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免疫佐剂分子CTB基因的克隆与表达

生物医学工程学杂志 2004年第2期21卷 255-258页

作者：王涛陈建平张雷王玉芳马莹四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041

我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、We... 详细信息

我们采用聚合酶链式反应从霍乱弧菌 5 6 9B和 M0 4 5中扩增得到霍乱弧菌 B亚基基因 ,导入载体p UC18,构建重组质粒 p CTB并转化大肠杆菌 JM10 9,并用限制性酶切分析、聚合酶链式反应、序列分析、硫酸十二烷酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹进行鉴定。实验结果表明我们成功地扩增出 376 bp的霍乱弧菌 B亚基基因 ;构建免疫佐剂分子的重组质粒 p CTB;并在原核系统中表达出 12 KD的霍乱弧菌 B亚基抗原区带。

关键词：免疫佐剂 CTB基因克隆技术基因表达聚合酶链式反应

人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用

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中国应用生理学杂志 2005年第4期21卷 397-400,i0010页

作者：张承武李自成李丽郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室四川成都610041

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据。方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起... 详细信息

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据。方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组。动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用。结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加。结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用。

关键词：神经营养素-6 运动神经元逆行溃变保护

人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达

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生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 577-583页

作者：王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041 四川大学华西第二医院成都610041

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱... 详细信息

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.

关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

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四川大学学报（医学版） 2009年第5期40卷 784-786,802页

作者：毛淑华姬玲玲刘洪徐一洲黄煌黄英易成四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西医院腹部肿瘤科

目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接... 详细信息

目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接。电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌。厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24h,MTT比色法测定细胞存活率。结果PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达。与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01)。结论成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖。

关键词：婴儿双歧杆菌抗血管生成血管内皮生长因子(VEGF) 可溶性血管内皮生长因子受体 (sKDR) 血管内皮细胞

胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体功能的影响

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生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 594-598页

作者：刘皓刘秉文李强四川大学华西基础医学与法医学院载脂蛋白研究室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院同位素室成都610041

为寻求一种可替代人肝细胞研究载脂蛋白 (apolipoprotein ,apo)CⅢ受体的生理模型 ,并探讨apoCⅢ受体的生理功能及其在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用 ,首先以12 5I标记的人apoCⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法观察了人肝癌... 详细信息

为寻求一种可替代人肝细胞研究载脂蛋白 (apolipoprotein ,apo)CⅢ受体的生理模型 ,并探讨apoCⅢ受体的生理功能及其在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用 ,首先以12 5I标记的人apoCⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法观察了人肝癌细胞系HepG2细胞是否有apoCⅢ受体存在 .结果证实HepG2细胞上存在高亲和力的、可饱和的、特异的apoCⅢ受体结合位点 ,其受体的亲和力 (Kd)和apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)分别为(9 5 3± 1 0 3)× 10 -9mol/L和 (3 2 8± 0 31) μg/ g .随后又分别研究了胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞apoCⅢ受体功能的影响 ,结果表明 :胰岛素可使HepG2细胞apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)显著增加 ,但对受体的亲和力 (Kd)无影响 ;胰高血糖素可使HepG2细胞apoCⅢ受体亲和力显著下降 (即Kd 值升高 ) ,对受体的结合容量无影响 .

关键词：胰岛素胰高血糖素 HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体

L-精氨酸诱导急性胰腺炎小鼠肺损伤的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第6期35卷 839-842页

作者：赵秋玲黄承钰黄英王俊芳刘静四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室四川大学基础医学与法医学院病理生理学教研室

目的　建立大剂量 L-精氨酸诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,并探讨 TNF- α和 ICAM- 1对该模型小鼠肺损伤的作用。方法　给胰腺炎组小鼠腹腔注射 L-精氨酸 (2 g/ kg) ,间隔 1h后同量再注射 1次 ,末次注射后 12 h采用比色法检测小... 详细信息

目的　建立大剂量 L-精氨酸诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,并探讨 TNF- α和 ICAM- 1对该模型小鼠肺损伤的作用。方法　给胰腺炎组小鼠腹腔注射 L-精氨酸 (2 g/ kg) ,间隔 1h后同量再注射 1次 ,末次注射后 12 h采用比色法检测小鼠血清淀粉酶活性、放射免疫法测定肺组织 TNF- α的含量 ;2 4 h观察胰腺和肺组织病理变化并采用免疫组织化学染色法检测肺组织 ICAM- 1的蛋白表达。结果　胰腺炎组小鼠血清淀粉酶活性、肺组织 TNF- α的含量、ICAM- 1的表达均高于对照组 ,且差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;胰腺组织和肺组织 HE染色可见典型的炎性改变。结论　大剂量 L-精氨酸可成功诱导急性胰腺炎并发肺损伤的小鼠模型 ,TNF- α和 ICAM- 1可能参与了 L-精氨酸诱导的 AP小鼠的肺损伤机制。

关键词： L-精氨酸急性胰腺炎肺损伤细胞因子动物模型肿瘤坏死因子细胞间粘附分子1

性激素对血红素氧化酶在大鼠前列腺腹侧叶表达的影响

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生理学报 2004年第1期56卷 54-59页

作者：田坚郑煜杨春四川大学华西基础医学与法医学院生理教研室成都610044 四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室成都610044

血红素氧化酶(heme oxygenase,HO)是产生内源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)的限速酶,最近发现内源性CO在调节平滑肌张力方面起重要作用。而人的良性前列腺增生(benign prostates hyperplasia,BPH)所致的膀胱出口梗阻与前列腺平滑肌张... 详细信息

血红素氧化酶(heme oxygenase,HO)是产生内源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)的限速酶,最近发现内源性CO在调节平滑肌张力方面起重要作用。而人的良性前列腺增生(benign prostates hyperplasia,BPH)所致的膀胱出口梗阻与前列腺平滑肌张力有密切关系,但还不清楚内源性HO/CO系统是否介导了前列腺平滑肌的活动。为了观察性激素对大鼠前列腺腹侧叶中血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和血红素氧化酶-2(heme oxygenase-2,HO-2)基因表达的影响,我们采用睾丸切除术建立雄性SD大鼠去势模型,用RT-PCR方法观察HO-1和HO-2的转录水平,应用免疫组织化学结合图像分析技术,观察去势、外源性雄激素和雌激素对前列腺腹侧叶中HO—1和HO-2蛋白水平的影响。结果表明,HO-1和HO-2在正常大鼠前列腺腹侧叶中都有表达,腺上皮细胞和纤维平滑肌间质呈现HO-1的免疫活性,HO-2的免疫染色仅在腺上皮细胞内检测到;去势组HO-1的mRNA和蛋白表达水平显著低于正常对照组(P0.05)。这些结果提示,性激素对HO-1有诱导作用,但对HO-2无明显的影响,因此推测一氧化碳-血红素氧化酶(CO—HO)?

关键词：前列腺血红素氧化酶去势性激素

刺激面神经核对前包钦格复合体呼吸神经元放电活动的影响及其递质机制

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生理学报 2004年第6期56卷 665-670页

作者：严亨秀张承武郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理教研室成都610041

实验选用健康成年SD 大鼠,观察电刺激面神经核对前包钦格复合体(pre-B?tzinger complex, PBC)呼吸神经元(RNs)放电活动的影响,并观察微电泳 6- 氰基 -7- 硝基喹喔啉 -2,3- 二酮(CNQX)、荷包牡丹碱(BIC)、士的宁(Stry)和阿托品(Atr)对电... 详细信息

实验选用健康成年SD 大鼠,观察电刺激面神经核对前包钦格复合体(pre-B?tzinger complex, PBC)呼吸神经元(RNs)放电活动的影响,并观察微电泳 6- 氰基 -7- 硝基喹喔啉 -2,3- 二酮(CNQX)、荷包牡丹碱(BIC)、士的宁(Stry)和阿托品(Atr)对电刺激面神经核引起的PBC RNs 放电变化的拮抗效应,以进一步探讨面神经核是否参与呼吸调节及其可能的神经机制。在12 只面运动神经元逆行溃变大鼠同侧 PBC 内共记录到各类 RNs116 个,电刺激溃变侧面神经核时,前吸气(Pre-I)神经元(24/26 个)和吸气 ( I ) 神经元(30 /35 个)主要表现为兴奋,呼气( E )神经元(20 / 22 个)和吸气 - 呼气(I-E)跨时相神经元(28 / 33 个)表现为抑制。CNQX 可完全或部分拮抗电刺激面神经核对Pre-I(18 / 24) 和I(23 /27)神经元的兴奋效应; Stry可拮抗电刺激面神经核对Pre-I(12/18) 和I(14 /23)神经元的瞬时抑制效应以及对I-E(20/28)和E(9 /16)神经元的抑制效应;BIC 可拮抗电刺激面神经核对I-E(22 / 25)和E(9 / 9)神经元的抑制效应;微电泳Atr 对各类RNs 的放电变化无明显作用。这些结果表明,面神经核非运动神经元可能通过向 PBC 的纤维投射,以 Glu、GABA和 Gly 为神经递质或调质,调节 PBC RNs 的活动,从而参与对呼吸运动的调节。

关键词：面神经核非运动神经元前包钦格复合体呼吸神经元放电递质

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BSO对内皮细胞氧化还原状态的影响

中国药理学通报 2005年第4期21卷 450-453页

作者：刘漪沦王树人丁怡王秋林吴琛珩乔小蓉四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室四川大学分析测试中心四川成都610041

目的　探讨人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells, HUVEC)在慢性髓性白血病细胞株K562细胞条件培养基作用下氧化还原状态的变化与其增殖活性间的关系,观察谷胱甘肽合成抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(buthioninesulfoxine, B... 详细信息

目的　探讨人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells, HUVEC)在慢性髓性白血病细胞株K562细胞条件培养基作用下氧化还原状态的变化与其增殖活性间的关系,观察谷胱甘肽合成抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(buthioninesulfoxine, BSO)在上述条件下对HUVECs的作用,为探索相应的抗肿瘤血管生成治疗策略提供新思路。方法　用K562细胞条件培养基、谷胱甘肽合成抑制剂共同或单独处理HUVEC,检测HUVEC细胞内氧化还原状态以及细胞活力的改变。结果　K562细胞条件培养基明显促进内皮细胞的增殖,并促进内皮细胞氧化型与还原型谷胱甘肽(GSSG与GSH)、辅酶Ⅱ(NADP+与NADPH)两对氧化和还原性物质同时增高,但GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值未变。BSO显示出对HUVEC生长的明显抑制,引起HUVEC中GSH、NADPH含量明显降低、GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值升高;在K562细胞条件培养基的同时作用下,BSO对HUVEC的生长抑制作用增强, 使细胞内GSSG/GSH、NADP+ /NADPH比值进一步提高。结论　慢性髓性白血病细胞条件培养基使得血管内皮细胞对BSO的生长抑制作用更加敏感,其机制与内皮细胞氧化还原状态的改变密切相关。

关键词：氧化还原状态谷胱甘肽合成抑制剂人脐静脉血管内皮细胞白血病,髓性,慢性条件培养基