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蔊菜病毒诱导基因沉默体系构建

华北农学报 2013年第6期28卷 65-70页

作者：张怡徐克东杨松李豪曹鹏魏森韦丹丹李成伟周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466001

构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建... 详细信息

构建蔊菜的病毒诱导基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系,旨在建立蔊菜的快速基因功能验证的方法。通过RT-PCR扩增出棉花、大豆、拟南芥的1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)基因片段,并将其分别构建到烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的VIGS载体,通过农杆菌GV3101侵染蔊菜并观察蔊菜的表型变化。结果显示,3种不同的CLA基因所侵染的蔊菜均出现不同程度的白化现象,半定量RT-PCR检测显示CLA的mRNA被显著降解,表明成功构建了蔊菜的VIGS体系。

关键词：病毒诱导的基因沉默蔊菜 CLA基因烟草脆裂病毒

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植物叶片衰老的表观遗传调控

植物学报 2014年第6期49卷 729-737页

作者：杨同文李成伟河南周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室周口466001

叶片是植物重要的光合器官,它的衰老由外界环境刺激和内源发育信号所启动,复杂的基因调控网络参与衰老过程的精确调控。最新研究表明,植物通过对基因表达的重编程,在表观遗传水平上调节着叶片衰老过程。该文简要介绍了表观遗传的分子机... 详细信息

叶片是植物重要的光合器官,它的衰老由外界环境刺激和内源发育信号所启动,复杂的基因调控网络参与衰老过程的精确调控。最新研究表明,植物通过对基因表达的重编程,在表观遗传水平上调节着叶片衰老过程。该文简要介绍了表观遗传的分子机制,在此基础上重点综述了组蛋白修饰、染色质重塑、DNA甲基化及小RNAs途径对叶片衰老调控的最新研究进展,同时讨论了该领域存在的问题和未来研究方向。

关键词：叶片衰老表观遗传调控染色质重塑小RNA途径

病毒诱导的基因沉默在番茄功能基因组学研究中的应用进展

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园艺学报 2014年第3期41卷 564-576页

作者：杨同文武安泉盛东峰李成伟河南周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466001

对近年来病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术在番茄果实发育、激素调控、植物—病原物互作、防御害虫及非生物胁迫应答相关基因功能研究方面的进展进行了综述。

关键词：番茄 VIGS 果实发育植物-病原物互作

河南省部分地区小麦黑粉病菌的鉴定和系统进化分析

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华北农学报 2014年第1期29卷 213-216页

作者：张怡张福丽曹鹏魏森韦丹丹刘柯周晗李成伟周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466001

为了对小麦黑粉病及时预报与防治,以采自河南省南阳、周口和平顶山(2个)的4个病原菌菌系为材料,采用传统的形态学鉴定法和ITS序列分析相结合,确定来自南阳和平顶山市区的病原菌菌系为小麦散黑粉菌,来自周口和平顶山郏县的病原菌菌系属... 详细信息

为了对小麦黑粉病及时预报与防治,以采自河南省南阳、周口和平顶山(2个)的4个病原菌菌系为材料,采用传统的形态学鉴定法和ITS序列分析相结合,确定来自南阳和平顶山市区的病原菌菌系为小麦散黑粉菌,来自周口和平顶山郏县的病原菌菌系属于小麦秆黑粉菌。根据ITS序列进行系统进化分析发现,南阳和平顶山市区的散黑粉菌与周口和平顶山郏县的秆黑粉菌分别聚在2个进化枝上。河南省流行的小麦黑粉病可能由散黑粉菌和秆黑粉菌共同导致。

关键词：河南省小麦散黑粉菌小麦秆黑粉菌 ITS序列进化树

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一种快速高效提取酵母质粒的方法

食品与生物技术学报 2013年第11期32卷 1194-1198页

作者：张怡刘坤曹鹏魏森韦丹丹杜建李鹏坤李成伟周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466001

质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法... 详细信息

质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法和试剂盒法提取的酵母质粒,在产率、纯度和对后续实验的影响等方面进行了比较。结果表明,与另外两种方法比较,玻璃珠液氮法提取酵母质粒具有效率高、质量好、成本低、时间短、操作简单的优点,可作为实验室规模化提取酵母质粒的常用方法。

关键词：酵母菌质粒提取玻璃珠液氮法

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河南省周口地区瓜类白粉病的分子鉴定与分析

华中师范大学学报（自然科学版） 2013年第6期47卷 830-835页

作者：张怡徐克东陈佩佩段素娟孟娉乔月娥李成伟周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466000

对河南周口地区的瓜类白粉病进行了分子鉴定及分析.分别对黄瓜、甜瓜、葫芦、南瓜白粉病菌进行了扫描电子显微形态观察、核糖体DNA转录间隔区(ITS)克隆、测序及进化树分析.结果表明,周口地区的4种瓜类白粉病菌属于Sphaerotheca fuligin... 详细信息

对河南周口地区的瓜类白粉病进行了分子鉴定及分析.分别对黄瓜、甜瓜、葫芦、南瓜白粉病菌进行了扫描电子显微形态观察、核糖体DNA转录间隔区(ITS)克隆、测序及进化树分析.结果表明,周口地区的4种瓜类白粉病菌属于Sphaerotheca fuliginea,系统进化发现瓜类白粉病菌与豆类、美女樱、水母柱树白粉病菌种间差异小,同时发现该地区的瓜类白粉病菌与美洲、日本、澳大利亚、英国白粉病亲缘关系比较近,推测瓜类白粉病菌的进化与地域没有直接关系,而是与其自身的小种进化有关.

关键词：瓜类白粉病菌分子鉴定转录间隔区进化树

甘蓝型黄子白花油菜恢复系RW16的选育与应用

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湖北农业科学 2012年第15期51卷 3163-3166页

作者：王俊生范小芳李成伟谭光轩周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466000

以显性白花油菜W62为母本与显性黄子油菜H440杂交、回交,经多代连续定向选择育成了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)双低恢复系RW16,具有黄子和白花的特性。该恢复系具有较好的抗性和良好的品质性状,其芥酸含量平均为0.84%,硫甙含量平均为... 详细信息

以显性白花油菜W62为母本与显性黄子油菜H440杂交、回交,经多代连续定向选择育成了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)双低恢复系RW16,具有黄子和白花的特性。该恢复系具有较好的抗性和良好的品质性状,其芥酸含量平均为0.84%,硫甙含量平均为26.71μmol/g,含油量平均为46.78%,符合国家优质标准,属于高含油量油菜品种。该恢复系产量一般配合力良好,配制的杂种F1代子粒暗黄色,植株花色乳白,含油量和产油量杂种优势明显,普遍高于对照秦优7号。

关键词：甘蓝型油菜(Brassica napus L.) 黄子白花恢复系选育

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甘蓝型黄籽油菜高油品系下胚轴再生体系研究

河南农业科学 2012年第1期41卷 45-48页

作者：王俊生范小芳谭光轩李成伟周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466000

为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系,育成高含油量双低油菜杂交种,以2个不同甘蓝型黄籽油菜高油双低品系(GY1、GY2)下胚轴为外植体,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA质量浓度、预培养时间、分化培养基中NAA和6-BA质量浓度组... 详细信息

为获得甘蓝型油菜高含油量双低恢复系,育成高含油量双低油菜杂交种,以2个不同甘蓝型黄籽油菜高油双低品系(GY1、GY2)下胚轴为外植体,采用正交设计,研究了预培养基中2,4-D和6-BA质量浓度、预培养时间、分化培养基中NAA和6-BA质量浓度组合以及AgNO3质量浓度5种不同因素对其下胚轴芽苗再生的影响。结果表明,除AgNO3质量浓度外,其他4种因素对2个油菜品系下胚轴芽苗再生均具有显著或极显著影响。2个油菜品系间和不同处理间的芽苗再生频率差异均达显著水平,且油菜品系与处理间存在明显互作效应。4d苗龄,在MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L预培养基上预培养3d后,在添加NAA 0.05mg/L+6-BA 2.0mg/L的分化培养基中芽苗再生频率最高,GY1和GY2的下胚轴芽再生频率分别为45.2%和41.7%。初步建立了甘蓝型油菜高油品系的下胚轴再生体系,为高含油量油菜遗传转化奠定了基础。

关键词：甘蓝型油菜黄籽油菜高含油量下胚轴芽再生频率再生体系

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大豆胞囊线虫VIGS载体的构建与鉴定

华北农学报 2012年第3期27卷 223-226页

作者：张怡阮九霄马晓萌傅露露乔月娥段素娟孟娉李成伟周口师范学院生命科学系植物遗传与分子育种重点实验室河南周口466001

拟克隆大豆胞囊线虫肌钙蛋白(Hg-tnc)和酰胺样多肽(Hg-flp)基因的部分片段,构建胞囊线虫的病毒诱导基因沉默体系(VIGS),以期为大豆抗胞囊线虫抗性品种的培育及胞囊线虫基因功能验证的研究奠定理论基础。利用RT-PCR方法从大豆胞囊线虫中... 详细信息

拟克隆大豆胞囊线虫肌钙蛋白(Hg-tnc)和酰胺样多肽(Hg-flp)基因的部分片段,构建胞囊线虫的病毒诱导基因沉默体系(VIGS),以期为大豆抗胞囊线虫抗性品种的培育及胞囊线虫基因功能验证的研究奠定理论基础。利用RT-PCR方法从大豆胞囊线虫中克隆出目的基因,电泳检测表明,克隆的Hg-tnc基因和Hg-flp基因部分片段分别约为1 000 bp和700 bp。将目的基因连接到烟草脆裂病毒载体pYY13上,转化大肠杆菌,利用PCR进行初步鉴定后进行序列测定。结果表明,大豆胞囊线虫Hg-tnc基因和Hg-flp基因已插入到pYY13载体上,VIGS载体构建成功。

关键词：病毒诱导的基因沉默胞囊线虫肌钙蛋白酰胺样多肽烟草脆裂病毒