检索结果-南通市图书馆

人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 577-583页

作者：王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041 四川大学华西第二医院成都610041

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱... 详细信息

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.

关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

结核杆菌CFP-10／ESAT-6融合基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其抗原性的初步研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第12期26卷 1076-1079页

作者：李岩鲍朗张会东商正玲钟琪李娅莎四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室成都610041

目的构建表达结核分枝杆菌CFP-10／ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,并观察其对巨噬细胞的作用。方法采用SOE法构建CFP-10／ESAT-6融合基因,克隆人大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261中,将重组质粒电转化耻垢分枝杆菌,SDS-PAGE检测CFP-1... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌CFP-10／ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,并观察其对巨噬细胞的作用。方法采用SOE法构建CFP-10／ESAT-6融合基因,克隆人大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261中,将重组质粒电转化耻垢分枝杆菌,SDS-PAGE检测CFP-10／ESAT-6融合蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞一氧化氮合成酶的表达水平。结果经DNA测序证实CFP-10／ESAT-6融合基因序列正确。重组耻垢分枝杆菌经热诱导后可以表达相对分子质量(Mr)约为18×103的融合蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导小鼠巨噬细胞表达一氧化氮合成酶。结论表达CFP-10／ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌构建成功,该重组耻垢分枝杆菌能够活化巨噬细胞,具有抗原性,为研制结核疫苗提供一定参考。

关键词： CFP-10 ESAT-6 融合基因重组耻垢分枝杆菌巨噬细胞

人IL-12与结核分枝杆菌抗原ESAT-6联合基因疫苗的免疫效果观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2007年第3期47卷 477-481页

作者：郝牧鲍朗高蕾四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室成都610041

人白细胞介素12（IL-12）与结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达质粒联合基因免疫,诱导免疫应答效果观察.近交系BALB/c小鼠,随机分组：A组（生理盐水对照）、B组（pcDNA3.1空质粒对照）、C组（BCG对照）、D组（pcESAT-6）和E组（pcI... 详细信息

人白细胞介素12（IL-12）与结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达质粒联合基因免疫,诱导免疫应答效果观察.近交系BALB/c小鼠,随机分组：A组（生理盐水对照）、B组（pcDNA3.1空质粒对照）、C组（BCG对照）、D组（pcESAT-6）和E组（pcIL-12＋pcESAT-6）.B、D、E质粒免疫组小鼠分别于胫前肌肌肉注射布比卡因（7.5g/L）和质粒的混和物（1：4,100μL,含质粒70μg/次）,A组小鼠肌肉注射生理盐水和布比卡因的混和物（1：4,100μL）,均间隔2周免疫一次,共免疫3次;末次免疫时,C组小鼠皮下注射BCG菌液,0.3mL/只,含10^6CFU/mL.末次免疫后14d和28d,各组小鼠分别取血分离血清用于总IgG测定,同时分离脾细胞,经TB-PPD刺激后检测脾细胞增殖（XTT比色法）活性和脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）、白介素4（IL-4）分泌水平.pcESAT-6质粒DNA单独免疫（D组）或与pcIL-12质粒DNA联合免疫（E组）,均能诱导小鼠产生特异性抗体,且抗体水平在末次加强免疫后14～28d逐渐增加;但pcIL-12与pcESAT-6联合免疫后,特异性抗体水平较pcESAT-6单独免疫增加不明显（P＜0.05）.c、D、E组免疫小鼠脾细胞体外经TB-PPD刺激后,E组小鼠特异性淋巴细胞增殖活性和IFN-γ分泌水平明显强于C组和D组（P＜0.05）,而IL-4分泌水平相互间未发现明显差异.末次加强免疫后14～28d,E组小鼠脾细胞增殖活性维持在较高水平,而C组小鼠脾细胞增殖活性先低后高,D组则先高后低;IFN-γ诱生水平,E组最高,C组次之,D组最低.pcIL-12与pcESAT-6质粒DNA联合免疫后能刺激机体产生强烈的细胞免疫和稳定的体液免疫,在动物体内诱发的细胞免疫较ESAT-6或BCG单独免疫时均有明显增加并维持较长时间,此外联合免疫后诱导的体液免疫也较BCG免疫有明显增加.

关键词：白细胞介素12 结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗

优化分枝杆菌重组工程系统构建分枝杆菌突变株筛选方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四川大学学报（医学版） 2019年第5期50卷 629-634页

作者：王楚涵马鹏娇罗涛鲍朗四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室

目的通过为分枝杆菌重组工程系统(pJV53)加筛选标记,建立一种分枝杆菌突变株的筛选方法。方法为pJV53加入蔗糖反筛选基因SacB和突变的潮霉素抗性基因hygS,通过潮霉素抗性恢复指示耻垢分枝杆菌(Ms)体内同源重组的成功,为突变株的筛选提... 详细信息

目的通过为分枝杆菌重组工程系统(pJV53)加筛选标记,建立一种分枝杆菌突变株的筛选方法。方法为pJV53加入蔗糖反筛选基因SacB和突变的潮霉素抗性基因hygS,通过潮霉素抗性恢复指示耻垢分枝杆菌(Ms)体内同源重组的成功,为突变株的筛选提供标记;通过蔗糖反筛选挑选脱去质粒的突变株。结果成功构建重组质粒pJV53-SacB-hygS,筛选出MSMEG4487 G188A突变株以及利福平耐药的Ms rpoB D516Y和Ms rpoB H526Q突变株,并成功将以上突变株脱去质粒。结论 pJV53-SacB-hygS能够有效帮助构建筛选突变株,并对突变株进行脱质粒操作,具有普遍应用价值;结核分枝杆菌rpoB基因D516Y和H526Q的突变与该菌对利福平的耐药有关。

关键词：质粒优化耻垢分枝杆菌突变株筛选脱质粒利福平耐药

层粘连蛋白受体Ⅰ与hPeriod1相互作用的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

航天医学与医学工程 2006年第4期19卷 249-252页

作者：汪宇辉胡丽娟鲁芳刘延友江舟冀治鸿杨波王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院四川成都610041

目的寻找与节律蛋白hPeriod1(hPer1)相互作用的蛋白,并对筛选出的层粘连蛋白受体Ⅰ(Lamr1)在节律系统中的功能作初步研究。方法分别构建pGAD rec脑/cDNA文库和pGBKT7/hPer1bH LH-PAS重组诱饵蛋白质粒,酵母双杂交筛选下丘脑里与hPer1相... 详细信息

目的寻找与节律蛋白hPeriod1(hPer1)相互作用的蛋白,并对筛选出的层粘连蛋白受体Ⅰ(Lamr1)在节律系统中的功能作初步研究。方法分别构建pGAD rec脑/cDNA文库和pGBKT7/hPer1bH LH-PAS重组诱饵蛋白质粒,酵母双杂交筛选下丘脑里与hPer1相互作用的蛋白。利用RT-PCR技术检测新蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织中的表达及在SH-SY5Y细胞中的节律性质。通过RNA干扰技术研究新蛋白与hPer1的关系。结果通过酵母双杂交筛选,证明Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用。该蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织广泛表达,灰度比较显示经马血清诱导后的SH-SY5Y细胞的hPer1表达呈现近日节律,而Lamr1表达无节律变化。RNA干扰显示hPer1表达下调不影响Lamr1的表达。结论Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用,但其表达在RNA水平无节律变化。Lamr1参与细胞的黏附、转移和侵袭。其前体蛋白作为核蛋白参与细胞蛋白的合成。Lamr1可能参与hPer1相关的生物节律系统的信号传出。

关键词：时间生物学生物节律酵母双杂交层粘连蛋白受体 Period1基因

霍乱弧菌ctxAB融合基因的克隆及原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

航天医学与医学工程 2006年第4期19卷 260-264页

作者：张雷张莉陈建平王涛刘德松田玉四川大学华西医学中心基础医学与法医学院四川成都610041

目的构建霍乱毒素A亚基基因(ctxA)和B亚基基因(ctxB)的融合表达载体,并在原核系统表达,为霍乱毒素(CT)免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础。方法以霍乱弧菌DNA为模板,利用重叠PCR技术,扩增出含有ctxA和ctxB的融合基因片段ctx... 详细信息

目的构建霍乱毒素A亚基基因(ctxA)和B亚基基因(ctxB)的融合表达载体,并在原核系统表达,为霍乱毒素(CT)免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础。方法以霍乱弧菌DNA为模板,利用重叠PCR技术,扩增出含有ctxA和ctxB的融合基因片段ctxAB,并与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达TrxBB-CTAB融合蛋白,用SDS-PAGE及W estern b lot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了霍乱弧菌1 158bp的ctxAB融合基因,成功构建了重组质粒pET-ctxAB,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示重组质粒pET-ctxAB在原核系统中得到了高效融合表达。结论霍乱弧菌ctxA基因和ctxB基因通过重叠PCR成功地融合在一起,融合基因ctxAB在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词：霍乱弧菌重叠PCR 融合基因ctxAB 克隆基因表达

不同光暗循环下小鼠自发活动生物节律周期的频率分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

航天医学与医学工程 2006年第3期19卷 179-182页

作者：杨波刘延友汪宇辉江舟肖静王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院四川成都610041

目的探讨不同光-暗循环条件下小鼠的自发性活动是否存在3.5d节律、7d节律以及10d节律。方法以小鼠为动物模型,排除社会活动因素对生物节律的影响,采用红外线检测系统检测小鼠自发性活动,对不同光-暗循环作用下小鼠自发活动的多频率生物... 详细信息

目的探讨不同光-暗循环条件下小鼠的自发性活动是否存在3.5d节律、7d节律以及10d节律。方法以小鼠为动物模型,排除社会活动因素对生物节律的影响,采用红外线检测系统检测小鼠自发性活动,对不同光-暗循环作用下小鼠自发活动的多频率生物节律进行了研究。结果用余弦法的频谱分析发现:在10h光照(L)/10h黑暗(D)环境下,小鼠的自发活动存在明显的τ=20h的近日节律和τ=10h的近半日节律(P<0.001),以及较弱的近7d节律和近3.5d节律,P<0.01;在12h(L)/12h(D)环境下,存在很强的24h为周期的近日节律和12h为周期的近半日节律,P<0.001,未见近7d节律存在;在14h(L)/14h(D)环境下,以τ=28h为周期的近日节律和τ=14h的近半日节律表现明显(P<0.001),同时亦有较弱的近7d节律。上述情况下,小鼠均未发现10日节律。结论生物体存在多种频率的生物节律,其节律的特征受到光-暗循环的影响。

关键词：时间生物学多频率生物节律频率分析光暗周期

IL-12基因不同亚基真核表达载体的构建及表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 698-702页

作者：郝牧鲍朗张会东高蕾李娅莎四川大学华西医学中心基础与法医学院感染与免疫研究室四川成都610041

目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40... 详细信息

目的:克隆并构建含人白介素12(hIL-12)基因p35、p40不同亚基的真核表达载体,瞬时转染真核细胞并诱导IL-12的表达。方法:人单核细胞白血病细胞株(THP-1)和人白血病细胞株(HL-60),经DMSO、IFN-γ和LPS诱导后,用RT-PCR及SOEPCR扩增IL-12p40、p35及p40-p35融合基因;并构建pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达载体。以3种重组质粒分别瞬时转染COS-7细胞后,通过RT-PCR及ELISA法检测目的基因的表达。结果:经诱导后,从HL-60细胞中扩增到IL-12p40和p35基因片段;但从THP-1细胞中只扩增到p35基因片段,未能扩增到p40基因片段;经酶切鉴定、PCR扩增及序列测定表明pcDNA-p35、pcDNA-p40及pcDNA-IL-12真核表达质粒构建成功;并在COS-7细胞中可检测到IL-12的表达。结论:含hIL-12基因不同亚基的真核表达质粒的成功构建,对进一步研究IL-12在免疫应答中的调节作用以及作为免疫佐剂改善BCG免疫保护效果的研究奠定了基础。

关键词：白细胞介素12 SOE PCR 真核表达瞬时转染

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

航天医学与医学工程 2006年第3期19卷 171-175页

作者：华慧王跃锜万朝敏刘延友王晓佳王正荣四川大学华西医学中心基础医学与法医学院四川成都610041

目的研究小鼠节律基因Period2(Per2)对小鼠乳腺癌细胞(EMT6)的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法将pcDNA3.1(+)-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3.1(+)入细胞的对照组。以RT-PCR、Westernblot、流式细胞技术来检测Per2基因... 详细信息

目的研究小鼠节律基因Period2(Per2)对小鼠乳腺癌细胞(EMT6)的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法将pcDNA3.1(+)-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3.1(+)入细胞的对照组。以RT-PCR、Westernblot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果小鼠节律基因Per2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。

关键词：时间生物学生物节律节律基因细胞周期 EMT6