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Nest-PCR和PCR-RFLP在恶性疟原虫地理株基因分型及多态性研究中的应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第2期26卷 95-98页

作者：张青锋胡晶莹杨月欣潘卫庆同济大学传染病与疫苗研究所上海200092

目的分析套式PCR(nest-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法在恶性疟原虫地理株裂殖子表面蛋白(MSP2)基因多态性研究中的分型效率及特异性。方法分别在海南省三亚市和云南省腾冲县等地通过静脉采血法采集疟疾患者血样98份,... 详细信息

目的分析套式PCR(nest-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法在恶性疟原虫地理株裂殖子表面蛋白(MSP2)基因多态性研究中的分型效率及特异性。方法分别在海南省三亚市和云南省腾冲县等地通过静脉采血法采集疟疾患者血样98份,其中恶性疟88份,间日疟10份。另从上海地区的健康人群中抽取10份血样作为阴性对照。用nest-PCR和PCR-RFLP方法分别对疟原虫地理株进行MSP2等位基因分型,并对分型结果进行归纳和比较分析。结果常规nest-PCR方法对于恶性疟原虫地理株MSP2等位基因的总检出效率为79.8%(166/208),其中,对于FC27家族等位基因的检出效率为92.7%(101/109),但对3D7家族等位基因的检出率仅为65.7%(65/99),且无法鉴定具体的等位基因。PCR-RFLP分型法检出效率比nest-PCR法提高了20.2%,且特异性好。结论PCR-RFLP相对于常规的nest-PCR分型法具有检出效率、分辨率和特异性皆高的优点,可以鉴定地理株中具体的等位基因类型。

关键词：恶性疟原虫 MSP-2 RFLP 等位基因分型

恶性疟原虫ApiAP2蛋白与var基因内含子序列相互作用的体内鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第1期32卷 1-5页

作者：韩世通张青锋潘卫庆同济大学传染病与疫苗研究所上海200092

目的鉴定恶性疟原虫ApiAP2蛋白家族成员PF3D7_1107800与var基因内含子保守序列(iNPE)存在体内相互结合作用。方法提取恶性疟原虫标准株3D7基因组DNA,PCR扩增PF3D7_1107800基因5′端片段。扩增产物经双酶切后连接入原核表达载体pGex-4T-1... 详细信息

目的鉴定恶性疟原虫ApiAP2蛋白家族成员PF3D7_1107800与var基因内含子保守序列(iNPE)存在体内相互结合作用。方法提取恶性疟原虫标准株3D7基因组DNA,PCR扩增PF3D7_1107800基因5′端片段。扩增产物经双酶切后连接入原核表达载体pGex-4T-1,重组质粒转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况,谷胱甘肽亲和层析纯化重组蛋白。20只BALB/c小鼠分为重组蛋白免疫组和PBS对照组,每组10只,免疫组小鼠每鼠背部皮下注射纯化的重组蛋白100μl(约含蛋白20μg),对照组小鼠注射等量PBS,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周处死小鼠,收集血清。重组纯化蛋白G(Protein G)纯化2组小鼠血清,Western blotting鉴定免疫血清抗体情况。染色质免疫沉淀(ChIP)获得恶性疟原虫DNA,qPCR检测PF3D7_1107800蛋白抗体组在C类var基因的内含子区域的富集情况。结果 PCR扩增PF3D7_1107800基因5′端片段结果显示,在约345 bp处有一特异性条带,与理论值相符。重组表达载体pGEX-4T-1-PF3D7_1107800N经测序表明构建成功。重组蛋白经诱导表达和纯化后,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,所获的重组蛋白为目的蛋白,其相对分子质量(Mr)约为37 000,与预测值一致。重组蛋白免疫小鼠后,获得抗体血清,Western blotting分析结果显示,血清中抗体可与重组蛋白特异结合,在约Mr200 000处有一目的条带,与预测值一致。ChIP实验产物经qPCR分析显示,在var基因内含子区域的相对富集程度为内参seryl-tRNA合成酶基因区域的2倍以上。结论恶性疟原虫ApiAP2家族成员PF3D7_1107800可在体内与C类var基因内含子区域结合。

关键词：恶性疟原虫 ApiAP2 var基因内含子调控蛋白

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单一性别日本血吸虫尾蚴的获得

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第1期37卷 111-114页

作者：魏梦甜王阳张璧辉孙军同济大学医学院传染病与疫苗研究所上海200092

阐明人工制备阳性钉螺释放日本血吸虫尾蚴性别类型的规律和特点,为需要获取单一性别尾蚴的研究提供理论依据。通过毛蚴对钉螺"一对一"(1只毛蚴感染1只钉螺)和"多对一"(约10只毛蚴感染1只钉螺)感染方式分别制备阳性钉螺。分别用单只钉螺... 详细信息

阐明人工制备阳性钉螺释放日本血吸虫尾蚴性别类型的规律和特点,为需要获取单一性别尾蚴的研究提供理论依据。通过毛蚴对钉螺"一对一"(1只毛蚴感染1只钉螺)和"多对一"(约10只毛蚴感染1只钉螺)感染方式分别制备阳性钉螺。分别用单只钉螺释放的尾蚴感染单只小鼠, 3周后收集小鼠体内的日本血吸虫童虫,通过显微镜观察鉴定童虫的性别,提取童虫DNA,用RRPS、 M5A、 MPA、 2AAA、 MF1、 J5N等6对微卫星引物进行PCR扩增,扫板分析短串联重复(STR)位点的多态性,比较每一个钉螺所释放全部尾蚴所发育成的童虫基因型差异。镜检结果表明,"一对一"感染的4只小鼠所收集的血吸虫童虫, 1只为全雌虫, 3只为全雄虫;"多对一"感染的43只小鼠所收集的血吸虫童虫, 19只为全雌虫(44.2%), 7只为全雄虫(16.3%), 17只为雌雄虫共存(39.5%)。各虫体DNA样品, PCR产物琼脂糖电泳的结果和STR扫板分析结果基本一致,但是PCR产物直接电泳分析结果不能精确显示扩增对象的多态性。STR扫板分析结果显示,"一对一"感染的虫体,STR的峰型相似,提示基因型相似,但是同一钉螺来源的不同虫体间仍存在细微差异;"多对一"感染的虫体,STR样品峰型有较大差异,提示样品具有不同的基因型,其中单一钉螺释放的所有尾蚴发育成的童虫有如下特点:雌雄共存,但可分为雌多雄少、雌少雄多和雌雄对等3种情况;全雄虫,基因型相同或不同;全雌虫,基因型相同或不同。总之,毛蚴"一对一"感染钉螺,可以获得基因型一致的、单一性别的尾蚴;混合感染的"多对一"感染方式也可得到单一性别尾蚴,但单性尾蚴基因型不一致。

关键词：日本血吸虫单性尾蚴毛蚴钉螺

基于表面等离激元共振的液体活检技术研究进展

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中国激光 2025年

作者：曹健荣李法君王秀琦朱锦锋徐国兵潘思骏厦门大学柔性电子(未来技术)研究院传染病疫苗研发全国重点实验室翔安创新实验室厦门大学电子科学与技术学院福建医科大学附属协和医院胸外科胸心外科福建省高校重点实验室(福建医科大学) 福建省胸部肿瘤临床医学研究中心胸外科国家临床重点专科

随着精准医学的迅速发展，液体活检技术正逐渐成为疾病筛查、诊断和监测的重要工具。通过分析体液中的循环生物标志物，如细胞外囊泡、循环游离核酸、蛋白质、代谢物和循环肿瘤细胞，液体活检不仅提供了一种无创的疾病检测手段，还能实... 详细信息

随着精准医学的迅速发展，液体活检技术正逐渐成为疾病筛查、诊断和监测的重要工具。通过分析体液中的循环生物标志物，如细胞外囊泡、循环游离核酸、蛋白质、代谢物和循环肿瘤细胞，液体活检不仅提供了一种无创的疾病检测手段，还能实现对疾病进展的实时监测。在众多液体活检技术中，表面等离激元共振（SPR）技术因其响应速度快、检测灵敏度高、实时监测能力强、多模态检测特性以及微纳结构的可调性，展现出显著的应用潜力。本文综述了基于SPR的液体活检技术的最新研究进展，系统分析了其技术原理及其在循环生物标志物检测中的应用，特别关注细胞外囊泡这一新兴领域，并深入探讨了当前技术面临的挑战与未来发展趋势。

关键词：表面等离激元共振液体活检精准诊疗循环生物标志物细胞外囊泡

一种改良的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白分离方法的建立

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中国病原生物学杂志 2013年第10期8卷 874-877页

作者：韩世通张青锋潘卫庆同济大学传染病与疫苗研究所上海200092

目的建立一种改良的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白分离方法，并对分离的蛋白组分进行分析和鉴定。方法分别用含不同盐浓度的裂解缓冲液和不同研磨次数提取核蛋白和胞浆蛋白，并利用针对不同组分特异性蛋白的抗体进行Westernblot，分析分... 详细信息

目的建立一种改良的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白分离方法，并对分离的蛋白组分进行分析和鉴定。方法分别用含不同盐浓度的裂解缓冲液和不同研磨次数提取核蛋白和胞浆蛋白，并利用针对不同组分特异性蛋白的抗体进行Westernblot，分析分离效果。结果含50mmol／LNaCl的裂解缓冲液和研磨100～150次为分离核蛋白和胞浆蛋白最佳条件，恶性疟原虫醛缩酶胞浆蛋白和组蛋白3核蛋白的抗体Westernblot、抗GFP抗体Westernblot及活细胞免疫荧光检测均表明该方法效果良好。结论建立了一种快速、有效的恶性疟原虫核蛋白和胞浆蛋白的分离方法（裂解液盐浓度为50mmol／L，研磨100150次），为研究恶性疟原虫蛋白的胞内分布以及蛋白质／蛋白质／核酸相互作用提供了重要的技术手段。

关键词：疟原虫,恶性核蛋白胞浆蛋白

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日本血吸虫色素的形成及其生物学意义

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第4期35卷 402-406页

作者：孙军同济大学医学院传染病与疫苗研究所上海200092

本文总结了日本血吸虫(Schistosoma japonicum)色素的形态结构、形成与分解的特点,提出血吸虫色素的形成不是红细胞有毒代谢产物血红素的解毒方式,而是红细胞内血红素铁向虫卵转运的运输方式,以满足大量虫卵发育过程中对铁的需求这一论... 详细信息

本文总结了日本血吸虫(Schistosoma japonicum)色素的形态结构、形成与分解的特点,提出血吸虫色素的形成不是红细胞有毒代谢产物血红素的解毒方式,而是红细胞内血红素铁向虫卵转运的运输方式,以满足大量虫卵发育过程中对铁的需求这一论点,并结合当前人们对血吸虫色素形态、形成方式及其生物学意义的认识进行了综述。

关键词：日本血吸虫色素铁

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寄生虫抗恶性肿瘤的研究新进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第4期32卷 308-310,315页

作者：王素文孙军同济大学医学院传染病与疫苗研究所免疫与病原生物学教研室上海200092

寄生虫诱导的机体应答反应可在一定程度上抑制恶性肿瘤(文中的"肿瘤"皆指恶性肿瘤)细胞的增长、促进肿瘤细胞凋亡。针对该特点进行深入研究有利于阐明生物的防瘤作用,且寄生虫的免疫逃避机制也可为肿瘤相关研究提供借鉴。另外,有些抗寄... 详细信息

寄生虫诱导的机体应答反应可在一定程度上抑制恶性肿瘤(文中的"肿瘤"皆指恶性肿瘤)细胞的增长、促进肿瘤细胞凋亡。针对该特点进行深入研究有利于阐明生物的防瘤作用,且寄生虫的免疫逃避机制也可为肿瘤相关研究提供借鉴。另外,有些抗寄生虫药物也具有抗肿瘤作用,提示抗肿瘤药物的研发有可能从抗寄生虫药物的研究中得到启示。

关键词：寄生虫抗肿瘤

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鲍曼不动杆菌相关耐药机制及新型治疗手段

西南医科大学学报 2025年第01期 97-104页

作者：史欣玥张定宇华中科技大学同济医学院附属武汉金银潭医院湖北省传染病临床医学研究中心中国医学科学院武汉传染性疾病诊治研究中心中国科学院武汉病毒研究所&武汉市金银潭医院感染性疾病与健康联合实验室华中科技大学同济医学院附属协和医院重症医学科

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生... 详细信息

鲍曼不动杆菌在重症监护病房中是一种常见的多重耐药病原体,对危重患者构成显著威胁。面对有限的有效抗生素选择,鲍曼不动杆菌感染治疗面临诸多挑战,导致较高的感染率和死亡率。其耐药性归因于多种机制,包括外排泵作用、靶点突变、抗生素修饰酶的活化、生物膜形成及群体感应系统的调控。随着世界卫生组织将不动杆菌列为优先研发抗生素病原体,开发新抗生素的紧迫性显而易见。本文主要关注当前新型抗生素的开发、非传统抗菌药物的研究、潜在的疫苗以及多模式感染控制策略的推进。这些方法既是预防措施,也是应对抗生素耐药性不断升级挑战的替代治疗手段。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药机制多模式感控

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氯喹在体外对疟色素形成的条件性抑制

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第2期27卷 120-124页

作者：孙军陈波龙燕妤同济大学传染病与疫苗研究所同济大学医学院上海200092 同济大学材料科学与工程学院上海200092 同济大学医学院上海200092

目的研究在体外系统中氯喹对疟原虫疟色素形成抑制作用的特点。方法利用光镜和分光光度法观察和检测不同浓度乙酸钠溶液(0.5、1、1.5和2mol/L)在不同pH值(pH4.0、4.2、4.4、4.6、4.8和5.0)条件下,氯喹对疟色素基质形态及其生成量的影响... 详细信息

目的研究在体外系统中氯喹对疟原虫疟色素形成抑制作用的特点。方法利用光镜和分光光度法观察和检测不同浓度乙酸钠溶液(0.5、1、1.5和2mol/L)在不同pH值(pH4.0、4.2、4.4、4.6、4.8和5.0)条件下,氯喹对疟色素基质形态及其生成量的影响,观察疟色素形成基质的形态变化规律。同时,用X-射线衍射分析不同pH条件下氯喹对色素晶体的结晶度及晶体大小的影响。结果氯喹抑制疟色素形成的临界pH值随乙酸钠浓度的升高而升高,从0.5mol/L乙酸钠时的pH4.2到2mol/L时的pH4.8。X-射线衍射分析表明,环境pH值由4.4提高到4.8,疟色素晶体的结晶度和晶体大小也分别从6.93%和357下降到6.32%和264。当pH值升高到5.0时,β-hematin晶体不再形成。氯喹可降低相同pH条件下β-hematin晶体的结晶度和晶体大小。形态学观察结果与之一致。结论体外实验表明,氯喹仅在疟色素形成处于或大于临界pH时,才表现出抑制疟色素形成的作用。

关键词：疟原虫疟色素氯喹临界pH X-射线衍射