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衰老清除药物对规模化长期培养中牙髓干细胞增殖和分化功能的影响

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中华口腔医学杂志 2024年第5期59卷 444-452页

作者：王冠玉廖立田卫东四川大学华西口腔医院创伤整形外科、口腔疾病防治全国重点实验室、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心、教育部口腔转化医学工程研究中心成都610041

目的探讨间断清除衰老细胞对规模化长期培养中牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)增殖和分化功能的影响,探索维持体外培养DPSC年轻状态的方法。方法从四川大学华西口腔医院口腔颌面外科提供的因正畸或阻生拔除的健康恒牙中提取人DP... 详细信息

目的探讨间断清除衰老细胞对规模化长期培养中牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)增殖和分化功能的影响,探索维持体外培养DPSC年轻状态的方法。方法从四川大学华西口腔医院口腔颌面外科提供的因正畸或阻生拔除的健康恒牙中提取人DPSC,模拟DPSC体外规模化长期培养过程,并对年轻DPSC(第5代,P5)、衰老DPSC(第25代,P25)进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色、集落形成实验、成骨分化诱导茜素染色实验。利用细胞衰老β-半乳糖苷酶染色比较5种衰老清除药物[那维克拉(ABT-263)、姜黄素、达沙替尼、非瑟酮、槲皮素]的清除效率,选择清除效率最高的药物进行后续实验。选取衰老细胞占比开始显著增多的代数,给予间隔3代、累计3次的衰老清除药物处理,对对照组和药物处理组细胞进行荧光细胞衰老β-半乳糖苷酶染色、实时荧光定量PCR(qPCR)、集落形成实验、细胞划痕实验、成骨诱导茜素红染色实验。体内验证使用裸鼠皮下异位成骨实验,对移植物进行HE染色、碱性磷酸酶(ALP)免疫组织化学染色。结果衰老细胞占比随培养周期延长而增加,相比年轻DPSC,衰老DPSC的增殖和成骨分化能力减退(P实验结果显示,药物处理组DPSC移植体内后相对新生骨质面积[(2.36±0.48)%]显著大于对照组[(1.00±0.46)%](P<0.05)。结论ABT-263可有效清除规模化长期培养DPSC衰老细胞,培养过程中不断给予的ABT-263处理可维持规模化长期培养DPSC的体内及体外增殖、分化功能。

关键词：牙髓干细胞细胞衰老细胞培养技术衰老清除药物

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糖胺聚糖在骨组织工程中的应用进展

医学综述 2024年第16期30卷 1937-1943页

作者：何艺媛颜洁四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041

骨组织缺损是目前最常见的医疗疾病之一。自体骨移植和同种异体骨移植等存在供体不足、移植物免疫反应及移植部位感染等不足,而骨组织工程(BTE)可通过合适的骨替代支架克服目前骨组织重建方法的局限性。骨支架材料应具有生物相容性、生... 详细信息

骨组织缺损是目前最常见的医疗疾病之一。自体骨移植和同种异体骨移植等存在供体不足、移植物免疫反应及移植部位感染等不足,而骨组织工程(BTE)可通过合适的骨替代支架克服目前骨组织重建方法的局限性。骨支架材料应具有生物相容性、生物可再生性和仿生性。天然来源的糖胺聚糖(GAG)可模拟哺乳动物细胞外基质成分,具有稳定和持续释放生长因子、可调的孔隙率、磷酸钙成核位点、一定的黏弹性和保水性。因此,GAG具有调节生物矿化、稳定生长因子、促进细胞黏附及细胞信号转导等功能,可作为一种独特的生物材料广泛用于BTE。

关键词：糖胺聚糖骨组织工程生物矿化生长因子细胞外基质

胎儿附属物来源间充质干细胞应用于新生儿缺氧缺血性脑病的研究

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儿科药学杂志 2024年第5期30卷 62-64,I0001,I0002页

作者：熊小芸陈娟四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041

与成人组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)相比,胎儿附属物来源间充质干细胞具有不可忽视的优势,如容易获得、无侵袭性、感染风险低、年龄相关性突变率低等。以脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cel... 详细信息

与成人组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)相比,胎儿附属物来源间充质干细胞具有不可忽视的优势,如容易获得、无侵袭性、感染风险低、年龄相关性突变率低等。以脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC?MSCs)为代表的胎儿附属来源的MSCs具有来源丰富、容易提取、倍增时间短、免疫原性低、移植后长时间存活等多种优点,可以根据生物医学应用的要求,分化成各种细胞谱系,已广泛应用于临床各系统疾病。新生儿缺氧缺血性脑病(neonatal hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)是围生期窒息导致的缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD),是新生儿死亡和遗留神经系统后遗症的主要原因。目前的治疗方案除全身支持治疗外,尚无更有效的治疗方式。

关键词：新生儿缺氧缺血性脑病神经系统后遗症胎儿附属物脐带间充质干细胞年龄相关性感染风险新生儿死亡生物医学应用

孟鲁司特钠联合布地奈德通过p38MAPK通路抑制哮喘炎性反应

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四川生理科学杂志 2024年第1期46卷 1-4,8页

作者：王一迪朱旭阳辛子敏卓馨江舟汪宇辉成姝婷四川大学华西药学院四川成都610041 四川大学华西第二医院四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程研究室四川成都610041 国家卫生健康委员会时间生物学重点实验室(四川大学) 四川成都610041

目的:探究孟鲁司特钠(Montelukast Sodium)联合布地奈德(Budesonide)治疗支气管哮喘(Bronchial Asthma,BA)的效果及机制。方法:选取雄性BALB/C小鼠24只,随机分为空白组、哮喘组、哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组,... 详细信息

目的:探究孟鲁司特钠(Montelukast Sodium)联合布地奈德(Budesonide)治疗支气管哮喘(Bronchial Asthma,BA)的效果及机制。方法:选取雄性BALB/C小鼠24只,随机分为空白组、哮喘组、哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组,空白组和哮喘组各6只,其余组各4只,除空白组外,其余各组小鼠均按照卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)法构建小鼠哮喘模型。建模成功后,对各组小鼠进行相应干预。给药干预结束后,苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察比较各组小鼠气道组织形态学变化、酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent assay,ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-5(Interleukin-5,IL-5)水平、以及利用蛋白质印迹法(Western blot,WB)肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路蛋白表达水平。结果:与空白组相比,哮喘组、哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组小鼠气道均出现黏膜组织增厚和明显的炎性细胞浸润,但联合给药组最轻微;与哮喘组相比,哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组小鼠肺泡灌洗液IL-5水平均明显降低(P<0.05);而与哮喘+孟鲁司特钠组和哮喘+布地奈德组相比,哮喘+联合给药组小鼠肺泡灌洗液IL-5水平明显降低(P<0.05);哮喘+联合给药组小鼠肺组织中的磷酸化-p38丝裂原活化蛋白激酶(Phospho-p38 MAPK,p-p38MAPK)水平明显低于哮喘+孟鲁司特钠组(P<0.05)。结论:联合给药能够有效改善哮喘的炎性反应的发生及发展,其机制可能与抑制体内p38MAPK磷酸化激活有关。

关键词：孟鲁司特钠布地奈德联合给药哮喘 p38MAPK

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漫步牙槽光辉岁月勇踏实践创新征途

中华口腔医学杂志 2024年第4期59卷 301-311页

作者：王一名薛洋赵吉宏潘剑邹多宏崔念晖张伟王杞章李志政周驭穹胡开进第四军医大学口腔医院口腔外科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病临床医学研究中心西安710032 武汉大学口腔医(学)院口腔外科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、口腔生物医学教育部重点实验室、口腔医学湖北省重点实验室武汉430079 四川大学华西口腔医院口腔颌面外科、口腔疾病防治全国重点实验室、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科、上海交通大学口腔医学院、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心、上海市口腔医学重点实验室、上海市口腔医学研究所上海200011 北京大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心、口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心、口腔数字医学北京市重点实验室北京100081 西安医学院口腔医学院西安医学院第三附属医院西安710065

本文总结和梳理《中华口腔医学杂志》等发表的相关文章并结合医史探询,系统总结了中国牙槽外科的发展历程。初始创建阶段(1935—1952年)是中国牙槽外科发展的起点,尽管受到战争的影响,但为后来的研究和实践奠定了基础;起步发展阶段(1953... 详细信息

本文总结和梳理《中华口腔医学杂志》等发表的相关文章并结合医史探询,系统总结了中国牙槽外科的发展历程。初始创建阶段(1935—1952年)是中国牙槽外科发展的起点,尽管受到战争的影响,但为后来的研究和实践奠定了基础;起步发展阶段(1953—1966年),《中华口腔医学杂志》的创刊促进了牙槽外科的发展,研究集中在拔牙方法和拔牙并发症,牙移植和修复前外科逐渐起步;停滞不前阶段(1967—1977年),由于国际交流的中断,牙槽外科的发展几乎停滞;奋起直追阶段(1978—1985年),改革开放后,牙槽外科学者开始努力追赶前十年的停滞,虽取得了一定的进展,但无显著创新成果诞生;科学发展阶段(1986—2010年)中,随着实验医学的兴起,中国现代牙槽外科的临床研究、基础实验、论文撰写都开始进入科学规范的时代;探索创新阶段(2011—2023年)是当前的发展阶段,中国牙槽外科也迎来了发展的最高峰,在技术、临床、基础领域均取得了巨大的进步,逐步达到甚至赶超国际先进水平。回顾我国牙槽外科从无到有、从弱到强的学科发展历程,可见我国老一辈牙槽外科学者的智慧和汗水。然而,当下也面临着新的挑战和问题,如技术标准化、临床实践的推广和人才培养等,这需要当代牙槽外科人砥砺前行。

关键词：期刊论文牙槽外科发展历程拔牙牙移植修复前外科

滇南小耳猪自体跟腱移植前交叉韧带重建模型的构建

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中国组织工程研究 2024年第20期28卷 3157-3163页

作者：熊波涵余洋郑礼玲杨腾云卢晓君王旭李开炜余鸿李雅娟董开颜张瑶璋刘津瑞谷梓铭胡必庚李彦林昆明医科大学第一附属医院运动医学科云南省昆明市650032 四川省达州市渠县中医院检验科四川省渠县653200 昆明医科大学第二附属医院骨科云南省昆明市650032 四川大学华西医院心内科四川省成都市610000

背景:目前关于前交叉韧带重建术的大动物模型仍较为缺乏,而滇南小耳猪作为实验动物广泛用于其他学科基础研究,但仍未见将其用于前交叉韧带重建造模的相关报道。目的:建立自体跟腱移植前交叉韧带重建的大型动物滇南小耳猪模型。方法:选... 详细信息

背景:目前关于前交叉韧带重建术的大动物模型仍较为缺乏,而滇南小耳猪作为实验动物广泛用于其他学科基础研究,但仍未见将其用于前交叉韧带重建造模的相关报道。目的:建立自体跟腱移植前交叉韧带重建的大型动物滇南小耳猪模型。方法:选取20只成年雌性滇南小耳猪,随机平均分为自体跟腱组和假手术组。自体跟腱组取小耳猪自体跟腱作为移植物行右膝关节前交叉韧带重建术,假手术组小耳猪在右膝采取类似的操作,但对前交叉韧带不行任何处理。术前及术后12个月,分别观察小耳猪一般情况;对韧带及移植物进行大体观察及MAS评分;苏木精-伊红染色观察韧带形态学特点;免疫组化评估Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原染色与排列情况;透射电镜观察韧带胶原纤维的类型、大小、直径、比例和分布。结果与结论:①所有动物饮食活动均正常,伤口愈合良好,无明显炎症反应,局部无化脓性感染,精神及尿便情况较术前无明显改变;膝关节重建的交叉韧带连续性完整,关节无僵硬、活动度正常,前抽屉及Lachman试验均阴性。②移植物大体观察:术后12个月关节腔内移植物位置良好,完整性尚可,张力较明显,韧带色泽接近原有前交叉韧带,表面滑膜覆盖较为完整。③自体跟腱组术后12个月关节腔内韧带大部为MASⅠ型,少数为MASⅡ型;假手术组关节腔内韧带为MASⅠ型。④苏木精-伊红染色提示,术后12个月,自体跟腱组胶原纤维已开始出现束状、同向、均匀排列,同向波纹已较为明显,细胞核以线形或纺锤形为主,与假手术组正常前交叉韧带组织较相似。⑤免疫组化提示,术后12个月,自体跟腱组重建的前交叉韧带中有较大量Ⅰ型胶原表达,Ⅲ型胶原表达明显较少;两组Ⅰ型、Ⅲ型胶原染色程度相近。⑥透射电镜显示,术后12个月,自体跟腱组重建前交叉韧带中胶原纤维直径、排列、密度与原有前交叉韧带相近,说明术后12个月自体跟腱组已基本完成韧带重塑过程。⑦综合评估,实验成功建立了自体跟腱移植前交叉韧带重建的大型动物滇南小耳猪模型,具有良好的形态学、组织学及超微结构结果。

关键词：前交叉韧带动物模型免疫组化透射电镜超微结构韧带化

两种冰冻切片包埋剂在解吸电喷雾电离质谱成像分析检测中的性能比较

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四川大学学报（医学版） 2022年第2期53卷 303-309页

作者：陈红李信陈菲李丽叶丰步宏龚萌四川大学华西医院临床病理研究所成都610041 四川大学华西医院国家卫生健康委员会移植工程与移植免疫重点实验室成都610041 四川大学华西医院华西-华盛顿线粒体与代谢研究中心成都610041 四川大学华西医院病理科成都610041

目的评估经羧甲基纤维素(carboxylmethyl cellulose,CMC)包埋、最佳切割温度(optimal cutting temperature,OCT)化合物包埋及OCT清洗处理后,对乳腺癌组织样本解吸电喷雾电离质谱成像分析(desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging,DESI-MSI)的潜在影响。方法对同一乳腺癌肿瘤组织,采用直接新鲜冰冻、OCT包埋、CMC包埋、OCT包埋后PBS清洗样本切片并进行DESI-MSI实验。最大强度离子比值用于数据重现性检查,特征离子种类和信号强度用于比较处理方式的影响。结果新鲜冰冻样本连续切片DESI-MSI显示,质量与电荷之比(m/z)为281.25、309.28和279.23的3个离子在肿瘤区域信号检出强度最高,其两两比值变异系数分别为19.61%、20.74%和10.18%。与新鲜冰冻肿瘤组织相比,CMC包埋及OCT包埋后清洗样本检测出的特征离子种类基本无异,而OCT包埋样本检出数目不及新鲜冰冻样本的50%。就信号强度而言,相对新鲜冰冻肿瘤组织,CMC包埋后整体无明显差异,而OCT包埋清洗后大多数特征离子信号强度下降(P<0.05)。结论新鲜冰冻组织和CMC包埋处理样本可用于DESI-MSI常规分析,OCT包埋组织无论是否经PBS清洗,其分析可行性均受到影响。对于体积小、易碎或由于其他问题而需固定的组织切片样本,推荐使用CMC包埋。

关键词： DESI-MSI 乳腺癌新鲜组织 OCT包埋 CMC包埋

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儿童病毒性口炎诊断及治疗的研究进展

国际口腔医学杂志 2024年

作者：蒋思鑫施雯锦罗小波陈谦明口腔疾病防治全国重点实验室国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心中国医学科学院口腔黏膜癌变与防治创新单元四川大学华西口腔医院口腔黏膜病科

病毒感染是一种常见疾病，可带来较重的疾病负担。部分病毒感染好发或早发于口腔黏膜，如不控制可能继发严重的全身症状；因此，早期发现并治疗病毒性口炎，可降低出现严重全身症状的风险。儿童是一个特殊的病毒性口炎患病群体，其口腔... 详细信息

病毒感染是一种常见疾病，可带来较重的疾病负担。部分病毒感染好发或早发于口腔黏膜，如不控制可能继发严重的全身症状；因此，早期发现并治疗病毒性口炎，可降低出现严重全身症状的风险。儿童是一个特殊的病毒性口炎患病群体，其口腔黏膜病毒感染表现呈多样化。儿童病毒性口炎的诊断需综合临床表现、病史和辅助检查；儿童病毒性口炎的治疗主要以全身或局部抗病毒治疗为基础，辅以对症支持治疗；不同类型的病毒性口炎治疗方案存在一定差异；因儿童处于快速生长发育期，免疫系统尚未发育完全，药物代谢能力也有别于成人，因此其治疗与成人有显著差异。关于儿童病毒性口炎的预防，最重要的是养成良好的卫生习惯，部分病毒性口炎可通过接种疫苗进行预防。本文就常见病毒性口炎和部分少见病毒性口炎的儿童患病率、临床表现、诊断、鉴别诊断和治疗进展作一综述。

关键词：儿童病毒性口炎诊断治疗

基于核壳结构微囊构建三维牙髓细胞球及初步体外研究

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口腔生物医学 2024年第2期15卷 75-81,90页

作者：姜明言田卫东谢利口腔疾病防治全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心口腔转化医学教育部工程研究中心口腔再生医学国家地方联合工程实验室四川大学华西口腔医院创伤与整形外科四川成都610041

目的:利用同轴静电液滴技术设计并制备一种用于牙髓干细胞(DPSCs)三维细胞球体构建、培养的核壳微囊。方法:获取临床收集DPSCs并通过流式细胞仪进行细胞鉴定;构建核壳微囊,调节内外相溶液浓度、流速和细胞密度等参数,对比微囊形貌及尺... 详细信息

目的:利用同轴静电液滴技术设计并制备一种用于牙髓干细胞(DPSCs)三维细胞球体构建、培养的核壳微囊。方法:获取临床收集DPSCs并通过流式细胞仪进行细胞鉴定;构建核壳微囊,调节内外相溶液浓度、流速和细胞密度等参数,对比微囊形貌及尺寸筛选最佳制备条件;活/死染色和CCK-8实验检测微囊内的细胞球的细胞活性,免疫荧光染色观察细胞骨架。结果:成功分离培养DPSCs,构建以海藻酸钠(Alg)为壳层和羧甲基纤维素(CMC)为核层的载细胞微囊。当细胞密度为1×108个/mL时,微囊内的DPSCs在24 h内能自发形成直径为(101.93±10.11)μm的单一球体。活/死染色显示培养7 d内细胞存活率未明显降低(P>0.05),CCK-8显示培养4 d时细胞增殖率增加至(114.91±7.70)%(P<0.05),7 d时增长至(169.05±5.29)%(P<0.001)。细胞在微囊内形成致密结构。结论:该方法制备的核壳微囊可以促进DPSCs形成三维细胞球并长期存活。

关键词：细胞球状体同轴静电液滴牙髓干细胞牙髓再生