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结核分枝杆菌联合DNA疫苗初免—BCG加强的免疫效果观察

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第2期24卷 122-125页

作者：高蕾鲍朗郝牧张会东四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室四川成都610041

目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免—BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察。方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS阴性对照组,DNA初免—BCG异源... 详细信息

目的:研究并比较结核分枝杆菌免疫保护性抗原DNA(Ag85A和ESAT-6)疫苗联合免疫,BCG免疫以及联合DNA疫苗初免—BCG加强免疫等不同的免疫策略,诱导免疫应答效果观察。方法:健康雌性BALB/c小鼠24只,随机分成PBS阴性对照组,DNA初免—BCG异源加强组,DNA(Ag85A和ESAT-6)初免DNA同源加强组和BCG阳性对照组,共进行3次免疫,初免2次,最后1次加强,间隔2周1次。PBS组3次均注射PBS溶液;DNA/BCG组以质粒DNA免疫2次,最后1次以BCG加强免疫;DNA/DNA组3次均以质粒DNA进行免疫;BCG组则注射PBS溶液2次后以BCG免疫。末次免疫后4、6、8周分别分离血清测定总IgG水平,同时分离小鼠脾细胞,体外经TB-PPD刺激后进行淋巴细胞增殖实验(XTT法)并测定脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平。结果:DNA/BCG、DNA/DNA、BCG组体外经TB-PPD刺激后均检测到特异性IgG抗体产生,3组平均效价为1∶120、1∶160、1∶80,DNA/DNA组的抗体效价高于另外2组;小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,均能产生特异性淋巴细胞增殖并诱生较强的IFN-γ反应,其中DNA/BCG组IFN-γ的分泌水平高于DNA/DNA组和BCG组(P免疫策略能在小鼠体内诱导较强的特异性细胞免疫反应,产生高水平的IFN-γ。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85A ESAT-6 异源初免-加强免疫

重复经颅磁刺激(rTMS)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制的研究

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航天医学与医学工程 2006年第4期19卷 297-300页

作者：陈登榜刘延友杨波李葳郑航王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院生物医学工程研究室四川成都610041

目的通过大鼠的行为学及海马β1和β2肾上腺素受体m RNA表达,研究重复经颅磁刺激(rT-M S)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制。方法通过比较抑郁症和非抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的表现探讨大鼠的行为学变化;通过RT-PCR半定量法分析其海马... 详细信息

目的通过大鼠的行为学及海马β1和β2肾上腺素受体m RNA表达,研究重复经颅磁刺激(rT-M S)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制。方法通过比较抑郁症和非抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的表现探讨大鼠的行为学变化;通过RT-PCR半定量法分析其海马β1和β2肾上腺素受体m RNA含量的变化。结果抑郁症大鼠海马的β1和β2肾上腺素受体m RNA表达增加;rTM S能够缩短抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的悬浮时间,并减少其海马β1和β2肾上腺素受体m RNA的表达。结论rTM S对抑郁症有明显的治疗作用,且作用机制与海马β1和β2肾上腺素受体表达减少有关。

关键词：重复经颅磁刺激 LH模型强迫游泳实验肾上腺素受体

结核分枝杆菌H37Rv株Rv1494和Rv1495假想蛋白基因的克隆表达

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南方医科大学学报 2007年第1期27卷 15-19页

作者：商正玲鲍朗姚素霞张会东四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室四川成都610041

目的为探索参与调控结核分枝杆菌(MTB)持续性感染的相关分子,对MTBH37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆、表达及Westernblotting鉴定。方法采用Bioedit、Dnaman软件及Pfam数据库对MTBH37Rv株Rv1494、Rv1495基因编码蛋白质的... 详细信息

目的为探索参与调控结核分枝杆菌(MTB)持续性感染的相关分子,对MTBH37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆、表达及Westernblotting鉴定。方法采用Bioedit、Dnaman软件及Pfam数据库对MTBH37Rv株Rv1494、Rv1495基因编码蛋白质的氨基酸组分、蛋白模块以及其与大肠杆菌***的mazEF蛋白家族的同源性进行分析。以H37Rv株基因组为模板,分别对Rv1494、Rv1495基因进行克隆,构建pET32a(+)原核表达质粒,转化BL21宿主菌。重组蛋白经SDS-PAGE电泳分离纯化和Westernblotting鉴定。结果生物信息学分析提示,Rv1494基因、Rv1495基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌***染色体编码的mazEF家族中的抗毒素和毒素具有一定程度的同源性,分别为26%和29.75%;经测序表明原核表达重组质粒构建成功。负载重组质粒的BL21菌经IPTG诱导后可表达出分子大小与预期值相一致的融合蛋白,表达量均可达到菌体总蛋白的60%。重组蛋白经Westernblotting检测出特异性阳性信号。结论首次对MTBH37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆表达,为进一步探讨该基因在参与调控MTB持续性感染过程中的功能奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1494基因 Rv1495基因克隆表达

大黄素对急性坏死性胰腺炎大鼠肺炎性细胞因子的作用(英文)

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航天医学与医学工程 2006年第4期19卷 235-241页

作者：周黎明察雪湘万莉红朱玲匡湘红周雪平蒋俊明王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院生物医学工程系四川成都610041

目的研究大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌)是否能减轻急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织的炎症反应。方法通过胰腺被膜下注射3%牛磺胆酸钠制造大鼠急性坏死性胰腺炎模型,大黄素以灌肠的方式给药,检测在急性坏死性胰腺炎给药后3、6和12h... 详细信息

目的研究大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌)是否能减轻急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织的炎症反应。方法通过胰腺被膜下注射3%牛磺胆酸钠制造大鼠急性坏死性胰腺炎模型,大黄素以灌肠的方式给药,检测在急性坏死性胰腺炎给药后3、6和12h的血浆淀粉酶变化,用半定量RT-PCR方法检测大鼠肺组织IL-1β,IL-6和IL-10的表达,免疫组化方法观察肺内IL-1β转化酶(ICE,又称caspase-1)的改变。结果在未造模组血浆淀粉酶(1611.20±218.72)IU/L。在造模后3、6和12h,急性坏死性胰腺炎模型组(未用大黄素治疗组)血浆淀粉酶分别为(1981.40±56.81)IU/L,(3287.40±612.37)IU/L和(4914.60±746.82)IU/L,与未造模组比较有显著性差异(P免疫组化显示IL-1β转化酶(ICE)在各时间点给药组与未给药组比较其表达减少。结论大黄素对大鼠急性坏死性胰腺炎肺组织炎症反应有一定的抗炎作用,其抗炎作用的机制可能与大黄素下调IL-1β和IL-6mRNA的表达和上调IL-10mRNA的表达有关。

关键词：大黄素急性死性胰腺炎炎症肺炎细胞因子

DNA疫苗激活CTL反应机制及增强DNA疫苗效力的研究进展

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生物医学工程学杂志 2003年第1期20卷 175-179页

作者：邓小玲四川大学华西医学中心基础与法医学院免疫教研室

DNA疫苗相对于以前的疫苗免疫策略有着强大的优势 ,但仍有许多问题待解决 ,尤其是采用哪些有效的方法来增强 DNA免疫的效果 ,是目前研究关注的热点。本文就近年来 DNA疫苗研究中所采用的增强免疫效力的策略作了综述 ,并就 DNA免疫激活 CTL

关键词： DNA疫苗 CTL反应机制细胞毒性T细胞免疫效力

血浆中游离还原型及氧化型谷胱甘肽的荧光测定法

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光谱学与光谱分析 2005年第11期25卷 1834-1838页

作者：王秋林王浩毅丁怡乔小蓉彭克军林霞王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室四川大学分析测试中心四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医病理教研室四川成都610041

文章建立了快速、可同时检测血浆中游离的还原型和氧化型谷胱甘肽(即GSH和GSSG)的方法,并评价了血浆中GSH/GSSG的氧化还原状态。利用二硫苏糖醇将GSSG还原成两分子的GSH,使GSH在pH8.0时与邻苯二甲醛(OPA)结合生成荧光产物GSH-OPA,用荧... 详细信息

文章建立了快速、可同时检测血浆中游离的还原型和氧化型谷胱甘肽(即GSH和GSSG)的方法,并评价了血浆中GSH/GSSG的氧化还原状态。利用二硫苏糖醇将GSSG还原成两分子的GSH,使GSH在pH8.0时与邻苯二甲醛(OPA)结合生成荧光产物GSH-OPA,用荧光分光光度仪测定其荧光值,从而对GSH和GSSG进行定量分析。并运用此方法测量青年健康志愿者静脉血中的游离GSH和GSSG。该法最低可检测出测定管中11.4 pmol.L-1GSH以及5.7 pmol.L-1GSSG。测量GSH批内和批间变异系数分别4.6%和3.9%,GSSG批内和批间变异系数分别为3.5%和4.1%,GSH,GSSG加标准品后的回收率分别为(99.77±5.70)%和(99.28±4.73)%。测定健康青年志愿者血浆中游离GSH,GSSG的含量分别为(16.5±2.4)***-1和(1.7±0.35)***-1。

关键词：血浆 GSH GSSG 荧光测定法

hPer_1bHLH-PAS结构域酵母双杂交系统的构建

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航天医学与医学工程 2004年第6期17卷 461-463页

作者：李英明汪宇辉胡丽娟刘延友王跃 王正荣四川大学华西医学中心基础与法医学院生物医学工程研究室四川成都610041

目的构建hPer1bHLH PAS结构域的酵母双杂交系统 ,以寻找与hPer1相互作用的新蛋白。方法构建pGBKT7 hPer1bHLH PAS重组诱饵质粒及 pGADT7 Rec 脑cDNA文库质粒 ;将两种质粒顺序转染至酵母细胞AH1 0 9中 ,进行营养缺陷筛选阳性克隆株。结... 详细信息

目的构建hPer1bHLH PAS结构域的酵母双杂交系统 ,以寻找与hPer1相互作用的新蛋白。方法构建pGBKT7 hPer1bHLH PAS重组诱饵质粒及 pGADT7 Rec 脑cDNA文库质粒 ;将两种质粒顺序转染至酵母细胞AH1 0 9中 ,进行营养缺陷筛选阳性克隆株。结果经酶切和基因测序鉴定 ,证实重组诱饵质粒 pGBKT7 hPer1bHLH PAS构建成功。脑cDNA文库转化效率为 1 .2× 1 0 6/3μgpGADT7 Rec。结论　酵母双杂交文库筛选得到 2 4个阳性克隆。这为寻找脑组织中与hPer1相互作用的未知蛋白奠定了基础。

关键词：基因重组 Per1 重组诱饵质粒 cDNA文库酵母双杂交

节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

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航天医学与医学工程 2006年第4期19卷 257-259页

作者：李颖朱彬王跃锜华慧何垠波王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院四川成都610041 四川大学华西医院肿瘤中心放疗科四川成都610041

目的探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6g liom a ce lls),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克... 详细信息

目的探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6g liom a ce lls),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。

关键词：时间生物学近日节律 Per2基因转染 C6胶质瘤细胞细胞凋亡放射敏感性

hper1干扰质粒的构建及hper1功能的初步研究

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航天医学与医学工程 2006年第2期19卷 125-128页

作者：叶珊汪宇辉胡丽娟刘延友王晓佳王正荣四川大学华西医学中心基础与法医学院生物医学工程研究室四川成都610041

目的构建高效的针对hper1(人类period1基因)的干扰质粒,并对hper1的功能进行初步研究。方法选择4个hper1的干扰位点,根据位点序列合成构建4个pTER-hper1干扰质粒,并通过测序验证。将4种干扰质粒分别转染至SH-SY5Y细胞,经马血清休克诱导... 详细信息

目的构建高效的针对hper1(人类period1基因)的干扰质粒,并对hper1的功能进行初步研究。方法选择4个hper1的干扰位点,根据位点序列合成构建4个pTER-hper1干扰质粒,并通过测序验证。将4种干扰质粒分别转染至SH-SY5Y细胞,经马血清休克诱导后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测hper1mRNA的表达,鉴定干扰效果。提取细胞总蛋白,Western Blot检测P-p44/42丝裂原活化蛋白激酶(mitagen-actinated pratein kinase,MAPK)表达。结果RT-PCR鉴定显示pTER-hper1-Ⅱ干扰质粒干扰效率最高,hper1表达量降低84.9%。Western Blot显示hper1表达受抑制后,P-p44/42MAPK水平升高。结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的pTER-hper1干扰质粒,为进一步研究hper1的功能奠定了基础,并发现hper1对MAPK通路具有负相调控作用。

关键词：生物节律干扰质粒 RNA干扰人类近日节律基因1 P—p44/42丝裂原活化蛋白激酶