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荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒6/11型

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第4期15卷 380-381页

作者：林春艳辛晓敏周涛哈尔滨医科大学第一临床医学院检验科哈尔滨150001 中山医科大学达安基因诊断中心

目的　了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒 6 11型 (HPV6 11)的感染情况。方法　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术检测 12 9例门诊患者阴道分泌物中HPV6 11的病毒拷贝数。结果　共检出HPV6 11阳性者 47例 ,阳性率为 36 43% ;拷贝... 详细信息

目的　了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒 6 11型 (HPV6 11)的感染情况。方法　用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术检测 12 9例门诊患者阴道分泌物中HPV6 11的病毒拷贝数。结果　共检出HPV6 11阳性者 47例 ,阳性率为 36 43% ;拷贝数在 10 5以上者 39例 ,占阳性者中的82 98% ;40岁以上年龄组阳性率高且病毒复制量均在 10 5以上。结论　中老年阴道炎患者就诊晚 ,感染重。FQ PCR检测HPV敏感、快速、准确。

关键词：荧光定量聚合酶链反人乳头状瘤病毒检测

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构建一体化多层次开放式医学检验实验中心

实验室研究与探索 2010年第5期29卷 90-92页

作者：苏晓杰哈尔滨医科大学(大庆校区)医学检验系黑龙江大庆163319

实验室在医学检验专业教学中具有不可替代的重要地位。加强医学检验实验室建设,改革实验室管理体制,改革实验教学内容,转变实验室运行模式,是新时期人才培养的需要。为适应学科的发展,我校对实验室进行了大刀阔斧地改革,成立了医学检验... 详细信息

实验室在医学检验专业教学中具有不可替代的重要地位。加强医学检验实验室建设,改革实验室管理体制,改革实验教学内容,转变实验室运行模式,是新时期人才培养的需要。为适应学科的发展,我校对实验室进行了大刀阔斧地改革,成立了医学检验实验中心。构建了一体化、多层次、开放式运行模式,充分发挥了实验中心实验教学基地、科研基地、检验技术研发基地的作用。

关键词：医学检验实验中心一体化多层次开放式

血细胞分析仪快速检测外周血造血干细胞与祖细胞的临床意义

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中华检验医学杂志 2020年第4期43卷 489-494页

作者：王梅华庄和张臣青谢智强俞萍丽曹颖平福建医科大学附属协和医院检验科福建医科大学协和临床医学院福建医科大学医学技术与工程学院检验系福州350001

目的:探讨血细胞分析仪快速检测外周血造血干细胞/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HPC)的临床应用价值。方法:方法学验证和回顾性分析。收集2015年1月至2018年12月期间来福建医科大学附属协和医院就诊的4例为初治急性髓系... 详细信息

目的:探讨血细胞分析仪快速检测外周血造血干细胞/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HPC)的临床应用价值。方法:方法学验证和回顾性分析。收集2015年1月至2018年12月期间来福建医科大学附属协和医院就诊的4例为初治急性髓系白血病患者外周血、1名健康供者外周血干细胞采集物5倍稀释液,用于方法学验证;23例自体造血干细胞移植患者、22例异基因外周血造血干细胞移植健康供者的外周静脉血和外周血干细胞采集物5倍稀释液,用于一致性回顾分析。线性试验取已知CD34+细胞含量的外周血、血细胞分离机收集的外周血造血干细胞/祖细胞液各1份,做接近预期上限的高值样本(H),一份低值样本即生理盐水(L),倍比稀释,检测HPC,结果回归分析。一致性试验标本126份,EDTA-K 2抗凝静脉血78份,外周血干细胞采集物48份。同时采集的静脉血,一管血常规和HPC检测,另一管流式细胞术(FCM)检测CD34+细胞。干细胞采集物用灭菌生理盐水5倍稀释后分两管,一管全血细胞计数和HPC计数,另一管FCM检测CD34+细胞。对两种仪器检测结果作比对分析及偏差评估。评价血细胞分析仪对外周血造血干细胞/祖细胞检测的本底计数、携带污染率、精密度、线性范围和与流式细胞术的一致性。结果:本底计数结果为0×109个/L、携带污染率为0.1%符合血细胞分析仪质量要求,重现性不精密度是4.7%~18.8%,HPC线性范围是0~27.201×109个/L、采集液5倍稀释后线性范围是0~0.878×109个/L。血细胞分析仪与FCM分别检测126份样本的结果作比对分析,相关系数r2=0.9601。当WBC>10×109个/L时,两种仪器检测结果具有良好的一致性,斜率位于0.95~1.05之间,医学决定水平处估计的预期偏差10×109个/L时,与FCM不仅具有较好的一致性,而且预期偏差符合临床要求;其检测HPC标本无需预处理。

关键词：造血干细胞血细胞分析仪外周血

BIGH3基因定点突变体R555W的构建及其对人角膜上皮细胞的影响

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中华眼科杂志 2010年第1期46卷 56-61页

作者：葛红岩宋甄施展刘平哈尔滨医科大学附属第一临床医学院眼科 150001

目的构建野生型BIGH3和突变型R555W—BIGH3基因的真核表达载体，探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMDl8．T／BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列，克隆至真核表达载体plRES2-EGFP上，采用快速体外定点诱变技术... 详细信息

目的构建野生型BIGH3和突变型R555W—BIGH3基因的真核表达载体，探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMDl8．T／BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列，克隆至真核表达载体plRES2-EGFP上，采用快速体外定点诱变技术获得R555W突变体。瞬时转染体外培养的人角膜上皮细胞，免疫印迹检测野生与突变型BIGH3基因的表达，流式细胞仪和透射电镜定量和定性检查细胞凋亡，分析caspase3活性。多组间数据采用单因素方差分析进行统计学处理。结果PCR成功扩增了野生型和R555W突变型的BIGH3基因。荧光显微镜下可见成功转染BIGH3／***的CRL-11135细胞发绿色荧光，转染率为30．1％。瞬时转染48h后的HCE细胞的上清液及其细胞裂解液免疫印迹分析显示，BIGH3／R555W-BIGH3-pIRES2-EGFP两组免疫印迹条带的密度比分别为1．26±0．06和1．27±0．08。正常HCE细胞组、转染pIRES2-EGFP空质粒及BIGH3-pIRES2-EGFP细胞凋亡率分别为（1．49±0．02）％、（1．53±0．02）％、（1．50±0．06）％，转染***3-pIRES2-EGFP组细胞凋亡率达到19．46％±0．08％。差异有统计学意义（F=175261．23，P〈O．01）。透射电镜下可见转染组细胞核内染色质凝集，固缩，分布于核膜下，核仁消失，有的胞核碎裂，细胞呈典型的凋亡改变。转染R555W-BIGH3-plRES2-EGFP组caspase-3活性为561．03±1．05，与其他组相比，差异有统计学意义（F=629347．38，P〈0．01）。结论应用快速体外定点诱变技术，成功获得突变型***3基因，转染人角膜上皮细胞后，通过caspase3途径引起细胞凋亡。

关键词：转化生长因子8 细胞外基质蛋白质类诱变定点上皮角膜上皮细胞转染细胞凋亡

强直性脊柱炎患者外周血CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞水平变化及临床意义

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中国免疫学杂志 2020年第13期36卷 1625-1630页

作者：张宇马莉吴青青沈雪贵州医科大学医学检验学院贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵阳550004

目的:探讨CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月~2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞... 详细信息

目的:探讨CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月~2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞术(FCM)检测外周血CD4^+CD25^high CD127^low、CD8^+CD28^-Treg比例,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-17A水平,分析Treg细胞与AS疾病活动度和临床炎症活动指标的相关性。结果:AS活动组CD4^+CD25^high CD127^low Treg细胞比例低于AS非活动组和正常对照组(P0.05)。AS活动组血清IFN-γ水平显著高于AS非活动组和健康对照组(P0.05)。AS患者CD4^+CD25^high CD127^low Treg细胞比例与BASDAI、ESR、Hs-CRP呈负相关(r=0.654、0.517、0.577,P<0.01)。CD8^+CD28+Tc细胞比例及CD8^+CD28+/CD8^+CD28^-与BASDAI呈正相关(r=0.276、0.246,P<0.05)。结论:降低AS患者外周血CD4^+CD25^high CD127^low和CD8^+CD28^-Treg细胞比例、提高炎症细胞因子水平可能在AS疾病发生发展中起重要作用。

关键词：强直性脊柱炎调节性T细胞细胞因子活动度

临床分离气单胞菌中mcr-3基因携带及特性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第9期40卷 697-702页

作者：赵雅洁王凌波林奕帅刘世星孙瑶周铁丽曹建明温州医科大学检验医学院生命科学学院325000 温州医科大学附属第一医院医学检验中心 325000

目的探究本院临床分离的气单胞菌中mcr基因的携带情况和基因特征,为临床检测粘菌素耐药基因的携带和表达情况提供依据。方法应用PCR对183株气单胞菌进行mcr基因检测;微量肉汤稀释法检测粘菌素以及多粘菌素对mcr基因阳性气单胞菌的最低... 详细信息

目的探究本院临床分离的气单胞菌中mcr基因的携带情况和基因特征,为临床检测粘菌素耐药基因的携带和表达情况提供依据。方法应用PCR对183株气单胞菌进行mcr基因检测;微量肉汤稀释法检测粘菌素以及多粘菌素对mcr基因阳性气单胞菌的最低抑菌浓度(MIC);肉汤接合法和滤纸接合法进行接合转移试验;全基因组测序技术分析气单胞菌中mcr-3基因的存在环境。构建mcr-3携带基因的*** DH5α-pGEM-T::pmcr-3菌株以验证其粘菌素耐药表达情况。结果183株气单胞菌mcr-3基因的携带率为2.19%(4/183),未检测到mcr-1和mcr-2基因;药敏试验结果显示4株携带mcr-3基因的嗜水气单胞菌对粘菌素和多粘菌素均敏感(MIC<2μg/ml);接合转移试验结果显示mcr-3基因无法进行水平转移;全基因组测序分析显示本院临床分离嗜水气单胞菌携带的mcr-3基因属于mcr-3.2以及mcr-3-like变异体,且上下游并未检测到相邻的转移元件。构建的重组菌株*** DH5α-pGEM-T::pmcr-3表现为粘菌素敏感表型(MIC=2μg/ml)。结论我院临床分离气单胞菌中存在mcr-3基因,但其在嗜水气单胞菌不表达粘菌素耐药性,且暂时未发现支持其可以转移的证据。

关键词：粘菌素嗜水气单胞菌 mcr-3

人脑出血血肿周围皮质血红素氧合酶-1和凋亡调节蛋白Bcl-2表达变化的研究

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中华医学杂志 2007年第27期87卷 1904-1907页

作者：段淑荣王潇然王春燕王德生戚基萍王海涛哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科 150001 哈尔滨医科大学第一临床医学院病理科 150001

目的观察人脑出血后血肿周围皮质内神经元血红素氧合酶-1(HO-1)与凋亡调节蛋白 Bcl-2的表达规律。方法剖解39例脑出血后不同时间死亡患者的脑组织,自出血灶边缘向外1～3 cm 及出血灶对侧相应部位的脑皮质组织进行取材,出血灶对侧设为对... 详细信息

目的观察人脑出血后血肿周围皮质内神经元血红素氧合酶-1(HO-1)与凋亡调节蛋白 Bcl-2的表达规律。方法剖解39例脑出血后不同时间死亡患者的脑组织,自出血灶边缘向外1～3 cm 及出血灶对侧相应部位的脑皮质组织进行取材,出血灶对侧设为对照组。采用免疫组化技术观察不同时间点出血灶周围 HO-1与 Bel-2的表达和变化规律,实验结果应用 SPSS 11.5软件进行统计学分析。结果 (1)人脑出血2 h 后就有 HO-1的表达,2～10 h 血肿周围神经元 HO-1阳性细胞数开始增加[(5.1±2.0)个/高倍视野],17～30 h 达到高峰[(11.3±0.9)个/高倍视野],120～216 h 后逐渐减弱[(8.6±0.8)个/高倍视野],240～408 h 时仍有 HO-1阳性神经元[(6.4±0.6)个/高倍视野](F=42.80,P<0.001)。对照组没有 HO-1表达。(2)Bcl-2阳性神经元在脑出血2～10 h 后就有表达[(4.2±1.7)个/高倍视野],17～30 h 血肿周围神经元 Bcl-2阳性细胞数开始增加[(6.6±0.5)个/高倍视野],36～96 h 达到高峰[(8.9±1.1)个/高倍视野],240～408 h 后逐渐减弱[(4.7±0.6)个/高倍视野](F=29.59,P<0.001)。对照组没有 Bcl-2阳性神经元的表达。(3)HO-1和 Bcl-2变化规律存在一定相关性(r=0.66,P<0.001)。结论人脑出血后出血灶周围皮质神经元内 HO-1与Bcl-2的表达增加,参与了脑出血后脑保护与脑损伤的作用机制。

关键词：人脑出血血红素氧合酶-1 凋亡调节蛋白

常染色体显性先天性缝合状白内障家系致病基因的定位

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中华眼科杂志 2006年第10期42卷 908-912页

作者：张璐高凌寒刘平李志坚高维奇秦炜冯国鄞傅松滨贺林哈尔滨医科大学第一临床医学院附属眼科医院 150001 上海交通大学 Bio-X 中心哈尔滨医科大学医学遗传学研究室

目的对我国一常染色体显性先天性缝合状白内障家系进行致病基因的定位。方法采集家系成员外周静脉血提取基因组 DNA。选用美国 Applied Biosystems 公司提供的约400个遗传标记物进行基因扫描。数据经 Linkage 软件包进行连锁分析,初步... 详细信息

目的对我国一常染色体显性先天性缝合状白内障家系进行致病基因的定位。方法采集家系成员外周静脉血提取基因组 DNA。选用美国 Applied Biosystems 公司提供的约400个遗传标记物进行基因扫描。数据经 Linkage 软件包进行连锁分析,初步确定致病基因所在染色体区域。在阳性区域内选取更高密度的荧光标记物进行精细扫描,用 Cyrillic 软件进行单体型分析。结果两点间连锁分析在 D3S1279处获得最大对数优势记分(LOD)值 Z_(max)=2.32(θ_(max)=0.00)。通过精细扫描和单体型分析将致病基因定位于 D3S1267和 D3S1614之间约38.6厘摩(cM)区域内。结论先天性缝合状白内障家系的致病基因位于3号染色体3q21.1-q26.2约38.6cM 区域内。(中华眼科杂志,2006,42:908-912)

关键词：白内障染色体图系谱染色体,人,3对

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体细胞核重编程中表观遗传学的研究进展

生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 496-501页

作者：关娜徐燕宁张庆华雷蕾哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

促使体细胞核重编程的方法很多,除了传统的体细胞核移植方法外,科学家们努力寻求从法律、道德、伦理等方面更易被人们接受的新方法.近年来多能干细胞与体细胞融合、多能细胞的抽提物与体细胞共孵育以及将编码多潜能因子的基因导入体细... 详细信息

促使体细胞核重编程的方法很多,除了传统的体细胞核移植方法外,科学家们努力寻求从法律、道德、伦理等方面更易被人们接受的新方法.近年来多能干细胞与体细胞融合、多能细胞的抽提物与体细胞共孵育以及将编码多潜能因子的基因导入体细胞中等方法都能使体细胞核发生重新编程,将已分化的体细胞转变为一种全能的胚胎状态.主要论述了生殖细胞及早期胚胎、体细胞核移植和其他形式的体细胞核重编程的表观遗传学的改变,对表观遗传学的深入研究将有助于我们进一步了解体细胞核重编程的机制,从而不断完善各种技术促进供体核的重新编程,使其更好地应用于基础研究和生产实践.

关键词：重编程表观遗传学甲基化