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大鼠心肌H^+-ATP酶抑制蛋白基因克隆及初步鉴定

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中国病理生理杂志 1998年第2期14卷 153-156页

作者：朱世军李芳陈伟姜晓姝徐曼徐长庆王孝铭陈忠斌于康震哈尔滨医科大学病理生理教研室哈尔滨医科大学遗传教研室

目的和方法：根据大鼠线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶抑制蛋白基因（ＩＦ１）ｃＤＮＡ序列，设计并人工合成一对特异性扩增ＩＦ１ｃＤＮＡ的引物。以提取的大鼠心肌ｍＲＮＡ为模板，反转录－聚合酶链式反应扩增出约４００ｂｐ条带，以Ｋｌｅｎｏ... 详细信息

目的和方法：根据大鼠线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶抑制蛋白基因（ＩＦ１）ｃＤＮＡ序列，设计并人工合成一对特异性扩增ＩＦ１ｃＤＮＡ的引物。以提取的大鼠心肌ｍＲＮＡ为模板，反转录－聚合酶链式反应扩增出约４００ｂｐ条带，以Ｋｌｅｎｏｗ酶处理、纯化ＰＣＲ产物，与经Ｓｍａｌ酶切线性化的ｐＵＣ１９质粒ＤＮＡ连接，经转化、筛选初步获得两个重组质粒。对重组质粒进行酶切图谱分析并以重组质粒为模板做ＰＣＲ检测。结果：该质粒为ＩＦ１ｃＤＮＡ基因重组ｐＵＣ１９，并且该基因以正向插入，命名为ｐＩＦ１。

关键词：大鼠心肌缺血腺苷三磷酸酶类基因克隆 cDNA 序列分析

多巴胺系统及L-精氨酸／一氧化氮通路在大鼠心肌肥大中的作用研究

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中国地方病学杂志 2007年第4期26卷 367-371页

作者：李弘徐长庆孙轶华时飒李全凤赵雅君哈尔滨医科大学病理生理教研室 150081

目的探讨多巴胺系统及L-精氨酸／一氧化氮（L—Arg／NO）通路在大鼠心肌肥大动物模型中的作用及相关机制。方法采用腹主动脉缩窄术复制大鼠心肌肥大动物模型。将Wistar大鼠随机分为4组：①腹主动脉缩窄术（AC）组；②假手术（SO）组；... 详细信息

目的探讨多巴胺系统及L-精氨酸／一氧化氮（L—Arg／NO）通路在大鼠心肌肥大动物模型中的作用及相关机制。方法采用腹主动脉缩窄术复制大鼠心肌肥大动物模型。将Wistar大鼠随机分为4组：①腹主动脉缩窄术（AC）组；②假手术（SO）组；③L-精氨酸（L—Arg）组；④左旋硝基精氨酸甲酯（L—NAME）组。通过心肌肥大指数，心肌组织胶原染色，心功能检测等方法分析各组大鼠心肌组织肥大状况：采用RT—PCR和Western blot结合图像分析系统，观察药物干预后，心肌组织中多巴胺受体D1、D2mRNA和蛋白质表达变化：借助紫外分光光度计，分析心肌组织匀浆中一氧化氮（NO）水平和一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 AC组左心肥大明显．表现为室内压显著升高，胶原增多；与SO组比较，腹主动脉缩窄术后D1、D2mRNA和蛋白质表达均明显降低（P〈0.01），NO、NOS水平明显下降（P〈0.01）；应用NOS抑制剂L-NAME预处理能够促进肥大的发生。使用NO合成的前体L-Arg干预，则抑制肥大发生。结论压力负荷加大能引起心肌肥大。其机制可能与NO合成减少有关：大鼠心肌细胞内存在多巴胺受体D1、D2mRNA和蛋白质表达，心肌肥厚时二者均明显减低。

关键词：心肌肥大多巴胺受体一氧化氮

平均阳性染色面积百分比法分析免疫组化结果初探

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生物医学工程学杂志 2007年第3期24卷 650-653页

作者：姜洋金晓明屠康哈尔滨医科大学病理学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学生物信息学教研室哈尔滨150086

借助于计算机图像分析系统,使用平均阳性染色面积百分比(APSAP)法分析免疫组化切片结果,并与人工技术方法相比较,从而验证图像分析APSAP法与人工计数方法在免疫组化染色结果判定方面的符合程度。实验结果表明,采用APSAP法分析免疫组化... 详细信息

借助于计算机图像分析系统,使用平均阳性染色面积百分比(APSAP)法分析免疫组化切片结果,并与人工技术方法相比较,从而验证图像分析APSAP法与人工计数方法在免疫组化染色结果判定方面的符合程度。实验结果表明,采用APSAP法分析免疫组化切片结果与人工计数分析方法的符合程度较高。我们简要介绍以平均阳性染色面积所占测量面积的百分比来衡量免疫组化切片结果的方法。此外,我们还对APSAP法的理论基础、特点等问题进行了深入的讨论。

关键词：阳性染色面积百分比免疫组化图像分析

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人小脑皮质颗粒细胞的超微结构

解剖学杂志 1991年第1期14卷 24-26页

作者：马春张呜弦蔡德亨杨立庄哈尔滨医科大学解剖教研室哈尔滨医科大学神经外科教研室

本文用透射电镜观察了人小脑颗粒细胞的超微结构。在人的颗粒层中存在少量髓化的颗粒细胞。它们中有的被髓鞘完全包绕,有的被部分包绕,可以观察到有的髓化颗粒细胞的髓鞘来自二个小的有髓纤维。还观察到极少的颗粒细胞具有典型的核仁。

关键词：小脑皮质颗粒细胞超微结构

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凋亡网络与缺血性神经元凋亡

中华病理学杂志 2002年第5期31卷 452-454页

作者：赵纲邓艳秋王吾如哈尔滨医科大学病理学教研室 150086

近10年来，关于细胞凋亡机制的研究取得了长足的进展，在凋亡途径及凋亡调控等方面，许多关键性步骤得到了较为明确地阐明。一个由多条细胞凋亡通路交织而成的凋亡网络概貌已经呈现在我们眼前。各种病理生理刺激促进凋亡启动，而各个凋... 详细信息

近10年来，关于细胞凋亡机制的研究取得了长足的进展，在凋亡途径及凋亡调控等方面，许多关键性步骤得到了较为明确地阐明。一个由多条细胞凋亡通路交织而成的凋亡网络概貌已经呈现在我们眼前。各种病理生理刺激促进凋亡启动，而各个凋亡通路上的一些节点通过负反馈作用抵抗凋亡的发生，一旦凋亡刺激超过负反馈所能承担的某一阈值时，凋亡信号将突破这一节点继续向下传导，并在正反馈作用下逐级放大，最终导致细胞凋亡。现就这些研究进展以及缺血性中枢神经元凋亡的特点及抗凋亡治疗的应用作一综述。

关键词：凋亡信号细胞凋亡传导途径凋亡网络缺血性神经元凋亡

蓬子菜总黄酮对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

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中国新药杂志 2012年第13期21卷 1523-1527页

作者：史灵恩凌秋杨晓蕾李海霞马玲哈尔滨医科大学流行病教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学微生物教研室哈尔滨150081

目的:探讨蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs)的保护及损伤修复的作用。方法:采用台盼蓝染色法,观察不同剂量蓬子菜总黄酮(12.5～400μ***-1)对HUVECs生长的影响;建立过氧化氢(H2O2)诱导H... 详细信息

目的:探讨蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU-VECs)的保护及损伤修复的作用。方法:采用台盼蓝染色法,观察不同剂量蓬子菜总黄酮(12.5～400μ***-1)对HUVECs生长的影响;建立过氧化氢(H2O2)诱导HUVECs氧化损伤模型,采用MTT比色法检测细胞增殖,酶联免疫分析方法检测内皮素-1(endothelin,ET-1)和降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)的分泌水平。AO/EB双染色法观察HUVECs的凋亡。结果:与模型组比较,蓬子菜总黄酮能减轻H2O2对HUVECs增殖抑制作用,促进CGRP的分泌,降低ET-1的分泌水平,抑制HUVECs的凋亡。结论:蓬子菜总黄酮对氧化损伤的HUVECs具有保护及修复作用,其机制与调节ET-1和CGRP的分泌有关。

关键词：蓬子菜总黄酮人脐静脉内皮细胞过氧化氢内皮素-1 降钙素基因相关肽凋亡

应用脉冲凝胶电泳技术分析肺炎克雷伯菌染色体多态性

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第4期23卷 314-316页

作者：叶杨芹马佳毓张文莉付英梅赵月辉哈尔滨医科大学微生物教研室 150086

目的　利用脉冲凝胶电泳 (PFGE)技术探讨肺炎克雷伯菌 3个亚种临床分离株核型特征。方法　用XbaⅠ酶切各试验菌株染色体DNA ,经脉冲凝胶电泳分离酶切片段。结果　PFGE法将2 8株细菌分为 15个型和亚型 ,较准确地显示各菌株染色体多态性 ... 详细信息

目的　利用脉冲凝胶电泳 (PFGE)技术探讨肺炎克雷伯菌 3个亚种临床分离株核型特征。方法　用XbaⅠ酶切各试验菌株染色体DNA ,经脉冲凝胶电泳分离酶切片段。结果　PFGE法将2 8株细菌分为 15个型和亚型 ,较准确地显示各菌株染色体多态性 ,并筛选出亚种间的差异DNA片段。结论　脉冲凝胶电泳技术分析肺炎克雷伯菌基因型准确、可靠 ,是用于流行病学监测的有效方法。

关键词：脉冲凝胶电泳技术肺炎克雷伯菌染色体多态性流行病学监测

糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变

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解剖学报 2009年第5期40卷 776-779页

作者：杨静徐玉东关娜刘兰涛许海赵太平刘岩哈尔滨医科大学人体解剖学教研室哈尔滨医科大学组织学胚胎学教研室哈尔滨150081

目的探讨糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变。方法4-6周龄雌性BALB／C小鼠腹腔注射地塞米松，采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测DNA单链或双链的裂解，TUNEL和酸性磷酸酶（ACP）双重染色法进行酸性磷酸酶... 详细信息

目的探讨糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变。方法4-6周龄雌性BALB／C小鼠腹腔注射地塞米松，采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测DNA单链或双链的裂解，TUNEL和酸性磷酸酶（ACP）双重染色法进行酸性磷酸酶的检测，观察细胞凋亡后吞噬细胞的活动，透射电子显微镜检测凋亡细胞和吞噬细胞的超微结构。结果光镜观察地塞米松组，TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处，凋亡指数为0.460±0.012；正常对照组TUNEL阳性细胞数目较少，凋亡指数为0.020±0.001，与地塞米松组比较，差异有显著性（P〈0.05）。TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法显示，所有TUNEL阳性胸腺细胞均被ACP阳性细胞吞噬。透射电子显微镜观察发现，大部分凋亡细胞均被吞噬细胞所吞噬，少量未被吞噬的胸腺细胞表现出大范围的染色质浓集，这些少量未被吞噬的胸腺细胞显然是死细胞。结论典型的细胞凋亡的特点是DNA裂解，但这不是糖皮质激素诱导胸腺细胞死亡的主要方式，死亡的胸腺细胞均是被ACP阳性细胞所吞噬；糖皮质激素对胸腺细胞的首要影响是可诱导无DNA裂解的细胞固缩。

关键词：糖皮质激素胸腺 TUNEL 酶组织化学小鼠

钾通道阻断剂部分抑制三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡

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药学学报 2005年第7期40卷 644-648页

作者：董德利宋维华马培林杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的研究钾通道阻滞剂对三氧化二砷诱导的 HeLa 细胞死亡的作用。方法采用 MTF 法评价 HeLa 细胞的存活情况,采用膜片钳技术记录 HeLa 细胞的电压依赖性钾电流。结果 As_2O_3(5 μmol·L^(-1))孵育24h 引起显著的 HeLa 细胞死亡,As_2O_... 详细信息

目的研究钾通道阻滞剂对三氧化二砷诱导的 HeLa 细胞死亡的作用。方法采用 MTF 法评价 HeLa 细胞的存活情况,采用膜片钳技术记录 HeLa 细胞的电压依赖性钾电流。结果 As_2O_3(5 μmol·L^(-1))孵育24h 引起显著的 HeLa 细胞死亡,As_2O_3(5μmol·L^(-1))孵育24 h 后存活的细胞表现明显的电压依赖性钾电流密度增加。+80mV 电压下,As_2O_3(5μmol·L^(-1))孵育组电流密度(61±18)pA/10 pF(n=8)明显高于对照组(38±10)pA/10 pF(n=8,P<0.05)。As_2O_3诱导的 HeLa 细胞死亡可被共同孵育钾通道阻滞剂四氨基吡啶(3mmol·L^(-1))或四乙基铵(5mmol·L^(-1))所部分抑制。3 mmol·L^(-1)四氨基吡啶或5 mmol·L^(-1)四乙基铵对 HeLa 细胞无明显细胞毒作用。结论 As_2O_3长期处理增加 HeLa 细胞的电压依赖性钾电流。As_2O_3诱导的 HeLa 细胞死亡可被钾通道阻滞剂四氨基吡啶或四乙基铵部分抑制。

关键词：三氧化二砷 HeLa细胞电压依赖性钾电流四氨基吡啶四乙基铵