较强的生物被膜清除能力,其中岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联用对E6生物被膜的抑制率高于其他组合,岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取部位与土霉素联用的抑制率分别为48.92%、42.58%,与氨苄西林联用的抑制率分别为48.58%、47.84%。选用的四种藏兽医药用植物、益生菌和抗菌药物联合应用在一定程度上能够解决本研究藏猪和藏鸡源大肠杆菌耐药性和生物被膜形成等问题。

关键词：藏兽医药用植物生物被膜形成能力多重耐药性耐药谱型

饲粮粗蛋白质水平对妊娠期云南半细毛羊养分表观消化率的影响

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中国饲料 2024年第19期 81-89页

作者：付斌龙赵小琪倪晓君旦增白吉薛白李卫娟权国波云南省畜牧兽医科学院云南昆明650224 四川农业大学动物营养研究所四川成都611130

为研究饲粮粗蛋白质(CP)水平对妊娠期云南半细毛羊养分表观消化率的影响,试验选取50只体况良好、年龄一致、配种日期相同、体重为(46.52±4.58)kg的经产2胎妊娠期云南半细毛羊,随机分为5组,每组10个重复,每个重复1只羊。从妊娠第46天开... 详细信息

为研究饲粮粗蛋白质(CP)水平对妊娠期云南半细毛羊养分表观消化率的影响,试验选取50只体况良好、年龄一致、配种日期相同、体重为(46.52±4.58)kg的经产2胎妊娠期云南半细毛羊,随机分为5组,每组10个重复,每个重复1只羊。从妊娠第46天开始,进行预试期14 d和正试期90 d的饲养试验。在妊娠前期(正试期第1~30天)和中期(正试期第31~60天)对应的饲粮CP水平为6.65%(1组)、9.02%(2组)、10.97%(3组)、12.43%(4组)和13.95%(5组),妊娠后期(正试期第61~90天)对应的饲粮CP水平为6.31%(1组)、7.77%(2组)、10.47%(3组)、12.69%(4组)和15.25%(5组),在正试期第11~15天、第41~45天、第71~75天,分别从各组选5只试验羊开展为期5 d的消化代谢试验。结果表明:(1)在妊娠前期和中期,除第1组外,其余4个组干物质(DM)表观消化率无显著差异(P>0.05),在妊娠后期,第3组、第5组DM表观消化率较第1组分别提高了9.15%和7.25%(P0.05)。(6)在妊娠前期,第2、3、4组的总能(GE)表观消化率较第5组分别提高了3.35%、2.90%和2.10%(P0.05)。综上所述,妊娠前、中、后三个时期,云南半细毛羊饲粮CP水平分别为10.97%、12.43%和15.25%时,饲粮N表观消化率最高,饲粮CP水平对Ca、P表观消化率无影响。

关键词：云南半细毛羊妊娠期蛋白质养分表观消化率

鸡血藤提取物对藏鸡精子低温及冷冻保存效果的研究

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中国畜牧杂志 2024年第5期60卷 219-224页

作者：赵特郭玉平措李键李志雄吴锦波熊燕西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室四川成都610041 山南市畜牧兽医总站西藏山南856000 阿坝藏族羌族自治州畜牧科学技术研究所四川阿坝州624402

为探究鸡血藤提取物对藏鸡精液低温及冷冻保存的作用,本实验采集健康的25周龄藏鸡精液,在精液中添加浓度为0.01、0.03、0.05、0.1 mg/mL的鸡血藤提取物进行低温与冷冻保存,对照组用不含鸡血藤提取物的稀释液稀释,检测保存后精子的活率... 详细信息

为探究鸡血藤提取物对藏鸡精液低温及冷冻保存的作用,本实验采集健康的25周龄藏鸡精液,在精液中添加浓度为0.01、0.03、0.05、0.1 mg/mL的鸡血藤提取物进行低温与冷冻保存,对照组用不含鸡血藤提取物的稀释液稀释,检测保存后精子的活率、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等指标。结果表明:在4℃保存条件下,与对照组相比,添加终浓度为0.01mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高保存24、48h时的精子活率、精液中SOD活力,显著降低精液中MDA含量。在精液冷冻保存中,与对照组相比,添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高解冻后精子活率、精液中SOD活力,而显著降低精液MDA含量。本实验结果证明在藏鸡精液低温或冷冻保存时添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可有效提升精子质量。

关键词：鸡血藤提取物藏鸡冷冻保存低温保存

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