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利用正交设计优化脑膜炎奈瑟氏菌Taqman-MGB探针检测反应体系

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现代预防医学 2008年第8期35卷 1541-1544页

作者：杨艳刘衡川叶运莉苏红卫汪川四川大学公共卫生学院医学检验教研室泸州医学院公共卫生系

[目的]建立Taqman-MGB探针检测脑膜炎奈瑟氏菌的最佳反应体系,探讨影响Taqman-MGB探针检测的多个因素。[方法]利用正交设计,从Buffer、TaqDNA聚合酶、引物、Mg2+、探针、dNTP6种因素对实时荧光PCR体系进行优化,在此基础上,进一步细调,... 详细信息

[目的]建立Taqman-MGB探针检测脑膜炎奈瑟氏菌的最佳反应体系,探讨影响Taqman-MGB探针检测的多个因素。[方法]利用正交设计,从Buffer、TaqDNA聚合酶、引物、Mg2+、探针、dNTP6种因素对实时荧光PCR体系进行优化,在此基础上,进一步细调,寻求实时荧光PCR反应的最佳反应体系。[结果]正交试验结果表明,最佳反应体系为(50μl):Mg2+7.0mmol/L,引物0.6μmol/L,dNTP300μmol/L,TaqDNA聚合酶2.0U,探针0.1μmol/L,Buffer1.5×。[结论]Mg2+是影响实时荧光PCR的重要因素;所得体系反应稳定,正交法实验设计高效、快捷,科学性强,值得推广。

关键词：脑膜炎奈瑟氏菌 Taqman-MGB探针正交设计实时PCR 条件优化

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重组沙门菌侵袭蛋白A的原核表达与纯化

四川大学学报（医学版） 2006年第3期37卷 369-372页

作者：周爱萍张祖昌许欣樊学军占利孙敏裴晓方四川大学华西公共卫生学院医学检验学教研室成都610041 四川检验检疫局国际旅行卫生保健中心

目的在大肠杆菌中表达重组沙门菌侵袭蛋白A,并对表达产物进行分离和纯化。方法提取沙门菌基因组模板,PCR扩增侵袭因子invA基因目的片段,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-invA重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌BL2... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达重组沙门菌侵袭蛋白A,并对表达产物进行分离和纯化。方法提取沙门菌基因组模板,PCR扩增侵袭因子invA基因目的片段,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-invA重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Westernblot检测鉴定表达蛋白。结果成功构建了沙门菌pET-invA大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分离纯化的表达产物纯度达到电泳纯。结论沙门菌侵袭蛋白A的成功表达和分离纯化,为该蛋白的免疫学性能研究、相应抗体的制备以及沙门菌快速检测方法的建立奠定了基础。

关键词：沙门菌侵袭蛋白A 重组蛋白质原核表达

心理测评及生活质量评价中被择答案用词的频数分析

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中国心理卫生杂志 2004年第7期18卷 471-473页

作者：郭义霞刘朝杰李宁秀四川大学华西公共卫生学院社会医学教研室 610041

目的 :为生活质量评价提供标准化的等间距的被择答案用词。方法 :收集了 13 1份量表 (心理量表 12 3份、生活质量量表 8份 ) ,采用SPSS10 0统计软件 ,分析各答案类型及其用词的频数分布。结果 :常用的生活质量、心理量表里的答案中 ,... 详细信息

目的 :为生活质量评价提供标准化的等间距的被择答案用词。方法 :收集了 13 1份量表 (心理量表 12 3份、生活质量量表 8份 ) ,采用SPSS10 0统计软件 ,分析各答案类型及其用词的频数分布。结果 :常用的生活质量、心理量表里的答案中 ,多数为 5级 ,占 3 1 68% ,其次为 4级和 3级 ,分别占 2 1 99%和13 3 5 %。答案用词呈多样化。结论 :在设计生活质量评价量表的被择答案时 ,建议采纳 5级设计。答案用词宜采用使用频率高 ,且具有等间距性的规范化用词。

关键词：心理测评生活质量被择答案频数生活质量精神卫生

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壬基酚对成年雄性SD大鼠生殖功能的影响

四川大学学报（医学版） 2003年第2期34卷 295-297页

作者：张浩曾祥贵程薇波吴德生四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室成都610041 华西公共卫生学院2000级博士研究生四川大学华西公共卫生学院毒理学教研室

目的　研究壬基酚对 SD雄性大鼠生殖功能的影响。方法　将成年雄性 SD大鼠经口染毒壬基酚(5 0、10 0、2 0 0 mg/ kg) 2 8d后 ,处死 ,测定生殖功能相关指标 ,并作睾丸组织病理学检查。取成年雄性大鼠睾丸细胞进行体外培养 ,壬基酚染毒 ,... 详细信息

目的　研究壬基酚对 SD雄性大鼠生殖功能的影响。方法　将成年雄性 SD大鼠经口染毒壬基酚(5 0、10 0、2 0 0 mg/ kg) 2 8d后 ,处死 ,测定生殖功能相关指标 ,并作睾丸组织病理学检查。取成年雄性大鼠睾丸细胞进行体外培养 ,壬基酚染毒 ,测定睾丸酮分泌量的变化 ,并对其间质细胞、支持细胞和生精细胞的超微结构进行电镜观察。结果　经口染毒壬基酚剂量≥ 10 0 m g/ kg可引起大鼠精子计数和活力的显著降低 ,睾丸组织病理学切片显示曲细精管萎缩 ,生精能力下降。睾丸细胞体外培养研究显示 ,壬基酚能抑制睾酮的分泌 ,且电镜观察可见间质细胞内质网肿胀 ,表明合成功能减弱。

关键词：壬基酚生殖功能睾丸酮组织病理学

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泸州市农村健康中小学生流脑带菌状况的调查

现代预防医学 2008年第12期35卷 2347-2349页

作者：杨艳梁疆莉鞠长燕苏红卫陈志群甘仲霖刘衡川四川大学公共卫生学院医学检验教研室泸州医学院公共卫生系

[目的]了解泸州市农村健康中小学生脑膜炎奈瑟菌的带菌状况,为分析泸州市流脑病的发展趋势提供依据。[方法]采用横断面调查,按整群抽样的方法,在泸州市某地农村小学和中学采集230份咽拭子标本,常规分离培养鉴定及PCR鉴定和分型。[结果]... 详细信息

[目的]了解泸州市农村健康中小学生脑膜炎奈瑟菌的带菌状况,为分析泸州市流脑病的发展趋势提供依据。[方法]采用横断面调查,按整群抽样的方法,在泸州市某地农村小学和中学采集230份咽拭子标本,常规分离培养鉴定及PCR鉴定和分型。[结果]230份咽拭子标本中,分离出13株脑膜炎奈瑟菌,带菌率为5.65%,A群1株,B群10株,C群2株。中、小学生带菌率无统计学差异(χ=0.467,P﹥0.05),性别带菌率的差异亦无统计学意义2(χ=0.530,P﹥0.05)。[结论]泸州市农村健康中小学生流脑带菌以B群为主(10/13),其次为C群(2/13),A群2最低(1/13)。

关键词：流行性脑脊髓膜炎脑膜炎奈瑟球菌 PCR 学生

成都市社区慢性阻塞性肺疾病患者卫生服务利用及其影响因素分析

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四川大学学报（医学版） 2007年第2期38卷 316-320页

作者：张本张媛刘衡川田军涂国平四川大学华西公共卫生学院流行病学教研室成都610041 成都市武侯区卫生局四川大学华西公共卫生学院医学检验学教研室成都市金牛区卫生局

目的了解成都市社区慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者卫生服务利用情况及其影响因素。方法随机整群抽取成都市6个社区卫生服务试点社区的所有COPD患者作为调查对象,采用逐户走访填写问卷并结合查阅病案的方法对446名患者进行调查,调查内容涉... 详细信息

目的了解成都市社区慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者卫生服务利用情况及其影响因素。方法随机整群抽取成都市6个社区卫生服务试点社区的所有COPD患者作为调查对象,采用逐户走访填写问卷并结合查阅病案的方法对446名患者进行调查,调查内容涉及患者的一般社会人口学特征,疾病相关内容,对待疾病的态度,卫生服务利用信息以及相关卫生费用等。结果成都市社区COPD患者门诊利用率为53.04%,年均门诊次数为6.04±4.05。COPD患者住院就诊率为18.22%,年均住院次数为6.10±2.61,年均住院时间为(51.65±15.91)d。COPD患者对综合性医院和较大的医院的利用率为45.33%,对社区卫生服务中心利用率为18.22%。影响COPD患者门诊就诊的主要因素为年龄、患者种类、对疾病的态度、病情严重程度和医疗负担形式。影响COPD患者住院与否的主要因素有职业、患者种类、病情严重程度、医疗费用负担形式与家人态度。文化水平、收入、职业、对疾病的态度以及医疗费用负担形式则是影响COPD患者到社区卫生服务中心就诊的主要因素。结论成都市社区COPD患者对卫生服务特别是社区卫生服务的利用较低;有较多的因素影响患者对卫生服务的利用。

关键词：慢性阻塞性肺疾病卫生服务社区社区卫生

大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力与其质粒pO157、染色体DNA关系的研究

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四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 862-865页

作者：张本刘衡川张媛李福平涂国平四川大学华西公共卫生学院流行病学教研室成都610041 四川大学华西公共卫生学院医学检验学教研室成都市武侯区卫生局四川大学华西第二医院检验科成都市金牛区卫生局

目的研究连续消毒中大肠杆菌O 157∶H 7对消毒剂抗力的变化及抗力与质粒pO 157、染色体DNA的关系。方法用四种消毒剂连续消毒5株大肠杆菌O 157∶H 7 50代,对比消毒前后试验菌对四种消毒剂的抗力、pO 157酶切图谱和染色体DNA酶切图谱。... 详细信息

目的研究连续消毒中大肠杆菌O 157∶H 7对消毒剂抗力的变化及抗力与质粒pO 157、染色体DNA的关系。方法用四种消毒剂连续消毒5株大肠杆菌O 157∶H 7 50代,对比消毒前后试验菌对四种消毒剂的抗力、pO 157酶切图谱和染色体DNA酶切图谱。结果连续消毒50代后,试验菌对二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加,对洗必泰的抗力不变。经二氯异氢尿酸钠、季铵盐消毒后的pO 157酶切图谱和原始菌不同,经碘伏、洗必泰消毒后的pO 157酶切图谱与原始菌相同;经二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐消毒后细菌染色体DNA X baⅠPFGE酶切图谱均发生条带数目和位置的改变;经洗必泰消毒后细菌染色体DNA X baⅠPFGE酶切图谱不变。结论连续消毒会使试验菌对二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加。对二氯异氢尿酸钠、季铵盐抵抗力增加的原因可能与质粒pO 157和染色体DNA的结构改变有关;抵抗碘伏的基因则位于染色体DNA上,对碘伏抗力增加与染色体DNA结构改变有关而与质粒pO 157无直接关系。

关键词：大肠杆菌质粒消毒剂抗力染色体

小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾酮合成及机制的影响

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四川大学学报（医学版） 2013年第4期44卷 511-516页

作者：徐华黄洁李敏高志斌朱彦锋李云四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室成都610041

目的探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.... 详细信息

目的探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)。分别培养24、48、72h,每24h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。结果与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP100.0μmol/L染毒48、72h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1μmol/L、1.0μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβmRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0μmol/L、100.0μmol/L两个剂量染毒组。结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。

关键词：器官培养邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯乳鼠睾丸实时荧光定量PCR

对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨

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四川大学学报（医学版） 2013年第2期44卷 242-245,250页

作者：关红曹霞陈蕊周涛黄兴隆许欣裴晓方四川大学华西公共卫生学院医学检验学教研室成都610041 西安市中心医院西安710003

目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制。方法对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(K-B法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶... 详细信息

目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制。方法对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(K-B法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位。结果药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000bp质粒上。结论肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP。

关键词：肺炎克雷伯菌耐药性碳青霉烯酶金属β-内酰胺酶质粒