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日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1998年第4期16卷 283-286页

作者：刘世国石佑恩韩家俊邓伟文河南新乡医学院寄生虫学教研室同济医科大学寄生虫学教研室

目的：了解日本血吸虫三类循环抗原（ＣＡｇ）在感染家兔的动态变化及治疗后的消长情况。方法：制备日本血吸虫的三株单抗，以辣根过氧化物酶标记，分别建立检测日本血吸虫肠相关抗原（ＧＡＡ）、膜相关抗原（ＭＡＡ）和可溶性虫卵抗原... 详细信息

目的：了解日本血吸虫三类循环抗原（ＣＡｇ）在感染家兔的动态变化及治疗后的消长情况。方法：制备日本血吸虫的三株单抗，以辣根过氧化物酶标记，分别建立检测日本血吸虫肠相关抗原（ＧＡＡ）、膜相关抗原（ＭＡＡ）和可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的斑点酶联免疫吸附试验（ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），观察感染日本血吸虫家兔血中三类抗原的动态变化情况。结果：家兔感染后第４ｗｋ，有３９％家兔血中ＧＡＡ呈阳性反应，而仅８．６％家兔ＭＡＡ、ＳＥＡ呈阳性反应，第８ｗｋ三类ＣＡｇ均呈阳性反应，并于第１０ｗｋ左右达高峰。未治疗组家兔直至感染后第２７ｗｋ，血中三类ＣＡｇ一直维持较高水平。感染后第９ｗｋ家兔接受吡喹酮治疗，治疗后第４ｗｋ，ＣＡｇ水平开始下降，治疗后第６ｗｋ有１０％家兔ＳＥＡ阴转，治疗后第８ｗｋ，ＧＡＡ阴转率为２０％，ＳＥＡ为７０％，ＭＡＡ为８０％，治疗后第１４ｗｋ除１例外，三类ＣＡｇ全部阴转。结论：ＧＡＡ早期诊断效果较好，而ＭＡＡ和ＳＥＡ在治疗后较ＧＡＡ消失快。

关键词：日本血吸虫循环抗原动态观察疗效

肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 84-85页

作者：明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071

　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPM... 详细信息

　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.培养第4天,实验Ⅰ组和Ⅲ组细胞分别在含3μg/ml MNNG的培养基中培养48小时,彻底清洗后继续用含20%小牛血清的RPMI-1640培养.实验Ⅱ组细胞用不含MNNG的培养基处理相同时间.……

关键词：肝基质日本血吸虫成虫培养细胞细胞培养基小牛血清实验盖玻片培养基处理细胞增殖糖类物质成虫细胞细胞内细胞分同作用抗生素清洗接种附加方法

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软体动物模式识别受体研究进展

中国血吸虫病防治杂志 2015年第4期27卷 440-443页

作者：高倩赵琴平马晓雪董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室

软体动物建立了复杂的固有免疫系统以对抗病原生物体的入侵。模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是软体动物启动固有免疫应答的首要分子,其种类甚多,如Toll样受体、C型凝集素及半乳凝素、脂多糖葡聚糖结合蛋白、补体相... 详细信息

软体动物建立了复杂的固有免疫系统以对抗病原生物体的入侵。模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是软体动物启动固有免疫应答的首要分子,其种类甚多,如Toll样受体、C型凝集素及半乳凝素、脂多糖葡聚糖结合蛋白、补体相关分子和肽聚糖识别蛋白等。PRRs具有多种生物学特性,在软体动物的固有免疫中发挥着重要作用。本文对软体动物PRRs的研究进展作一综述。

关键词：软体动物模式识别受体固有免疫 Toll样受体凝集素半乳凝素脂多糖葡聚糖结合蛋白补体相关蛋白肽聚糖识别蛋白

湖北钉螺髓样分化因子88的鉴定及其在抗血吸虫感染固有免疫中的地位

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第2期29卷 174-181页

作者：高倩李艳伟黄文铃赵琴平董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

目的克隆、鉴定湖北钉螺(Oncomelania hupensis)髓样分化因子88(MyD88)基因,并通过观察感染日本血吸虫前后钉螺各组织中MyD88 m RNA表达水平的变化,探讨其在抗血吸虫感染固有免疫中的地位。方法通过c DNA末端快速扩增技术(Rapid amplifi... 详细信息

目的克隆、鉴定湖北钉螺(Oncomelania hupensis)髓样分化因子88(MyD88)基因,并通过观察感染日本血吸虫前后钉螺各组织中MyD88 m RNA表达水平的变化,探讨其在抗血吸虫感染固有免疫中的地位。方法通过c DNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)获取湖北钉螺MyD88全长c DNA序列,预测其蛋白结构域,并进行多序列比对及保守区域分析,构建系统进化树。使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)技术检测MyD88基因在血吸虫感染前后钉螺各组织中的表达变化。结果湖北钉螺MyD88全长c DNA开放阅读框(Open reading frame,ORF)1 406 bp,编码468个氨基酸,蛋白N端和C端分别存在死亡结构域和TIR(Toll/interlrukin-1 receptor,TIR)结构域。与其他软体类MyD88氨基酸序列比对,相似性为38%~52%;系统进化树提示钉螺MyD88和光滑双脐螺MyD88起源于共同的祖先基因。q PCR结果显示,检测的所有组织中均有MyD88 m RNA的表达,其中血淋巴细胞中表达最为丰富。感染日本血吸虫后,除钉螺头足外,MyD88 m RNA在肝脏、生殖腺、血淋巴细胞等组织中均有上调表达,以血淋巴细胞中上调表达最显著。结论湖北钉螺存在依赖MyD88的TLRs(Toll-like receptors,TLRs)信号通路,MyD88分子可能在钉螺对抗日本血吸虫感染的固有免疫中发挥重要作用。

关键词：湖北钉螺日本血吸虫固有免疫 TLR信号通路髓样分化因子88

日本血吸虫酚氧化酶诱导免疫对小鼠保护性的初步研究

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中国地方病学杂志 2004年第4期23卷 304-306页

作者：蔡国斌何立蒋明森章莹赵琴平杨孟祥武汉大学医学院人体寄生虫学教研室 430071

目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用。方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后... 详细信息

目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用。方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶。经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立3组进行保护性免疫实验A组(实验组)、B组(佐剂对照组)和C组(空白对照组)。初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,最后1次免疫后10d按常规收集各组免疫血清。常规ELISA法测定免疫血清效价。然后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染。6周后,收集成虫计数,常规计算减虫率并检测肝脏虫卵负荷。结果ELISA法测定的酚氧化酶免疫小鼠血清效价在1∶1200以上。日本血吸虫酚氧化酶粗抗原免疫小鼠,其雌虫、雄虫和总虫数的减虫率分别为53.27%、26.76%和39.53%,与C组相比,差异均有极显著意义(P<0.01)。A组减卵率为50.75%,与C组相比,差异有极显著意义(P<0.01)。结论日本血吸虫酚氧化酶具有抗原性,能诱导宿主抗血吸虫感染免疫保护作用。其诱导保护性免疫的机制尚待进一步研究。

关键词：日本血吸虫酚氧化酶小鼠免疫保护性抗原性

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医学吸虫抗氧化酶家族的研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第4期26卷 313-317页

作者：蔡国斌董惠芬蒋明森武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

需氧生物体在正常生理代谢过程中会产生活性氧族(reactive oxygen species,ROS),但过多的ROS可引起体内多种氧化损伤,因此这类生物体都具备一套完善的防御体系,抗氧化酶是其中一个重要的组成部分。对于医学吸虫,不仅需要抗氧化酶清除正... 详细信息

需氧生物体在正常生理代谢过程中会产生活性氧族(reactive oxygen species,ROS),但过多的ROS可引起体内多种氧化损伤,因此这类生物体都具备一套完善的防御体系,抗氧化酶是其中一个重要的组成部分。对于医学吸虫,不仅需要抗氧化酶清除正常生理代谢中产生的ROS,还要抵抗宿主免疫系统来源的ROS引起的损伤。了解医学吸虫抗氧化酶家族的结构和特性,有助于对其生殖生理的研究,以及新型药物和疫苗的开发。本文综述近年来对医学吸虫谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及抗氧化蛋白(peroxire-doxin,PRx)等抗氧化酶家族的研究进展。

关键词：抗氧化酶医学吸虫活性氧族

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1993年第4期11卷 241-243页

作者：沈定文李雍龙韩家俊石佑恩咸宁医学院寄生虫学教研室咸宁437100 同济医科大学寄生虫学教研室武汉430030

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且... 详细信息

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。

关键词：血吸虫分离纯化保护性免疫

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一种获得高纯度包涵体蛋白的简便方法

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 399-400,F0003页

作者：刘镕钟沁萍蒋明森董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

以日本血吸虫SjBMP基因部分编码序列构建SjBMP-pET-28a(+)重组原核表达质粒,并转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3)进行原核表达。将经过鉴定的目的蛋白rSjBMP以包涵体形式表达的诱导菌样通过Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和十二烷基硫酸钠-聚... 详细信息

以日本血吸虫SjBMP基因部分编码序列构建SjBMP-pET-28a(+)重组原核表达质粒,并转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3)进行原核表达。将经过鉴定的目的蛋白rSjBMP以包涵体形式表达的诱导菌样通过Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)切胶再纯化。用该纯化蛋白制备免疫血清,用蛋白质印迹(Western blotting)检测其免疫反应性。结果显示,经Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和SDS-PAGE切胶再纯化,获得高纯度的目的蛋白,回收率>11.0%。用该纯化蛋白免疫家兔制备免疫血清,获得的血清效价高于1∶1 280;Western blotting检测结果表明,用该免疫血清去识别表达的重组蛋白,出现特异的单一条带,表明该纯化蛋白仍保持其抗原性,可用于免疫学相关实验研究。因此,SDS-PAGE切胶纯化后电渗、透析回收是纯化重组包涵体蛋白有效、简便的方法。

关键词：重组蛋白原核表达包涵体纯化

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导肝纤维化相关miRNA的变化

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第2期29卷 192-196页

作者：王欢卢雅静高彦茹王舒弘周蕊董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

目的研究与肝纤维化相关miRNA(miR)在日本血吸虫可溶性虫卵抗原刺激小鼠肝细胞(AML12)后的表达情况,为阐明血吸虫感染导致肝纤维化的机制奠定基础。方法使用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigens,SEA)刺激AML12后,采用定量PC... 详细信息

目的研究与肝纤维化相关miRNA(miR)在日本血吸虫可溶性虫卵抗原刺激小鼠肝细胞(AML12)后的表达情况,为阐明血吸虫感染导致肝纤维化的机制奠定基础。方法使用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigens,SEA)刺激AML12后,采用定量PCR检测AML12中的miR-122、miR-182、miR-23b、miR-27b及KH型剪切调控蛋白(KHtype splicing regulatory protein,KSRP)的m NA水平,以Western blotting检测KSRP蛋白的表达变化;分别用anti-miR-27b、miR-27b precursor转染AML12后,以定量PCR和Western blotting检测AML12中KSRP的m NA和蛋白水平。结果经SEA刺激后,AML12中miR-182、miR-23b及miR-27b m RNA水平下降(P均<0.05),而细胞中miR-122 m RNA与KSRP的m RNA水平及蛋白表达水平均上调(P均<0.05)。此外,anti-miR-27b与miR-27b precursor转染组KSRP的m RNA水平均无明显变化,但anti-miR-27b组细胞中KSRP的蛋白表达增加,miR-27b precursor组KSRP的蛋白表达降低。结论SEA刺激AML12导致诸多与肝纤维化相关的miRNA及KSRP的表达发生变化,其中miR-27b可调控KSRP的表达,这为进一步研究血吸虫感染导致的肝纤维化的分子机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫肝纤维化 miRNA 可溶性虫卵抗原肝细胞